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       【关键词】  排毒
        摘要：目的：观察排毒双调综合疗法对大鼠慢性肾功能衰竭的治疗作用及其可能的作用机理。方法：采用大鼠5/6肾切除动物模型，分为正常组、病理组、灌胃组、灌胃加灌肠及综合疗法组，观察各组大鼠治疗前后一般状况、血红蛋白(HGb)、肾功能(BUN、Scr)、外周血白细胞CD3＋ T细胞、CD4＋ T细胞、CD8＋ T细胞的百分比及CD4＋/CD8＋的比值的变化。结果：综合疗法组较病理组、灌胃组、灌胃加灌肠组外周血白细胞中CD3＋ T细胞、CD4＋ T细胞、CD4＋/CD8＋比例均明显升高(P＜0.05)，BUN、Scr亦较前述三组明显改善(P＜0.01或P＜0.05)，一般状况及贫血改善情况等也好于前述三组。结论：排毒双调综合疗法能减轻并延缓慢性肾衰竭的病理进展，且较单纯灌胃、灌胃加灌肠疗效为佳，其作用机理可能与改善细胞免疫功能有关。
        关键词：排毒双调综合疗法；慢性肾衰竭；5/6肾切除大鼠CRF模型；细胞免疫
        Experimental Uesearch on the Effect of Paidu-Shuangtiao Synthetic Therapy on the Immune Function of CRF Cells of Rats
        LI Xiaohui, DONG Zhenghua, ZHAO Runshuan, ZHAO Tiancai, PAN Long, ZENG Fuhai, YANG Jingfeng
        (Shanxi University of TCM, Xianyang, Shanxi 712083，China)
        Abstract:Objective:To observe the effect and the mechanism of Pai Du and Shuang Tiao synthetic therapy to the rats with chronic renal failure(CRF).Methods:Use experimental CRF rats with 5/6 nephrectomy animal model. Rats were divided into control group(A group), model group(B group), the single oral application therapy group(C group), the oral application＋enema therapy group(D group)and synthetic therapy group (E group). The contents of HGb, blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine(Scr), the detection of percentage of CD3＋ T cell,CD4＋ T cell, CD8＋ T cell and CD4＋/CD8＋ were analyzed. Results:The percentage of CD3＋ T cell, CD4＋ T cell,CD4＋/CD8＋ is significantly improved in group E than that of other groups(P＜0.05 ,P＜0.05 ,P＜0.05 );Scr and BUN of group E is lower than that of group B、C、D(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05 ). Conclusion:Pai Du and Shuang Tiao synthetic therapy is able to improve cell mediated immunity and retard the progress of CRF ,and compared with single oral application, oral application ＋ enema, the curative of synthetic therapy is the best.
        Key words:Pai Du and Shuang Tiao synthetic therapy;Chronic renal failure;5/6 nephrectomy animal model;Cell mediated immunity
        慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)是多种肾脏疾病发展的最终归宿，病情严重，常呈进行性恶化，难以逆转，如何延缓其进展，保护残余肾功能，始终是肾脏病学界的一大难题。我们根据多年来对CRF的研究，提出并运用“排毒双调综合疗法”治疗CRF的新思路，临床取得了较好的疗效。为进一步从实验学角度证实该疗法的疗效，并探讨其对CRF大鼠细胞免疫功能的影响，特设计本实验。
   
    1材料与方法
        1.1实验材料
        1.1.1实验动物SD系(Sprage Dauteg)雄性大鼠，体重(200±20)g，共70只。
        1.1.2实验用药灌胃方(温阳降浊汤)由西洋参、制附片、茯苓、益母草等组成；灌肠方由酒大黄、制附片等组成，两方经常规煎煮过滤，水浴蒸发至每毫升含生药材1.3 g，置4℃冰箱保存备用。
        1.1.3主要试剂淋巴细胞分离液、抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体、兔抗鼠IgG/FITC,美国Gibcobrl 公司出品。
           2实验方法
        2.1实验分组大鼠购回后，适应性喂养1周，称体重，尿蛋白定性检查为阴性后，随机抽取10只作为正常对照组(A组)。其余大鼠造模后随机分为4组，以抽签方式确定为病理组(B组)，灌胃组(C组)，灌胃＋灌肠组(D组)，灌胃＋灌肠＋针刺组即综合治疗组(E组)。
        2.2模型复制及给药参照文献［1］法，大鼠以戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后，无菌条件下对B，C，D，E组大鼠行左肾2/3切除术，1周后行第2次手术，切除右肾；A组大鼠同期行模拟手术。手术后均给青霉素钠8万u/d・只1，肌注5 d，伤口愈合后拆线。于实验第36天测各组大鼠体重，并分别给予以下处理：A，B组分别给生理盐水2 ml灌胃，1 ml灌肠，四处非穴位针柄按压。C组给灌胃方2 ml灌胃，生理盐水1 ml灌肠，四处非穴位针柄按压。D组给灌胃方2 ml灌胃，灌肠方1 ml灌肠，四处非穴位针柄按压。E组给灌胃方2 ml灌胃，灌肠方1 ml灌肠，针刺双侧脾俞、肾俞、足三里、三阴交。以上治疗1次/d，共持续4周。针刺穴位按参考文献［2］确定。
        2.3观测指标及检测方法
        2.3.1一般状况观察大鼠治疗前后体重、存活数、精神状态、饮食、大便、小便等。
        2.3.2血红蛋白(HGb)测定用血细胞自动分析仪测定。
        2.3.3肾功能(BuN、Scr)测定二乙酰肟法及苦味酸法。
        2.3.4T淋巴细胞亚群测定用流式细胞仪测定。
        2.4资料分析与统计数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用多样本方差齐性检验及多个均数间两两比较的t检验。
           3结果
        3.1治疗前后大鼠体重变化分别称取治疗前后各组大鼠体重，组间进行比较。结果见表1。
        3.2各组大鼠肾功能及血红蛋白的变化情况实验结束后检测各组动物血清BUN、Scr及血HGb，结果见表2。
        3.3外周血CD3＋ T细胞、CD4＋ T细胞、CD8＋ T细胞百分比检测实验结束后，采集各组动物外周血液样品，参照文献方法［3～5］，先制备血淋巴细胞悬液，对淋巴细胞进行荧光抗体标记，最后用流式细胞仪测定外周血中T细胞总数及其亚群的百分比。结果见表3。
        表1治疗前后各组大鼠体重变化比较(略)
           4讨论
        慢性肾衰竭(CRF)是由多种原因造成的慢性进行性肾实质损害，使肾脏不能维持其基本功能，导致体内代谢产物潴留、水电解质及酸碱平衡失调、内分泌紊乱的一组临床综合征。本病常呈五脏失调、虚实并见、阴阳俱损、寒热错杂的复杂征象，治疗上仅靠任何简单的一药一方或一法都难以适应其复杂的病证特点。但本虚标实仍是贯穿该病始终的主要病机，我们紧紧抓住其主要矛盾“毒”与“虚”，提出了“排毒双调综合疗法”治疗CRF的思路。“排毒”是指通过汗液、大小便等多种途径祛除体内蓄积之湿浊、痰瘀等病理产物；“双调”是指调补气血阴阳之虚衰，调理脏腑功能之紊乱；“综合疗法”是指综合运用内服、灌肠、药浴、针灸、穴位贴敷等多种治疗手段，充分发挥各种疗法的优势，以提高疗效。CRF存在免疫功能减退，而以细胞免疫损伤为主。因此，CRF患者易并发各种感染。在机体免疫系统中，T淋巴细胞是最重要的免疫细胞。成熟T细胞按照表型不同，可分为两个亚群。由于T细胞的两个亚群细胞表面CD3分子均为阳性，所以CD3可认为是T淋巴细胞共有的标志［4］。CD4分子和CD8分子可认为是两个亚群的标志。因而，采用单克隆抗体测定机体外周血白细胞中CD4＋和CD8＋阳性细胞百分比或计算两种细胞的比值，便成了一种十分便捷的初步评价机体免疫状态的指标。CD4＋/CD8＋之比上升，提示细胞免疫应答的正调节占优势，而比值下降，则提示免疫功能低下［6］。从本实验结果证实，所有病理组大鼠外周血T细胞总数及T细胞亚群数量和比例均较正常组偏低，说明CRF时确实存在细胞免疫功能低下。通过治疗，各组动物T细胞总数均有升高，CD4＋ T细胞升高较显著，CD4＋/CD8＋之比上升，说明中药灌胃、灌肠、针刺疗法确有提高机体免疫能力，纠正T细胞亚群比例失调的作用。通过对比发现，综合疗法组比单纯灌胃组、灌胃加灌肠组的作用更显著，说明各种疗法的有机配合，可以相辅相成，提高疗效。本实验以温阳降浊汤为灌胃方，重在治本，针对本病脾肾阳虚，气血不足之根本，以经方真武汤为基础化裁。“湿为阴邪，得温则化”。真武汤温阳利水，并配伍怀牛膝、益母草、石韦补肾活血利水；又因CRF患者大都有恶心呕吐，予黄连、苏叶、姜半夏和胃降逆，清化湿浊。诸药合用，温补脾肾，祛湿降浊，活血利水，正合“排毒双调”之旨。本实验结果显示，该方灌胃可明显改善CRF大鼠的一般状况，纠正贫血，降低BUN、Scr，改善细胞免疫功能。此与文献报道之温阳降浊法可改善CRF的临床症状，保护肾功能，延缓CRF进展一致［7，8］。以大黄、蒲公英、煅牡蛎、煅龙骨等药组成的灌肠方，可促进毒素的排泄，减轻残余肾单位的负荷，而延缓CRF的进展。在本实验中我们将中药灌胃与灌肠有机地结合起来，结果显示D组与C组比较在改善CRF大鼠一般状况，纠正贫血、降低BUN及改善细胞免疫功能等方面均有显著性差异，说明两种疗法联用，其疗效远较单一疗法更佳，此与文献报道一致［9］。同时本实验选用针刺脾俞、肾俞等穴位，可疏通经络，调畅气血而调整阴阳及脏腑功能。以上三种疗法从标本两方面，一方面最大限度地调动人体自身康复能力，扶助正气；另一方面，尽可能排出体内蓄积之水湿、浊毒、瘀血等毒邪，打破恶性循环，促进疾病的缓解，因而E组无论在改善症状、纠正贫血、改善肾功能及增强细胞免疫等方面均较C组、D组显著。本实验结果表明，针对CRF复杂的病机特点，治疗上应多种疗法互相配合，发挥各自的优势，以弥补单一疗法之不足，最大限度地发挥中医药在治疗CRF中的作用。
           参考文献：
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        ［9］李淑惠.补肾扶正法治疗慢性肾功能衰竭失代偿期50例［J］.北京中医，1998，17(5)：2526.
        (陕西中医学院，陕西 咸阳712083)