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       【摘要】 
       目的对苗药七缬和胃胶囊进行初步的组方研究，为新药开发打基础。方法运用混料均匀设计将组成七缬和胃胶囊的3个成分配制成9种不同的复方，通过冰醋酸导致小鼠疼痛、剪尾法测定凝血时间的方法对各成分所占比例进行筛选。结果该方程相关系数r=0.930 29，P=0.049 4,通过回归方程筛选出镇痛、止血效果最好的复方配比。结论应用均匀设计确定复方最佳配比的方法是可行的，通过实验结果得出的七叶一枝花浸膏、宽叶缬草挥发油乳化液、宽叶缬草水提物浸膏粉的最佳配比为5∶89∶6（质量百分比）。
       【关键词】  七缬和胃胶囊 混料均匀设计 组方研究
       Studies on Prescription Composition of Qixiehewei Capsule
       WU Kongyun，HUANG Yongqi, LI Xing,FENG Hua, LIANG Guangyi
       1.Guiyang College, Guiyang, Guizhou 550003,China;
       2.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang, Guizhou 550002,China
       Abstract：ObjectiveTo study the formular of MiaoYao Qixiehewei Capsuleand provide the foundation for developing new medicine.MethodsNine pieces of different analytic prescriptions were composed of three groups of component,applying the uniform design of experiments with mixtures(UDM).The model of pain caused by acetic acid and the determination of coagulation time by cutting-tail in mice were adopted to select the best proportion.ResultsThe correlation coefficient of the regression r=0.930 29, p=0.049 4 ,and the compound proportion was selected out and its analgesia,stopping bleeding effect was the best.ConclusionThe optimal proportion of ingredients in Qixiehewei Capsule is 5:89:6.
       Key words：Qixiehewei Capsules;  Mixture uniform design ;  Composite prescription
       消化性溃疡主要指发生在胃和十二指肠球部的慢性溃疡，为临床一种常见病、多发病。中医学无此病名，根据临床表现、性质、部位归属于中医“胃脘痛”“吐酸”“嘈杂”之范畴，由于溃疡形成原因复杂，复发因素较多，成为当今医学研究的热点。在民间常用嚼缬草根的方法来治疗通常所说的“胃气痛（胃脘痛）”，且疗效甚好。缬草具有相当强的镇痛及胃部平滑肌的解痉作用，其主要作用是由挥发油中的醋酸龙脑酯提供。醋酸龙脑酯浓度为0.5～1 g/kg时，具有明显的镇痛作用［1］。而作为我省民族药材的宽叶缬草，共检出29个成分，已鉴定的21个成分占全精油的92.33%，其中主要成分为醋酸龙脑酯［2］。再佐以止血效果甚好的七叶一枝花共同组方，以镇痛、止血作为考察指标，采用混料均匀设计法对七缬和胃胶囊进行组方研究，筛选出最佳配比，为今后新药研究打下坚实的基础。
       1  材料
       1.1  动物
       NIH小鼠（♂♀各半，体重18～22 g，贵阳医学院动物实验中心提供）。
       1.2  药材
       宽叶缬草挥发油及宽叶缬草水提物浸膏粉；七叶一枝花购于贵阳市药材公司，经贵阳中医学院周汉华教授鉴定，符合《中国药典》2005版及2003版贵州省中药材、民族药材质量标准。
       2  方法
       2.1  七叶一枝花浸膏粉的制备
       称取适量的七叶一枝花，加水进行煎煮，浓缩成浸膏，干燥后备用。
       2.2  宽叶缬草挥发油乳化液的制备
       由于实验中采用的药物的水溶液对小鼠进行灌胃， 而宽叶缬草经水蒸馏所得的挥发油并不溶于水中，灌胃时将宽叶缬草挥发油配置成1％的乳液，根据不同组方配伍吸取不同体积的宽叶缬草挥发油乳液制成供试药液进行灌胃。该实验采用吐温-80作为乳化剂，并根据醋酸龙脑酯在宽叶缬草中含量及其药理作用的有效浓度进行制备：吸取1.0 ml宽叶缬草挥发油，逐滴加入吐温-80并加水不断研磨，乳化完全后加水稀释至100 ml，摇匀，得10.0 ml/L的宽叶缬草挥发油乳液，备用。
       2.3  宽叶缬草水提物浸膏粉
       将宽叶缬草经水蒸气蒸馏所得母液，再经浓缩、干燥，得到干浸膏粉。
       2.4   空白对照液的制备
       以水为溶剂，逐滴加入与宽叶缬草挥发油乳液中等量的吐温－80研磨，定容至100 ml，摇匀，备用。
       2.5  实验设计
       按文献［3～5］选用混料均匀设计表Un（nS-1）来安排实验，其中n为实验次数和水平数，s为待考察的因素数，在此选表U 9（93）。即对复方中3个因素各取9个不同水平并设计成9种不同配方进行考察。具体算法如下：设Un（nS-1）为一个均匀设计表，其中第i行第j列的元素记为Uij；令Cij=（Uij-0.5）n，i=1，2，…，n；j=1，2…，n。则本列中各组分的配比为：Xi1=1-Ci112，Xi2=（1-Ck2）Ci112，Xi3=Ci2Ci112。i=1，2，…，n。X1，X2，X3分别为方中的3个成分，每类中药在方中配比（表1）的前三列，组成了9个X1+ X2+ X3=1的但配比不同的中药配方, 为优选得到最佳组方，将方药进行混料均匀设计后得到的配比进行镇痛、止血的药理实验，结果综合整理见表1。
       3  结果
       3.1  药理实验
       3.1.1  试药的配制根据混料均匀设计不同配比量取上述药液至25ml容量瓶中，加水定溶至25 ml，摇匀备用。
       3.1.2  实验方法小鼠117只，♀♂各半、体重（20±2）g，随机分为9组，每组分别灌以不同配比的试药平均0.2 ml/20 g（相当于成人每人每日服用量为25 ml/50 kg），连续灌胃一周，末次给药后1h，分别以冰醋酸导致小鼠疼痛、剪尾法致小鼠出血，分别记录注射冰醋酸15 min后小鼠的扭体次数和出血时间。由于指标的重要性是不同的，因此，应当采用加权综合进行分析。在治疗胃溃疡的过程中，由于镇痛、止血对胃溃疡的治疗都有着重要作用，赋予权重系数各为0.5，Y=0.5Y1+0.5Y2，综合评价后其结果见表1。表1  混料均匀设计的方案及结果（略）
       3.2  数据处理
       将数据结果采用Excel统计学软件进行逐步回归处理分析，得到回归方程：Y= 24.630 850 81-6 566.291 295X2+6 572.823 296X2×X2+6 535.235 216X1×X2+6510.362 026X2×X3。R=0.930 29，F值=6.431 8，显著水平P=0.049 4，该回归方程通过检验，有意义、可用。结果见表2。表2  分析结果（略）
       
       从回归方程和表2可看出X2为药效作用的主导项，X1，X3具有一定的辅作用。分别求Y对X2，X2×X2，X1×X2，X2×X3的偏导数，并令其为0，求得最佳的镇痛条件为：X1：0.028 17，X2：0.496 31，X3：0.034 64，百分比为X1∶X2∶X3（5∶89∶6）。理论计算得到最小镇痛、止血系数为-1 411.947 01。
       3.3  验证实验以上 3 个成分按优化组方5∶89∶6配成药液，利用以上方法检测其药液。小鼠26只，♀♂各半、体重（20±2）g，随机分为两组进行验证实验，分别灌以优化组配比的试药、以及空白对照液，平均0.2 ml/20 g，连续灌胃一周，末次给药后1h，分别以冰醋酸导致小鼠疼痛、剪尾法致小鼠出血，并记录优化组和溶液空白对照组，在注射冰醋酸15 min后小鼠的扭体次数和出血时间，对胃溃疡的镇痛、止血作用，各赋予权重系数各为0.5，Y=0.5Y1+0.5Y2，两组实验最终结果见表3。表3  验证实验结果（略）
       4  讨论
       本实验只对止痛、止血两项指标进行了考察，对于胃溃疡治疗的其他一般药理试验指标，将在今后进行研究，并结合各项指标系数确定七缬和胃胶囊的最佳配比。
       
       混料均匀设计是有别于正交设计和均匀设计的方法，按后两种方法设计配方，配方间药物总量不相等，药理指标受单味药用量影响大，不便了解单味药之间的相互作用。同时随着实验设计选择的考察因素和水平的不同，复方药物的总量也随之波动，造成给药溶剂的不确定性，对药物的总浓度较难进行控制。而混料均匀设计将各复方的配比总和定为100%，即各配方总量相等并可配成相同的浓度。因而，相对于正交设计或均匀设计，该设计为配方间等量药效比较提供了更理想的条件，实验更方便可行。中药方剂往往药味较多，要想筛选出关键作用的药物，没有好的实验设计将会是筛选工作变得极为繁琐，而归类分析可能是初选的有效途径之一。本实验运用混料均匀设计，将复方内3个主要成分作为考察因素，考察了每个成分在方中的配比水平，经逐步回归分析有效地优化了组方，得到了最佳组方配比：七叶一枝花浸膏粉、宽叶缬草挥发油乳化液、宽叶缬草水提物浸膏粉＝5∶89∶6（质量百分比）。
       【参考文献】
         　　［1］李晓光,叶富强,徐鸿华.砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究［J］.华西药学杂志,2001,16(5):356.
       
       ［2］龙春焯,肖汉良.贵州宽叶缬草油的化学成分［J］.云南植物研究,1987，1:109.
       
       ［3］方开泰,马长兴.正交与均匀试验设计［M］.北京:科学出版社,2001：144.
       
       ［4］余日跃,余 宙. 混料均匀设计考察益智方对去卵巢小鼠学习记忆的影响［J］.中国临床药理学与治疗学,2004,9 (6):680.
       
       ［5］刘 俊,沈映君,魏玉平.均匀设计法在复方剂量配比筛选中的应用［J］.中成药,1996,18(10):3.