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       【摘要】 
       目的研究鼠曲草提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法给动物灌胃给药，用四氯化碳造小鼠急性肝损伤模型，用比色分析法测定小鼠血清天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基转移酶( alanine transaminase, ALT)活性、肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione perioxidase，GSH-Px）活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。结果鼠曲草提取物能显著降低四氯化碳所致小鼠各组血清AST和ALT含量的升高(P< 0.05)，同时能升高肝组织GSH-Px的活性，降低肝组织MDA的含量(P< 0.05)。结论鼠曲草提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
       【关键词】  鼠曲草 急性肝损伤 保护作用
       Protective Effect of Gnaphalium tranzschelii against Acute Liver Injury in Mice
       JIANG Lijun, PIAO Jinhua, LIU Yu, JU Guangmei, BEN Liang, LI Gao 
       1.College of Pharmacology, Yanbian University, Yanji 133000, China;
       2. Key Laboratory of Organism Functional Factors of the Changbai Mountain, Ministry of Education, Yanbian University, Yanji 133002, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of Gnaphalium tranzschelii Kirp. against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice. MethodsThe acute hepatic injury model was prepared by the subcutaneous injection of carbon tetrachloride in mice. The activities of ALT and AST in serum, the content of MDA and the activity of GSH-Px in liver cell were investigated by colorimetric method. ResultsThe extract of G. tranzschelii significantly decreased the levels of ALT and AST in serum and the content of MDA, but elevated the activity content of GSH-Px in liver. ConclusionG. tranzschelii extract can prevent the acute liver injury induced by CCl4 in mice through its antioxidation.
       Key words：Gnaphalium tranzschelii；  Liver injury；  Protective effect
       鼠曲草为菊科鼠曲草属植物湿生鼠曲草Gnaphalium tranzschelii Kirp的干燥全草［1］。功能主治为止咳平喘，降血压，祛风湿。用于感冒咳嗽，支气管炎，哮喘，高血压病，蚕豆病，风湿腰腿痛治疗；外用治跌打损伤，毒蛇咬伤。之前我们研究通过体外筛选鼠曲草提取物清除DPPH(二苯代苦味酞自由基)自由基的能力强(浓度25 μg/ml时清除率为58.7%)，本实验研究鼠曲草提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用，并对其作用机理进行了初步探讨，为进一步开发应用鼠曲草提供一些实验依据。
       1  器材
       1.1  材料
       鼠曲草采自吉林省长白山一带，经延边大学药学院吕惠子副教授鉴定为真品。0.5 kg鼠曲草切碎后，加8倍量蒸馏水加热回流提取3次，1 h/次，合并滤液减压浓缩，得鼠曲草浸膏142 g。
       1.2  试剂与仪器
       水飞蓟宾购自西安华萃生物技术有限责任公司，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛(MDA )试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，其他试剂均为国产分析纯。使用的仪器有小型离心机(Sigma 1-13)，722型分光光度计(中国厦门分析仪器厂)和生化分析仪(SPOTCHEME2, SP-4430)；旋转蒸发仪(上海荣亚生化仪器厂)；电热恒温水浴箱(北京市长凤仪器仪表公司)。
       1.3  动物
       60只雄性昆明种小鼠，体重(20 ± 2) g，由延边大学医学部动物科提供。
       2  方法
       2.1  分组与造模
       60只雄性昆明种小鼠按随机数字表法分为正常对照组和模型对照组，阳性对照组，鼠曲草提取物高、中、低剂量给药组。鼠曲草给药组分别按2. 0，1. 0，0.5 g/kg灌胃鼠曲草提取物；阳性对照组按0.5 g/kg灌胃水飞蓟宾;正常对照组和模型对照组以等体积生理盐水灌胃，1次/d，连续5 d，末次给药1 h后，除正常对照组外，其余各组均按5 ml/kg腹腔注射0.15% CCl4,花生油溶液，禁食，不禁水。18 h后摘眼球取血分离血清。取血后脱颈椎处死小鼠，剖腹，迅速取出肝脏，在肝右中叶相同部位取0.1 g肝脏放入置有生理盐水的匀浆器中，在冰浴中制成100 g/L肝匀浆［2］。
       2.2  生化检测
       按试剂盒说明测定血清ALT，AST活性及肝组织GSH-Px活性和MDA含量。
       2.3  统计学处理
       数据以±s表示，各组样本均数间差别的假设检验用方差分析(ANOVA)，P<0.05认为有统计学意义。
       3  结果
       3.1  对血清ALT, AST的影响鼠曲草提取物对CCl4引起急性肝损伤小鼠血清ALT和AST的活性结果见表1。模型组ALT和AST较正常组明显升高，有显著性差异 (P< 0.01)，表明CCl4引起造模成功。鼠曲草高、中、低剂量组与模型组比较P< 0.05，说明鼠曲草提取物能显著降低CCl4引起急性肝损伤小鼠血清ALT和AST含量的升高。表1  鼠曲草提取物对CCl4所致肝损伤小鼠血清ALT,AST的影响(略)
       3.2  对肝组织GSH-Px活性和MDA含量的影响鼠曲草提取物对CCl4引起急性肝损伤小鼠肝组织GSH-Px活性和MDA含量的影响结果见表2。鼠曲草高、中、低剂量组与模型组比较均P< 0.05，说明鼠曲草提取物能升高CCl4引起急性肝损伤小鼠肝组织GSH-Px活性，同时降低小鼠肝组织MDA的含量。表2  鼠曲草提取物对CCl4所致肝损伤小鼠肝组织GSH-Px活性和MDA含量的影响(略)
       4  讨论
       肝损伤是由多种病因引起并且可以有多种因素参与的复杂过程。建立实验性肝损伤模型，是筛选保肝药所必需的，对研究肝病的发病机制和保肝药物的作用原理亦很重要。体内模型特别是化学性肝损伤模型，是目前国际上常用的肝损伤模型，具有操作简便，模型病理模拟性、重复性好等优点［3］。其中，CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型的毒剂，在整体或离体被广泛用于肝坏死及肝损伤的研究，此模型指标明确、重复性好，能准确反映肝细胞的功能 、代谢及形态变化。目前，公认CCl4引起肝损伤的机制是CCl4 在肝微粒体细胞色素 P450激活下生成自由基CCl3·及Cl·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂质，引起脂质过氧化，使肝细胞损伤，细胞质内ALT，AST渗入血液，结果血清ALT，AST活性升高，而给予鼠曲草提取物对CCl4所致小鼠血清 ALT，AST的升高有明显降低作用。
       
       自由基是人体正常生化过程的中间产物，在机体正常及病理过程中都存在，同时机体在进化过程中获得了灭活氧自由基的一些酶，如GSH-Px等。因此，只有当自由基产生过多或者机体内的酶系统过少时才导致疾病。氧自由基可促使不饱和脂肪自由基形成，脂质自由基可引起细胞膜的流动性、通透性和完整性的破坏，进而使其双层结构发生断裂，引起膜镶嵌的一系列酶的排列乱，功能丧失，细胞的能量产生系统瘫痪。GSH-Px是重要的催化过氧化氢分解的酶，它特异地催化还原性GSH对过氧化氢的还原反应，从而起到保护细胞膜结构与功能的完整作用。MDA是脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜的结构，导致细胞肿胀、坏死，其含量反映了组织过氧化的损伤程度［4］。本实验中鼠曲草提取物高、中、低剂量组肝组织中GSH-Px较模型组显著升高，而MDA含量显著降低，说明鼠曲草提取物可能通过保护细胞膜，清除氧自由基抑制脂质过氧化而对肝细胞起到保护作用。
       【参考文献】
         　　［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典中药彩色图集［M］.广州：广东科技出版社,1995：423.
       
       ［2］徐叔云，卞如濂，陈 修．药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1346.
       
       ［3］刘 燕,买尔旦·马合木提. 新疆紫草提取物对小鼠急性四氯化碳性肝损伤的保护作用［J］.时珍国医国药, 2006,17(9)：535.
       
       ［4］张学武,朴 龙,姜逢春,等. 珍珠梅水提物对大鼠肝损伤的保护作用［J］.世界华人消化杂志,2003,11(10): 1497.