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       【摘要】 
       目的观察 GM 颗粒对去卵巢大鼠结合低钙饲料喂养造成的骨质疏松模型的防治作用。方法采用双侧卵巢切除，结合低钙喂养 3 个月，建立大鼠骨质疏松模型。造模1周后模型大鼠随机分组给药。给药 3 个月后，大鼠取血后处死，分别测定骨密度，观察骨病理切片，测定各项血液生化指标。结果GM 颗粒中剂量组（9.70g生药/kg），大剂量组（19.40g生药/kg），与模型组比较具有显著性（P＜0.05）；GM 颗粒各剂量组均能增加低钙饲养的去卵巢大鼠骨密度（BMD）、明显改善造模大鼠松质骨的微结构；GM颗粒大剂量组能降低低钙饲养的去卵巢大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）、碱性磷酸酶（ALP）的活性，与模型组比较具有显著性（P＜0.01，P＜0.05）。结论 GM 颗粒能够增加低钙饲养的去卵巢大鼠骨密度，改善松质骨的微结构，因而能够增加骨强度，同时能降低碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶的活性，减少骨吸收，说明其对低钙饲养的去卵巢大鼠骨质疏松具有一定防治作用。
       【关键词】  GM 颗粒 去卵巢大鼠 骨质疏松 骨密度
       Effects of GM Granule on Ovariectomized Osteoporotic Rats
       LIU Yuquan, CAI Ying
       (Nanjing Jinling Andrology Hospital,Nanjing,Jiangsu 210029,China)
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of GM granule on osteoporosis induced by ovariectomy and dietary calcium deficiency in rats.MethodsAn osteoporosis model was established through ovary resection and dietary calcium deficiency of female rats,rat bone mineral density(BMD) and biochemical indicator correlated with bone metabolism were measured.ResultsGM granule increased the BMD.The activities of serum tartrate-resistant acid phosphatese and alkaline phosphatase were decreased in ovariectomized rats.ConclusionGM granule could increase the BMD and improve indexes of bone biomechanics in GM granule-fed ovariectomized rats.It is effective on preventing bone loss induced by ovariectomy.
       Key words：GM granule;  Ovariectomized rats;  Ostepoprosis;  Bone mineral density
       
       骨质疏松症是老年人常见病之一，随着人口逐渐趋于老龄化，使其成为人们关注的热点。骨质疏松目前尚无理想的治疗药物。
       合理的动物模型选择对药效学实验结果影响很大。大鼠骨变化与人类有许多相似之处，被公认为是研究骨质疏松较为理想的实验动物，是骨质疏松研究中使用最多的动物［1］。由于骨质疏松大多数发生在绝经后妇女中，表明卵巢分泌的雌激素对骨质疏松的发生和发展有重要影响［2］。因此尽管骨质疏松发病机制尚未明确，但国内外公认雌激素不足是女性骨质疏松发生的一个重要危险因素，补充雌激素可以预防与女性有关的骨质丢失［3］。卵巢切除术建立的骨质疏松模型适用于骨质疏松的研究内容广泛，因而最为常见［4，5］。本实验研究中还配合低钙饲料喂养［6］。低钙饲料引起的大鼠骨质疏松接近于人类自发及继发的骨质疏松症。药物、手术或饮食的联合应用建立大鼠骨质疏松模型利用多因素作用，可快速、有效地建立大鼠骨质疏松模型［4］。
       
       本实验采用双侧卵巢切除，结合低钙饮食的方法建立大鼠骨质疏松模型，然后观察了 GM 颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松模型的防治作用。
       1  材料与仪器
       1.1  药品及试剂GM 颗粒，由南京中医药大学提供。尼尔雌醇片，上海华联制药有限公司出品，批号：030101；钙尔奇D片，惠氏百宫制药有限公司生产，批号：0210116；乳酸环丙沙星，广州南新制药有限公司，批号：CFI04102/CFI08702；钙检测试剂盒，南京建成生物工程研究所出品，批号：20030711；无机磷检测试剂盒，南京建成生物工程研究所出品，批号：20030718；羟脯氨酸检测试剂盒，南京建成生物工程研究所出品，批号：20030718；抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒，南京建成生物工程研究所出品，批号：20030716；碱性磷酸酶检测试剂盒，南京建成生物工程研究所出品，批号：20030717；降钙素（CT），解放军总医院科技开发中心放免所，批号：20030703；骨钙素（BGP），解放军总医院科技开发中心放免所，批号：20030626；雌二醇（E2），北京北方生物技术研究所，批号：20030701。
       1.2  动物SD 大鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（苏）2002-0012。
       1.3  仪器骨密度测定仪（Piximus bone densitometer），美国 General Electronic Lunar 公司；CMIAS 98A 图象分析仪，北京航空航天大学；OLYMPUS BX60 荧光多功能显微镜，日本 OLYMPUS 公司；SN-682 B型γ记数器，上海核福光电有限公司；SPECTRA MAX 190，美国 Molecular Devices 公司。
       2  方法和结果
       2.1  动物模型大鼠 90 只，雌性，鼠龄 12 周，体重平均（370±30）g，随机分为 6 组。其中空白对照组大鼠不作处理，其余大鼠参照文献以戊巴比妥腹腔麻醉，取腰椎两旁切口进入腹腔背侧，完整摘除双侧卵巢，止血缝合［7］。手术后每只鼠腹腔注射乳酸环丙沙星 2 ml/只，连续注射 3 d。空白组大鼠饲以常规饲料，去卵巢大鼠以低钙饲料喂养（含钙 0.1%，磷 0.6%），低钙饲料由江浦饲料厂配制［8］。
       2.2  分组与给药饲养一周后，将去卵巢大鼠随机分为 5 组。GM 颗粒大剂量组，19.4 g 生药/kg；GM 颗粒中剂量组，9.70 g 生药/kg；GM 颗粒小剂量组，4.85 g 生药/kg；以上 3 组给药每周 6 次。阳性组，尼尔雌醇片以蒸馏水溶解后灌胃给药1 mg/kg，每周 1 次给药，同时将钙尔奇 D 片剂研磨，以蒸馏水溶解后灌胃给药30 mg/kg，每周 6 次给药；模型组给以同体积蒸馏水（1 ml/100 g）。另外 15 只空白组大鼠正常饲养。
       2.3  检测指标给药 3 个月后，摘眼球取血，分离血清备测。大鼠处死，其左侧股骨测定骨密度，另侧股骨以 10% 甲醛固定，进行病理切片观察。2.3.1  骨密度（BMD）测定取大鼠股骨，注意保护股骨头，将左股骨放在有机玻璃盒支架上固定，以 Piximus 骨密度测定仪扫描，其骨密度值（BMD）。各组数据以均数±标准差表示，进行统计学分析。结果见表1。表1  GM 颗粒对低钙饲养去卵巢大鼠骨密度的影响(略)
       2.3.2  骨病理切片观察各组大鼠股骨胫骨端骨松质切片，在100×镜下，选取骺线下方的依次 3 个视野为固定观察和计量视野。用北航 CMIAS 98A 图象分析系统中以体视学图象分析软件模块进行每个视野的测量，获得骨小梁面积密度，骨小梁总面积，骨小梁周长及间接反映骨小梁宽度的等圆直径 4 个测量指标，对其数值进行统计学分析。结果见表2。表2  GM 颗粒对低钙饲养去卵巢大鼠骨病理的影响(略)
       2.3.3  血液生化指标检测大鼠摘眼球取血，分离血清，采用相应试剂盒以SPECTRA MAX190紫外—可见光微孔板检测仪测定血清中钙（Ca)、磷（P）的含量以及抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）、碱性磷酸酶（ALP）、羟脯氨酸（HOP）的活性。结果以均数±标准差表示，进行统计学分析。结果见表3。表3  GM 颗粒对低钙饲养去卵巢大鼠血液生化指标的影响(略)
       2.3.4  降钙素（CT），骨钙素（BGP）及雌二醇（E2）检测大鼠摘眼球取血，分离血清，采用相应放免药盒，以 SN-682 B 型γ记数器测定大鼠血清中降钙素，骨钙素以及雌二醇的含量。结果以均数±标准差表示，进行统计学分析。结果见表4。表4  GM 颗粒对低钙饲养去卵巢大鼠血液降钙素，骨钙素及雌二醇的影响(略)
        以上结果表明，GM 颗粒中剂量组（9.70g生药/kg），大剂量组（19.40g生药/kg）能够增加低钙饲养的去卵巢大鼠股骨骨密度，与模型组比较具有显著性（P＜0.05）；GM 颗粒各剂量组均能明显改善造模大鼠松质骨的微结构；血液生化指标检测表明，GM 颗粒大剂量组（19.40 g生药/kg）能降低低钙饲养的去卵巢大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）、碱性磷酸酶（ALP）的活性，与模型组比较具有显著性（P＜0.01或P＜0.05），对血钙，血磷以及羟脯氨酸没有明显影响；放免实验中，GM 颗粒显示了升高降钙素和骨钙素的趋势，但与模型组比较没有显著差异。
       3  讨论
       股骨上的骨强度与骨密度呈正相关，因而可以用股骨骨密度来反映骨质疏松治疗药物的疗效［9］。骨量减少是骨质疏松引起骨折的主要原因，除此以外，研究表明骨的结构也与骨折有重要关系。骨微结构改变，骨脆性增加，骨小梁变细变薄，骨小梁间隙增大，这种立体结构变化会降低骨强度增加骨折危险性。通过观察骨的几何形态可以了解骨的结构力学特性［10，11］。GM 颗粒能够增加低钙饲养的去卵巢大鼠骨密度，改善松质骨的微结构，因而能够增加骨强度，说明其对去卵巢大鼠骨质疏松具有防治作用。
       在骨结构中，骨矿物质是由钙、磷等经过骨的矿化过程而形成并沉积于骨基质中的，骨中钙、磷贮积是保证骨矿物质形成的重要条件；骨骼更新是一个动态过程，骨骼不断摄取血液中的钙以供骨形成之需，同时骨吸收又将骨钙释放入血，重吸收后余者由尿排出，因而测定血钙血磷有一定意义，但并不能完全反映骨质情况。血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶及羟脯氨酸的升高是动物骨吸收增加的反映，文献中多测尿中羟脯胺酸含量［12，13］。本研究表明 GM 颗粒对血清碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性具有降低作用，而对血清羟脯氨酸含量没有明显影响。
       降钙素（CT），骨钙素（BGP）及雌二醇（E2）是与骨代谢直接相关的激素，其在体内水平下降，可导致绝径后妇女骨量快速丢失。去卵巢大鼠造模 3 个月后体内激素 3 种激素均明显降低，因而可以通过测定动物体内 3 种激素的含量观察药物的治疗效果［14］。实验中 GM 颗粒显示了升高降钙素和骨钙素的作用，但与模型组比较没有显著差异，对雌激素亦无升高作用。
       【参考文献】
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