文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的建立了测定鲜人参中多糖含量的分析方法。方法用苯酚硫酸法，在波长490 nm处测定吸光度，人参多糖在10～160 μg范围内具有良好的线性关系，相关系数为0.998 7。平均回收率为98.40%，RSD=2.53%。结果人参多糖的最佳提取条件为：料液比为1∶10，提取温度为100℃，提取时间为4 h，人参多糖换算因子为1.58，鲜人参中多糖的含量为18.14 g/100 g。结论该方法简便、准确率高、重现性好。
       【关键词】  鲜人参 多糖 苯酚 硫酸法 含量
       Determination of the Content of Polysaccharides in Fresh Root of Panax ginseng by the Method of Phenol Vitril
       ZHONG Yan，PAN Puqun，WANG Yanhong，CHU Liwei     
       (The Center of Analysis and Testing of Jilin Agricultural University , Ginseng and Antler Products Testing Center of the Ministry of Agriculture PRC, Changchun 130118，China)
       Abstract：ObjectiveTo established an analysis method for the determination of  the content of polysaccharides from fresh root of Panax ginseng.MethodsThe method of phenolvitriol.The absorbency rate was tested in wavelength 490 nm.ResultsThere was a good linear relationship between the absorbency and the content in the range of 10～160 μg.The correlation coefficient was 0.998 7. The relative recovery was 98.40% and RSD was 2.53%.The optimum extraction condition of Ginseng polysaccharides was 1∶10(dry weight:water),100℃,4 h.while the converting factor of polysaccharide in fresh root of Panax ginseng was 1.58.Its polysaccharide content was 18.14g/100 g.ConclusionThis method is simple,accurate and repeatable.
       Key words：Fresh root of Panax ginseng；  Polysaccharide；  Method of phenol-vitriol
       人参为五加科植物Panax ginseng C.A.Mey 的干燥根，在我国有着悠久的药用历史，主要含有人参皂苷、人参多糖、人参多肽及挥发油、多种氨基酸、脂肪酸及微量元素等有效成分。人参多糖对机体的免疫功能、造血功能以及在抗肿瘤和降血糖等方面均有较为肯定的药理学作用。由于人参多糖的来源不同，所以同一植物不同的提取方法获得的多糖，甚至人参多糖的不同组分的生物学活性差异甚大［1～5］。
       
       本实验利用多糖被浓硫酸水合产生的高温迅速水解，产生单糖，并迅速脱水生成醛糖衍生物，在这种强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物，该衍生物在波长490 nm 处和一定浓度范围内，吸光度与糖浓度呈线性关系，采用比色法对鲜人参多糖含量进行测定。
       1  材料与方法
       1.1  材料与仪器
       鲜人参；无水乙醇（AR）；95%乙醇（AR）；硫酸（AR）；苯酚（AR）；葡萄糖（AR）。植物粉碎机，电子天平，DU-7500紫外分光光度计（美国Backman公司），离心机，真空干燥器，恒温水浴，真空冷冻干燥机等。
       1.2  鲜人参多糖的提取与精制新鲜的鲜人参，植物粉碎机粉碎后，称取适量样品，按浸提比1∶20，在100℃水浴中提取4 h，趁热用布氏漏斗抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉，置冰箱24 h，离心20 min（5 000 r/min），沉淀用适量95%乙醇洗涤两遍，真空冷冻干燥，得人参粗多糖。
       称取一定量人参粗多糖，制成粗多糖质量分数为1%的溶液，采用Sevage法除蛋白，量取水浸浓缩液的体积为V(ml)，向其加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，振荡20 min，3 000 r/min的转速下，离心15 min，合并上清液测其体积，继续加相应体积的氯仿和正丁醇，并重复上述操作，直至氯仿层与正丁醇层之间无白色沉淀。
       将水浸浓缩液倒入下端扎好的截流分子量为6 000～8 000的半透膜袋中，将袋的另一端用绳扎好后，悬挂在盛有水的烧杯里，将烧杯放在磁力搅拌器上，开动搅拌，蒸馏水透析48 h，期间每2h更换一次水，经常更换清水使透析膜内溶液的浓度差加大，并加以搅拌，加快透析速度，除去无机盐、单糖、双糖等小分子杂质。加3倍体积95%乙醇醇沉。沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48 h，获得白色固体粉末，干燥即得精制人参多糖。
       1.2.1  样品溶液的制备
       精密称取适量样品，分别置具塞三角瓶中，按一定料液比、浸提温度、浸提时间，在热水浴中浸提4 h，用布氏漏斗抽滤，浓缩，浓缩后加3倍体积95%乙醇溶液，静置24 h后，离心，沉淀用蒸馏水溶解，定容至250 ml，即为待测样液。
       1.2.2  标准曲线的制备
       精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品1 g，置于100 ml容量瓶中，溶解并稀释至刻度，配成10 mg/ml的标准贮备液，吸上述贮备液1 ml定容至100 ml，配成0.1 mg/ml的工作液。精密移取葡萄糖标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml于25 ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至2.0 ml，再各加5%苯酚溶液1.0 ml摇匀，迅速加入浓H2SO4溶液5 ml，振摇5 min，放置10 min，置沸水浴中加热20 min，取出冷却至室温，于490 nm，以试剂空白为参比测定吸光度。
       1.2.3  换算因子的测定精密称取干燥至恒重的精致人参多糖5.0 mg［6,7］，加蒸馏水溶解，转移至25 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀得人参多糖储备液；吸取多糖储备液2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加水定容；吸取上述溶液2.0 ml，按标准曲线的绘制方法测定吸光度，同时做空白对照；由回归方程求出此人参多糖储备液中葡萄糖的浓度，并计算其中葡萄糖含量。按下式计算换算因子f：f=m/(c×D×V)，式中m为人参多糖的质量（mg），c为人参多糖储备液中葡萄糖浓度（mg/L），D为人参多糖的稀释倍数，V为体积（ml），测得f=1.58(n=7)。
       1.2.4  回收率的测定精密称取适量的样品加入标准葡萄糖溶液（10 mg/ml），按照上述方法同时做3个重复，分别测其吸光度，根据葡萄糖的检出量，计算其回收率，结果见表1。
       回收率（%）=实验测值-样品所含被测成分量/加入纯品量×100%
       1.2.5  多糖含量的测定［8,9］精密吸取样品液0.2 ml，于具塞刻度试管中，加蒸馏水至2 ml，按照上述步骤操作，同时做3个重复，测得吸光度值，由回归方程计算样品液中葡萄糖浓度（C），按下面公式计算样品液中人参多糖的质量分数。
       多糖含量（%）=C×D×V×f×10-6 /m×100%
       式中：C为样品浓度（μg/ml），D为稀释倍数，V为定容体积(ml)，f为换算因子，m为供试样品的质量（g）
       2  结果与分析
       2.1  标准曲线的测定结果苯酚-硫酸法测得标准曲线的回归方程：A=0.008+0.012C，r=0.998 7。A为吸光度值，C为葡萄糖含量（μg/ml）。实验表明标准葡萄糖在10～160 μg之间呈良好的线性关系。
       2.2   回收率的测定结果见表1。表1  多糖的回收结果（略）
       样品的平均回收率达到98.40%，说明本方法的准确率较高。
       2.3  多糖含量的测定结果
       2.3.1  多糖提取条件的确定
       提取温度的确定：取鲜人参粉末10 g，选浸提比1∶20，浸提时间4 h，浸提温度采用60，80，100℃，趁热抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉24 h，沉淀，干燥称重，结果分别为3.4%，4.3%，5.2%。从结果可知，浸提温度为100℃时，所测得的多糖含量最高。
       料液比的确定：取鲜人参粉末10 g，选浸提温度100℃，浸提时间4h，浸提比采用1∶10，1∶20，1∶50，趁热抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉24 h，沉淀，干燥称重，结果分别为5.0%，4.8%，4.1%。从结果可知，料液比为1∶10时，所测得的多糖含量最高。
       提取次数的确定：取鲜人参粉末10 g，选浸提温度100℃，浸提时间4 h，浸提比采用1∶20， 浸提次数采用1次，2次，3次，趁热抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉24 h，沉淀，干燥称重，结果分别为6.3%，6.2%，6.1%。从结果可知，多糖在3次提取中得率没有多大差别，所以综合考虑鲜人参粉末提取1次即可。
       提取时间的确定：取鲜人参粉末10 g，选浸提比1∶20，浸提温度100℃，浸提时间采用2，3，4 h，趁热抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉24 h，沉淀，干燥称重。结果分别为3.5%，4.2%，5.9%。从结果可知，浸提时间为4 h时，所测得的多糖含量最高。
       综上结果可知，用苯酚-硫酸法测多糖含量，确定了多糖提取的最适条件为浸提比为1∶10，温度为100℃，提取时间4h，提取次数为1次。
       2.3.2  多糖样品的测定
       按照上面所述方法和确定的鲜人参多糖提取的最适条件，用苯酚-硫酸法测定了鲜人参中多糖的含量为18.14 g/100 g。
       3  讨论
       多糖的测定方法很多，本实验通过水浸提法，提取鲜人参多糖，用苯酚-硫酸法测其含量，实验中所作的标准曲线好，通过回收率实验可知，本法所测多糖含量，准确率较高，重复性较好，且此法简便，灵敏。因此在今后应用苯酚-硫酸法测定鲜人参多糖含量时具有一定的参考价值。
       本实验用苯酚-硫酸法测定多糖的含量，确定了多糖提取的最适条件，并测定鲜人参中多糖的含量为18.14 g /100 g。
       【参考文献】
         　　［1］张 彬，林瑞超，冯 芳. 人参多糖的研究概况［J］.中国药事，2004,18(9):566.
       
       ［2］窦德强，靳 玲，陈英杰. 人参的化学成分及药理活性的研究进展与展望［J］.沈阳药科大学学报，1999,16(2):151.
       
       ［3］赵俊，吴 宏，王亚平. 人参多糖的化学与药理学研究进展［J］.国外医学·中医中药分册, 2004, 26(2)：79.
       
       ［4］张萍,王金东,肖新月，等. 人参化学成分分析方法的研究进展［J］.中草药, 2004, 35(12): 1429.
       
       ［5］季宇彬.中药多糖的化学与药理［M］. 北京：人民卫生出版社，2005：29.
       
       ［6］董群，郑丽同，方积年. 改良的苯酚硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究［J］.中国药学杂志，1996, 31（9）：550.
       
       ［7］吴拥军，刘洁，吴予明，等.中药巴戟天多糖的测定及其微量元素分析［J］.光谱学与光谱分析，2005, 25（2）：2076.
       
       ［8］高丽君，王汉忠，崔建华，等. 苯酚-硫酸法测定白首乌中多糖含量［J］.山东农业大学学报（自然科学版），2004，35（2）：295.
       
       ［9］唐小俊，池建伟，张名位，等. 荔枝多糖的提取条件及含量测定［J］.华南师范大学学报（自然科学版），2005,2：27.