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       【摘要】 
       目的建立高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷含量的方法。方法采用Hypersil ODS2柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；柱温30℃；检测波长230 nm。结果芍药苷线性范围0.12～1.08μg，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。结论该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂中白芍的质量控制。
       【关键词】  大黄虫丸 芍药苷 高效液相色谱法
       Determination of Paeoniflorin in Dahuang Zhechong Pill by HPLC
       LIU Li,L Zhiping*,LIU Qiang
       (College of TCM, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of Paeoniflorin in Dahuang Zhechong Pill. MethodsAn HPLC method was developed and the Hypersil ODS2 column（4.6 mm×250 mm×5 μm） was used.The mobile phase was acetonitrile-0.1% orthophosphoric acid (15∶85).The detection wavelength was at 230nm and the column temperature was 25℃. ResultsThere was a good linear correlationship in the range of 0.12～1.08μg,the average recovery was 98.78% ,RSD=1.35%.ConclusionThe method is convenient,reliable and accurate.It is suitable for determination of the content of Paeoniflorin in Dahuang Zhechong Pill.
       Key words：Dahuang Zhechong Pill;   Paeoniflorin;   HPLC
       大黄虫丸收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］，主要由熟大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、白芍、黄芩等12味中药组成，功效活血化淤，通经消癥。用于瘀血内停而致腹部肿块、肌肤甲错、经闭不行等，临床疗效确切。但原药为蜜丸，剂型落后，本实验拟对其进行二次开发，原方中药味较多，《中国药典》含量测定只对方中熟大黄中大黄素进行了含量测定，对用量较大的白芍未进行定量，实验采用高效液相色谱法建立了该药中芍药苷的含量测定方法，为进一步开发该制剂打下基础。
       1  器材
       1.1 仪器　
       Angilent HP1100高效液相色谱仪；G1314A紫外检测器；KQ-500DE型超声仪。
       1.2  药品大黄虫丸（广东阳江制药厂有限公司，批号051104，051218，060320）；阴性样品（自制）。
       1.3  试剂及材料 
       芍药苷对照品批号（中国药品生物制品检定所，批号0715-200211）；高效液相使用乙腈为色谱纯，水为高纯水；其余试剂均为分析纯。
       2  方法
       2.1  含量测定色谱条件色谱柱为Angilent Hypersil ODS2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）；柱温30℃；流速1.0 ml/min；检测波长230 nm；进样量10 μl。
       2.2  对照品溶液的制备精密称芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.6 mg的溶液，作为对照品贮备液。
       2.3  标准曲线的绘制分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。各精密吸取10 μl注入液相色谱仪中，测定，测得峰面积，以对照品进样量为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线，线性范围为 0.12～1.08 μg，回归方程Y=941.6X+6.291 9，r =0.999 9。
       2.4  供试品溶液的制备取本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，超声（功率250W，频率40 kHz，40℃）处理40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，通过氧化铝-活性炭柱(中性氧化铝3 g，湿法装柱，上覆层析用活性炭1 g，甲醇预洗)，用甲醇50 ml洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至适量，转移至10 ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为供试品液。HPLC图谱见图1。
       2.5  阴性实验 按处方比例，制得缺白芍制剂，按供试品项下方法制备阴性样品，进行高效液相测定，证明阴性无干扰。
       2.6  精密度实验取芍药苷对照品溶液（60.8 μg/ml），重复进样5次，测得峰面积分别为580.275 45，580.943 85，583.236 54，582.198 73，583.495 73，RSD=0.24%,表明仪器精密度良好。
       2.7  稳定性实验取供试品溶液（批号051104），每隔2 h进样测定1次，共进样6次，测得芍药苷的峰面积值分别为345.854 55，348.259 48，351.165 49，347.026 54，349.987 42，346.142 15。RSD=0.62%，表明样品溶液在10 h内测定稳定。
       2.8  重复性实验取样品（批号051104）5份，按供试品制备项下分别提取，精制，测定，芍药苷含量分别为1.802 6，1.837 4，1.824 4，1.814 9，1.788 6 (mg/g)，RSD=1.04%，表明实验重复性良好。
       2.9   加样回收率实验取样品（批号051104）5份，分别加入芍药苷对照品适量，按样品制备项下方法制备。结果见表1。表1  芍药苷加样回收率实验结果（略）
       2.10  样品测定分别取3批样品，按供试品溶液制备项下制备供试品，分别进样，测定即得。测定结果见表2。表2  不同批次样品中芍药苷的含量测定结果（略）
       《中国药典》2005年版Ⅰ部中白芍药材中芍药苷含量不得少于1.6%，推算得知大黄虫丸中芍药苷含量应不得少于1.44 mg/g，因此以上3批样品含量均合格，二次开发制剂中芍药苷的含量应以此为依据。       
       3  讨论
       原方中药味较多，直接使用溶剂提取进行液相测定干扰较大，因此实验考察了供试品制备方法中提取溶剂（甲醇，稀乙醇）、提取方法（回流、超声）、提取时间（20，40，60 min）、过柱（上样量、洗脱量）的条件，结果以正文所述方法最好，样品能够达到较好的分离。
       试比较了3种流动相［2］：①甲醇-水-冰醋酸（49∶50∶1）；②乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；③乙腈-水(13∶87)，结果以流动相②分离效果最好，故选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）。
       该含量测定方法简便，快速，重现性好，既可以为进一步开发大黄虫丸奠定基础，亦适合推广应用于含较多药味的中成药中白芍的检测。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：330.
       
       ［2］吴艳丽，孙海涛，史 学.HPLC测定荡涤灵颗粒中芍药苷的含量［J］.中国现代中药，2006，8(10)：16.