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       【摘要】 
       目的观察头顶一颗珠（TTM）对阿尔彩默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马、皮质抗氧化酶、过氧化脂质和tau蛋白表达的影响。方法用岗田酸（Okadaic acid，OA）大鼠侧脑室注射造模，TTM注射液腹腔注射，并用维生素C（VtiC）腹腔注射作阳性对照。测定正常组、模型组、阳性对照组、药物实验组海马、皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛（MDA）和tau蛋白的含量。结果模型组与正常组比较，SOD，GSH-Px降低（P<0.05∕P<0.001），MDA，tau蛋白增高（P<0.001）。药物实验组与阳性对照组比较，SOD，GSH-Px，MDA和tau蛋白在TTM高，中组差异明显（P<0.05），低组差异明显或不明显（P<0.05∕P﹥0.05）。结论TTM的抗衰老作用，与能增强脑组织SOD,GSH-Px活性、减少MDA蓄积、降低tau蛋白水平有关。
       【关键词】  头顶一颗珠 阿尔彩默病 岗田酸 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 丙二醛 tau蛋白
       头顶一颗珠系百合科延龄草属头顶一颗珠（Trillium tschonoskii Maxim，TTM）的干燥根状茎及根，为传统名贵中药，味甘，性温，有小毒 ［1］。主要成分含甾体皂苷延龄草苷和延龄草二葡萄糖苷，分别为薯蓣皂苷元的葡萄糖苷和二葡萄糖苷［2］。具祛风舒肝、活血止血、镇痛消肿、延年益寿等功效。民间用于治疗头痛眩晕、跌打损伤、疔疮肿毒、神经衰弱等疾病。近年来对其研究逐渐被重视，但限于花粉形态、组织培养、化学成分、遗传多样性等方面。本研究用大鼠侧脑室注射OA［3］、腹腔注射TTM、腹腔注射VitC作阳性对照的方法［4］，观察 OA致AD大鼠脑组织抗氧化酶、过氧化脂质和tau蛋白表达变化，旨在探讨TTM抗衰老的作用机理，为进一步开发利用提供相关科学依据。
       1   器材与方法
       1.1  材料
       TTM（恩施自治州太山庙药材基地提供，用水提醇沉法制成含生药30%的注射液），OA（sigma,USA，批号2007∕07），tau蛋白试剂盒（Innogenetics NV，Belgium，批号2007／07），SOD试剂盒，批号2007423- 4，GSH-Px试剂盒，批号：2007413-2，MDA试剂盒，批号2007413-2(南京建成生物工程研究所生产），VtiC (昆明金殿制药有限公司，批号070608)，WDF-U型脑立体定位仪(西安西北光电仪器厂)，TL-16型高速低温冷冻离心机（上海实验仪器厂），全自动生化分析仪（酶免之星ELISA-STAR，瑞士哈美顿感公司）。
       1.2  方法
       雄性Wistar大鼠60只，鼠龄40～50周，体重300～350 g（华中科技大学同济医学院动物中心提供）。随机分为正常组（侧脑室注射生理盐水）、模型组（侧脑室注射OA）、阳性对照组(侧脑室注射OA、腹腔注射VtiC)、药物实验组（侧脑室注射OA、腹腔注射TTM）。各组大鼠注射20％戊巴比妥钠（40 mg／kg，i.P.）麻醉后，固定脑于立体定位仪上，颅顶正中矢状切开，行立体定位（前囟后3.8 mm，中线旁开2.5 mm，颅骨表面下3 mm）。模型组：5 μl注射器取OA 1.5 μl（0.392 mmol／L），针进侧脑室后于10 min内缓慢注射，留针5 min。正常组：侧脑室注射等体积生理盐水。药物实验组：侧脑室注射OA后，腹腔Bid注射TTM（分别为750，500，250 mg／kg）15 d。阳性对照组：侧脑室注射OA后，腹腔Bid注射VtiC（3 mg／kg）15 d。术后各组注射青霉素（8万U，i.m.）3d抗感染，正常喂养。
       1.3  标本测定
       待TTM、VtiC注射结束后，在清醒状态下断颈处死大鼠，迅速取脑组织分离出海马和皮质，制成匀浆并置－80℃冰箱。用SOD，GSH-Px，MDA试剂盒测定SOD，GSH-Px，MDA含量。用lnnogenetics N V的Inntest抗人tau试剂盒、双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，测定tau蛋白浓度，全自动酶标仪ELISA-STAR读取吸光度A值，求r＝a﹢bx回归方程，依方程求tau蛋白值。
       1.4  统计处理
        
       检测数据用±s表示，以方差分析法作统计学处理。
       2   结果与分析
       从表1、表2可见：模型组与正常组比较：SOD，GSH-Px均降低（P<0.05∕P<0.001），MDA，tau蛋白均升高（P<0.001），说明OA造模是成功的。药物高中低组分别与阳性对照组比较：SOD，GSH-PX，MDA和tau蛋白表达，TTM高、中组差异明显（P<0.05），低组差异明显或不明显（P<0.05或P﹥0.05），提示TTM增强SOD和GSH-PX活性、减少MDA生成、降低tau蛋白水平，与VtiC相比，在高、中剂量时效果更强，低剂量时效果相当。表1  皮质SOD，GSH-PX，MDA和tau蛋白变化（ 略）表2  海马SOD，GSH-PX，MDA和tau蛋白变化（ 略）
       3  讨论
       现代医学认为，氧自由基对人体衰老影响最大。SOD，GSH-PX是机体重要的抗氧化酶，SOD，GSH-PX和MDA含量变化，为检测衰老最可靠的指标［5］。据Andreasen 等研究，脑脊液（CSF）Tau蛋白在老年痴呆症状出现前就开始增高［6］。tau蛋白增高是AD病理改变的基础,为AD重要的生物标记［7］。测定CSF Tau蛋白水平，对AD临床诊断很有帮助［8］。
       本实验在无商品化AD转基因动物模型的情况下，参照国内外研究AD的有关报道，用大鼠侧脑室注射OA的方法建立AD动物模型。在此基础上，用传统名贵中药TTM制成注射液作模型大鼠腹腔注射，并用强氧化剂VtiC作阳性对照，观察TTM对OA致AD大鼠海马和皮质SOD，GSH-PX，MDA，Tau蛋白含量的变化。
       结果显示：TTM对OA诱导的AD大鼠脑组织，有明显增强SOD，GSH-PX活性、减少MDA生成、降低Tau蛋白表达的作用。和VitC相比，TTM在高、中剂量时效果更强（P<0.05），低剂量时效果相当（P<0.05或P﹥0.05）。提示TTM的抗衰老作用机理，有比VitC抗氧化、降tau蛋白作用更强的效果有关。
       【参考文献】
         　　［1］谢宗万.全国中草药汇编，上册，第2版［M］.北京:人民卫生出版社,2000:225.
       
       ［2］江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海:上海科学技术出版社,1986:834.
       
       ［3］高 峰,周苏娅.侧脑室注射白细胞介素22的心血管效应［J］.中国应用生理学杂志，2005,21(2):156.
       
       ［4］黄丽亚,刘杰书. 盐酸丁咔地尔、维生素C对氟哌啶醇致阿尔茨海黙病大鼠抗氧化酶表达作用的影响［J］.中国微循环，2006,10(6):413.
       
       ［5］Balaban RS, Nemoto S,Finkel T. Mitochondria, oxidants, and aging.Cell.2005,120(4):483.
       
       ［6］荒井启行, 佐藤和彦,寺屿正教, 等.アルッハイマ病におけゐ,にぉけゐ生物学的诊断マカとしてのTau 蛋白［J］.日本老年医学会杂志，1996,33(9):669.
       
       ［7］Hampel H,Buerger K,Zinkowski R,et al.Measure ment of phosphorylated tau epitopes differential diag nosis of Alzheimer disease comparative cerebrospinal fluid study ［J］.Arch Gen Psychiatry. 2004,61(1):95.
       
       ［8］Hampel H,Goernitz A,Buerger K.Advances in the development of biomarkers forAlZ-heimer disease：from CSF total tau and Aβ-42 pt roteins to phosphorylated tau protein［J］.Brain Res Bull,2003,61(3):243.