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       【摘要】 
       目的建立亚贡叶总黄酮、总酚酸的含量测定方法。方法利用分光光度计通过测定吸光度计算总黄酮、总酚酸的含量。结果实验建立了总黄酮、总酚酸的标准曲线，测得亚贡叶中总黄酮平均含量为3.2%, RSD=1.4%（n=6）；总酚酸平均含量为4.5%, RSD=1.6%（n=6）。 结论建立了亚贡叶的总黄酮、总酚酸含量测定方法，该法简单、快捷，重现性好，可用于亚贡叶的质量控制和定量分析。
       【关键词】  亚贡 总黄酮 总酚酸
       Determination of Total Flavonoids and Total Phenolic Acid from Leaf of Yacon (Smallanthus sonchifolius)
       TIAN Fang， DOU Deqiang， CHI Yuxin，WU Yang，ZHU Hong， QIU Yingkun， KANG Tingguo，DONG Feng
       1.College of Pharmacology, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian, 116000 China；
       2.Zhen-Ao Co.Ltd. ,Dalian 116600,China
       Abstract：ObjectiveTo establish the determination methods of total flavonoids and total phenolic acid from leaf of Yacon. MethodsThe content of total flavonoids and total phenolic acid were determined by spectrophotometry. ResultsCalibration graphs were constructed for total flavonoids and total phenolic acid. The content of total flavonoids was 3.6% and the total phenolic acid was 4.4%. ConclusionThe methods are rapid, reliable, accurate and suitable for analysis of total flavonoids and total phenolic acid and quality control in Smallanthus sonchifolius.
       Key words：Yacon;  Total flavonoids;  Total phenolic acid
       亚贡Smallanthus sonchifolius (Poepp．et End1．)H．Robinson为菊科向日葵属多年生草本植物，俗称“雪莲果”“雅龙果”，英文名为“YACON”。原产于南美洲安第斯山脉，是当地印第安人的传统根茎食品［1］。在我国云南地区有大面积种植，贵州、福建、湖南、台湾等地也均有种植。民间用亚贡叶加工成茶，冲泡饮用，有降血糖、预防动脉粥样硬化的功效。日本学者研究发现，亚贡能有效地控制胆固醇增加,有减肥、防感冒、防骨质疏松、降低高血压的功效,对消化道和循环系统的疾病,以及结肠癌等,均具有一定的疗效［2］。目前国内对于亚贡的文献报道较少，本文对亚贡叶中总黄酮及总酚酸含量进行了测定，为其资源合理的开发利用及质量控制提供理论依据。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器
       UV-2100紫外分光光度计(上海UNICO)、FA-1004分析天平（上海精科天平厂）。
       1.2  试药芦丁对照品为自制，经HPLC纯度检验为98.472%、咖啡酸标准品购于中国药品生物制品检定所（批号110885-200102）。亚贡叶200509采自辽宁省鞍山市岫岩新甸镇大山村，经辽宁中医药大学药学院康廷国教授鉴定为菊科亚贡Smallanthus sonchifolius的叶。所用试剂(硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、三氯化铁六水合物、铁氰化钾、十二烷基磺酸钠、盐酸、甲醇)购于各试剂公司。
       2 方法
       2.1  供试品的准备精密称取亚贡叶粉末约2 g，加入石油醚100 ml，用索氏提取器脱脂6 h。脱脂后粉末加入100 ml60%甲醇加热回流两次，各1.5 h。过滤，合并滤液，减压浓缩并定容至25 ml容量瓶。精密吸取1 ml再定容至25 ml容量瓶中备用。
       2.2  总黄酮含量测定［3］。
       2.2.1  芦丁对照品的准备精密称取芦丁对照品，用60% 的甲醇溶解后定容，配成浓度为95μg/ml 的芦丁对照品贮备液。精密吸取1 ml芦丁对照品溶液，定容至10 ml，制成浓度为9.5 μg/ml的芦丁对照品溶液。
       2.2.2  标准曲线的绘制精密吸取浓度为9.5μg/ml芦丁对照品溶液0，1.0，4.0 ml及95μg/ml的芦丁对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.5 ml于7只10 ml具塞比色管中，分别加入5% NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min后各加入10% Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀放置6 min。分别加入4%NaOH溶液4.0 ml，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置10 min。在波长505 nm处测定吸光度。回归方程：Y = 1.193 7X - 0.001 1 ，r= 0.999 7。其中Y为吸光度，X为芦丁对照品溶液浓度（mg/ml）。结果表明：芦丁在0.001～0.043 mg/ml的范围内呈良好的线性关系。
       2.2.3  方法学考察
       精密度实验：精密吸取95 μg/ml芦丁对照品溶液1.0 ml置于10 ml具塞比色管中，同“2.2.2”项下实验方法进行显色和测定，记录吸光度A，吸光度A的RSD为0.51%(n=5)。
       重现性实验：精密称取2 g同一批药材5份，按“2.1供试品的制备”及含量分析项下进行操作，制得5份供试液，各取适量，同“2.2.2”项下实验方法进行显色和测定，记录吸光度，吸光度A的RSD为1.5%(n=5)。
       
       稳定性实验：精密吸取95 μg/ml芦丁对照品溶液1.0 ml，同“2.2.2”项下实验方法进行显色，分别在15，20，30，45，60，100 min测定，结果表明样品在15～60 min内稳定。
       2.2.4  供试品总黄酮含量测定精密吸取供试品溶液3 ml置于10 ml具塞比色管中，同上述显色法测定其吸光度A。计算亚贡叶中总黄酮平均含量为3.2%，RSD=1.4% (n=6)。
       2.3  总酚酸含量测定［4］
       2.3.1  咖啡酸对照品的准备精密称取咖啡酸对照品，用60% 的甲醇溶解后定容，配成浓度为101μg/ml 的咖啡酸对照品贮备液。
       2.3.2  标准曲线的绘制精密吸取浓度为101 μg/ml咖啡酸对照品溶液0，0.2，0.3，0.5，1.0，2.0 ml于6只25ml具塞比色管中，加甲醇至5ml，加0.3% 十二烷基硫酸钠2 ml及0.6%FeCl3·6H2O:0.9% K3［Fe(CN) 6］(1∶1)混合溶液1 ml，混匀，在暗处放置5 min，加0.1 mol/L的HCL溶液至刻度，混匀，在暗处放置20 min。以显色剂为空白，在波长746 nm波长处测定吸光度A。回归方程为：Y = 4.942 8X-0.000 5，r= 0.999 8。其中Y为吸光度，X为绿原酸对照品溶液浓度（mg/ml）。结果表明：绿原酸在0.001～0.008 mg/ml的范围内呈良好的线性关系。
       2.3.3  方法学考察
       精密度实验：精密吸取绿原酸标准溶液1.00 ml置于25 ml量瓶，同“2.3.2”项下实验方法进行显色和测定，记录吸光度A，吸光度A的RSD为0.87%(n=5)。
       重现性实验：精密称取2 g同一批药材5份，按“2.1”供试液的制备及含量分析项下进行操作，制得5份供试液，各取适量，同“2.3.2”项下进行显色和测定，记录吸光度，吸光度A的RSD为2.1%(n=5)。
       
       稳定性实验：精密吸取绿原酸标准溶液1.0 ml，同“
       2.3.2”项下进行显色，分别在15，20，25，30，35，40，45，50 min测定，结果表明样品在15～40 min内稳定。
       2.3.4  供试品总酚酸含量测定精密吸取供试品溶液1 ml于10 ml具塞比色管中，同上述显色法测定其吸光度，A=0.703。计算亚贡叶中总酚酸平均含量为4.5%,RSD=1.6% (n=6)。
       3  讨论
       分别测定显色后的供试品及芦丁、绿原酸对照品最大吸收波长，确定总黄酮测定波长为505 nm，总酚酸测定波长为746 nm。
       精称供试品4份，分别用超声提取及回流提取。分别按“2.2.2”、“2.3.2”项显色方法测定其吸光度，计算总黄酮、总酚酸含量。结果超声提取法总黄酮、总酚酸含量明显低于回流提取法，故选用回流提取法。
        实验发现样品总黄酮测定的稳定性较好，而在总酚酸测定时发现40 min后波长扫描无明显最大吸收波长，吸收峰变扁平，故总酚酸的测定时间不宜过长，需要避光保存。
       
       实验测得亚贡叶中总黄酮含量为3.2%；总酚酸含量为4.5%。远远高于相关文献的报道［5］。可能与亚贡产地及提取、测定方法有关。
       亚贡引种到中国的时间较短，目前，我国对于亚贡的报道较少，尚未记载有关亚贡的质量控制标准。本文建立了检测亚贡叶中总黄酮、总酚酸含量的方法，该法简单、快捷，重现性好，可用于其质量控制和定量分析。
       【参考文献】
         　　［1］Kateina Valentová, Jitka Ulrichová. Smallanthus Sonchifolius and Lepidium Meyenii Prospective Andean Crops for the Prevention of Chronic diseases［J］. Biomed. Papers，2003，47（2）：119.
       
       ［2］Fengqiu Lin, Morifumi Hasegawa, Osamu Kodama.Purification and Identification of Antimicrobial Sesquiterpene Lactones from Yacon (Smallanthus sonchifolius) Leaves［J］.Biosci.Biotechnol.Biochem,2003，67(10)：2154.
       
       ［3］刘晔玮，王 勤，宋 海，等.沙枣叶中总黄酮的含量测定方法研究［J］.现代中药研究与实践，2006,20（1）：42.
       
       ［4］付煜荣，张万明，陈桂敏，等.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定［J］.中成药，2006,28(7): 1016.
       
       ［5］马挺军，吕飞杰，台建详，等.亚贡叶中营养成分和功能性化学成分分析［J］.植物资源与环境学报，2004,13(1):56.