文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的采用国际通用的高架十字迷宫焦虑动物模型（EPM），从行为学角度观察柴胡加龙骨牡蛎汤加减方对EPM大鼠的抗焦虑作用。方法连续给予柴胡加龙骨牡蛎汤加减方10 d，记录各组大鼠OE，OT，CE，CT值及向下探究次数等指标，表示大鼠的运动活力。结果该制剂可显著减少EPM大鼠OE%和OT%，降低大鼠在开放臂和中央平台区head-dipping次数及封闭臂的rearing值；3个剂量组量-效关系呈正相关。结论柴胡加龙骨牡蛎汤加减方具有明确的抗焦虑作用。
       【关键词】  柴胡加龙骨牡蛎汤 高架十字迷宫焦虑动物模型 大鼠 行为学
       Effect of Chaihu-Longgu Muli Decoction on Behavior of EPM Rats
       WANG Weixun, SUN Fujun, ZHANG Xilin, ZHANG Jun
       （Shandong Academy of Chinese Medicine, Jinan 250014,China）
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of anti-anxiety of Chaihu-Longgu Muli decoction on the angle of behavior by adopting the international common used anxiety animal model with the elevated plus-maze test (EPM). MethodsChaihu-Longgu Muli decoction was given to rats for 10 days. OE，OT，CE，CT and head-dipping were recorded.ResultsChaihu-Longgu Muli decoction could reduce the OE and OT percentage obviously, reduce the  open arm and  central platform"s head-dipping and close arm"s rearing in a dose-dependent manner.ConclusionChaihu-Longgu Muli decoction has the effect of anti-anxiety.
       Key words:Chaihu-Longgu Muli Decoction;  EPM;   Rat;  Behavior
       
       柴胡加龙骨牡蛎汤始见于《伤寒论》107条：“伤寒八九日，下之，胸满，烦惊，小便不利，谵语，不可转侧者，柴胡加龙骨牡蛎汤主之。”柴胡加龙骨牡蛎汤所治疗疾病多与精神情志有关，而由情志所致疾病的症状多较复杂，因此应用柴胡加龙骨牡蛎汤时出现的症状较柴胡类其他合方类方的症状明显增多。但仔细梳理起来会发现多数症状与柴胡汤证相关，即使有些症状在应用小柴胡汤时并不多见。近年来笔者应用柴胡加龙骨牡蛎汤治疗过度焦虑情绪反应和广泛性焦虑症，取得了满意的临床效果。为了研究本制剂作用机理，进行了动物实验观察。
       1  材料与仪器
       1.1  药物柴胡加龙骨牡蛎汤加减方（Chaihu-Longgu Muli decoction, CJLM）由柴胡12 g，龙骨30 g，牡蛎30 g等药物组成，临床成人每日用量拟为50 g，口服。实验用制剂由山东省中医药研究院制剂中心制备。药液含生药量为4.0875 g/ml，4℃保存备用。
       
       大鼠临床等效量为50×0.018 g/200 g=4.5 g/kg。实验给药拟用临床等效量的4，2，1倍，分别为18，9 g/kg和4.5 g/kg，给药体积10 ml/kg，临用前按给药量稀释至相应浓度给药。
       
       DZP（Diazepam Tablets, 地西泮片），临汾宝珠制药有限公司产品，批号050301。大鼠给药按照1 mg/kg给药。
       1.2  动物 SPF级Wistar大鼠，180~200 g，♀♂各半，90只，山东大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（鲁）20030004。
       1.3  饲料 鼠全价营养饲料，山东省实验动物管理中心提供，合格证号：SCXK（鲁）20040014。
       1.4  饲养环境 山东省中医药研究院动物实验管理中心，SPF级，许可证号：SYXK（鲁）20050052。
       1.5  仪器 大鼠高架十字迷宫（EPM）：采用国际通用方法制作［1］。由两个相对的开放臂（open arm，长×宽为50 cm × 10 cm）、两个相对的封闭臂（enclosed arm，close arm，长×宽×高分别为50 cm× 10 cm × 40 cm）、一个连接四只臂的中央平台（central platform，10 cm × 10 cm），即：开放臂-中央平台-开放臂或封闭臂-中央平台-封闭臂，二者互相垂直成为“十”（plus）形状和围绕在开放臂边缘1cm高的矮挡板组成（目的是防止动物在探究过程中不慎滑下迷宫）。本迷宫由国产有机玻璃制作（1 cm厚），四个臂的底板及中央平台涂成黑色外，其余部位均无色透明。有机玻璃部分整体固定于（由黑色等长宽的“十”字木架和不锈钢可升降底座组成的）支架上，使迷宫底板调节到距实验室地面50 cm处。
       2  方法
       2.1  动物分组与给药 大鼠购进后适应性饲养1周，不限食水。光照节律12L∶12D（6∶00~18∶00），保持安静。按体重、性别随机均衡分为空白对照、阳性药对照组和CJLM高、中、低剂量组共5组，每组12只。其中CJLM 3个剂量组分别按18.0，9.0 g/kg和4.5 g/kg灌胃，阳性药对照组给予1 mg/ kg灌胃，空白对照组灌服等容积的生理盐水。各组连续给药10 d，末次给药2 h后进行行为测试，所有动物提前2 h进入测试实验室，各组并列进行测试。测试时间：每日8：30~15：30。
       2.2  行为学测试
       2.2.1  测试条件 实验室内光线昏暗（以1.5 m距离处能区分大鼠细微活动的最低亮度为准）并保持恒亮，室温25℃左右，保持安静。测试箱放置于实验室一角，周围2 m高布以黑色单调背景。
       2.2.2   测试指标 迷宫测试前将每只大鼠单独放入塑料盒中，任其自由探究5min后迅速置于EPM的中央平台处，使其头部正对其中一个开放臂，释放后即开始记录下述指标（实验过程搬运动物、观察记录动物活动均由专人负责）：
       
       进入开放臂次数（open arm entry, OE）：进入到任一开放臂的次数，以大鼠4个爪子均进入到臂内为准，中途1个爪子从该臂中完全退出则为该次进入活动完成。
       
       进入开放臂时间（open arm time, OT）：进入开放臂的时间，单位：s。
       
       进入封闭臂次数（close arm entry, CE）：进入到任一封闭臂的次数，以大鼠四个爪子均进入到臂内为准。
       
       进入封闭臂时间（close arm time, CT）：进入封闭臂的时间，单位：s。
       
       向下探究次数（head dipping）：大鼠置身于中央平台或开放臂时，一边用前爪握住迷宫边缘一边把头部和肩部伸出开放臂的边缘向迷宫外面探究的行为次数。
       
       封闭臂后腿直立次数（rearing）：大鼠在封闭臂前腿抬起以后腿支持使身体竖立的次数。
       
       由以上指标分别计算出：① 进入开放臂和封闭臂的总次数（OE+CE）：表示大鼠的运动活力（locomotor activity）；② 进入开放臂次数比例（OE%）：即OE/（OE+CE）×100%。③ 开放臂停留时间比例（OT%）：即OT/（OT+CT）×100%。
       
       每只大鼠测试5 min。中间用湿布擦拭迷宫，清除粪便，继用干布擦净后再进行下一只大鼠的测试。
       2.3  数据的统计处理 所得数据均用SPSS 10.0 for windows软件统计处理，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行检验。
       3  结果
       3. 1  CJLM对EPM大鼠OE+ CE，OE%，OT%的影响结果见表1。与对照组比较，DZP组，CJLM 3个剂量组大鼠OE%和OT %均有增高趋势；与对照组比较，高剂量组OE+CE明显高于对照组（P<0.01），OE%和OT %也具有明显的统计学意义（P<0.05），提示本剂量下大鼠的运动能力有所增加，中剂量组的OE%与对照组比较具有高度的统计学意义（P<0.01），其它两项指标有增加，但比较无显著性差异( P > 0.05)。综合评价CJLM的疗效，显示高剂量组作用较为明显，与DZP显著性差异，整体量-效关系呈正相关。
       表1  CJLM对EPM大鼠OE+CE，OE%，OT%的影响（略）
       与空白组比较，*P<0.05，**P< 0.01；n=10
       3. 2  CJLM对EPM大鼠head-dipping和rearing的影响 结果见表2。与对照组比较，DZP组大鼠在开放臂和中央平台区head-dipping和Rearing次数均明显下降，其中Rearing次数与对照组比较有明显的统计学意义（P< 0.05）。CJLM 3个剂量组对Head-dipping次数影响不明显，对Rearing次数有抑制作用，中剂量存在高度的统计学意义（P< 0.01）。
       4  讨论
          
       广泛性焦虑症是一种以广泛和持续焦虑为主要特征的神经症状，常伴以头晕、胸闷、心悸等植物神经功能症状和运动性紧张，一般属于中医“心神不宁”的范畴，多见于中医的心悸、不寐、郁证、癫狂等证。临证一般认为情志为病，当从疏解安神角度辨治。CJLM具有镇惊安神功效，与目前中医治疗焦虑症的基本治法相吻合，其在精神疾病方面的临床有效运用也提示本方可能具有潜在的抗焦虑效用［2］。
       表2  CJLM对EPM大鼠Head-dipping、Rearing的影响（略）
       与空白组比较，*P<0.05，**P< 0.01；n=10
        　
       本研究引入的高架十字迷宫模型，为抗焦虑研究中公认的非条件反射模型。它利用动物对新异环境的探究特性相对高悬敞开臂的恐惧心理，形成动物的矛盾行为，实验指标以进入开放臂的百分数（OE%）在开放臂停留时间的百分数（OT%）反映动物的焦虑状态，焦虑动物的OE%和OT %明显降低，经典抗焦虑药物则使两者升高［3］；开放臂和中央平台区head dipping次数则反映了在非保护区内的探索行为，代表动物对陌生环境的好奇探究或因惊恐而寻求逃避［4］，与焦虑程度有一定相关性；开放臂和封闭臂总进入次数反映动物总的运动能力，封闭臂rearing值也可用来观察药物有无镇静作用及镇静强度。
       
       本实验观察到，CJLM 3个剂量组均可显著增加EPM大鼠OE%和OT%值，与对照组比较，高剂量组OE+CE明显高于对照组（P<0.01），OE%和OT %也具有明显的统计学意义（P<0.05），中剂量组的OE%与对照组比较具有高度的统计学意义（P<0.01），其它两项指标有增加，但比较无显著性差异( P> 0.05)。抑制大鼠在封闭臂的rearing值，但对大鼠在开放臂和平台区的Head-dipping无明显的影响趋势。实验结果表明，CJLM在4.5~18.0 g/kg剂量范围内，具有明显的抗焦虑效应，与DZP的作用方向一致，从对EPM大鼠各项指标影响结果看，以18 g/kg剂量效果最好，从各项指标的综合评价分析，其量-效关系呈正性相关。
       
       本研究证实，柴胡加龙骨牡蛎汤加减方（CJLM）具有确切的抗焦虑作用，从小剂量开始此效用逐渐增强，在实验用量范围内量-效关系呈现正性相关，但其在增加OE+CE，OE%和OT%值的同时，却明显抑制rearing值，尚需进一步深入研究证实其作用机制。
       【参考文献】
         　　［1］ Pellow S, Chopin P, File SE, et al. Validation of open: closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat［J］.J Neurosci Methods, 1985, 14(3):149.
       
       ［2］ 高 翔. 柴胡加龙骨牡蛎汤的临床应用［J］.中国中医药信息杂志，2003，11（10）：64.
       
       ［3］ Lister RG. The use of a plus-maze to measure anxiety in the mice［J］.Psvchophaimacolony(Berl)，1987, 92(2):180.
       
       ［4］ File SE, Wardill AG, Validity of head-dippinn as a measure of exploration in a modified hole board［J］.Psychopharmaccologia,1975, 44(1):53.