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       【摘要】 
       目的用反相高效液相色谱法建立滇桂艾纳香中绿原酸的含量测定方法。方法Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱，流动相为0.2%磷酸乙腈（93∶7），检测波长326 nm，流速1.0 ml/min。结果在该色谱条件下，绿原酸在15.3～61.2 mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 2。样品平均回收率为100.5％，RSD为1.2%（n=6）。结论方法简便易行，结果准确，重复性好，可用于滇桂艾纳香中绿原酸含量的测定。
       【关键词】  滇桂艾纳香 绿原酸 高效液相色谱法
       Determination of Chlorogenic Acid in Blumea riparia (Bl.) DC. by HPLC
       LEI Ting，    LIN Cuiwu*，CHEN Haiyan ， Li Guiqing
       （School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China）
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid in Blumea riparia (Bl.) DC. by HPLC.MethodsColumn was Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm).The mobile phase was 0.2%phosphoric acid-acetonitrile(93∶7). The detection wavelength was 326nm and flow rate was 1.0 ml/min.ResultsIn this condition, chlorogenic acid showed a good linearity in the range of 15.3～61.2 mg/L, r＝0.9992. The average recovery was 100.5%, and RSD was 1.2%(n=6).ConclusionThis method is reliable, simple and accurate. It can be use for the determination of chlorogenic acid in Blumea riparia (Bl.) DC.
       Key words：Blumea riparia (Bl.) DC；   Chlorogenic acid；   HPLC
       
       滇桂艾纳香Blumea riparia (Bl.)DC为菊科艾纳香属多年生木质草本植物，在我国仅分布在贵州、云南、广东、广西等省少数湿热地区［1］。以滇桂艾纳香为原料生产的妇血康颗粒具有止血、活血、祛淤、生肌及促进子宫复旧的功效。多年的临床研究表明，该产品独特的功效成分能迅速到达病灶，加速子宫内膜脱落、血管闭合，使卵巢功能迅速恢复正常，取效迅速。它填补了当今对“功血”病和上环后出血治疗尚无特效药的空白［2］。但目前对于滇桂艾纳香化学成分的研究很少，其中药材和相关制剂缺乏内在的质量评估标准。笔者在前期对滇桂艾纳香的化学成分分离及活性研究的基础上，确定绿原酸为滇桂艾纳香的主要药效成分之一［3~5］。本实验建立了滇桂艾纳香中绿原酸的反相高效液相色谱测定方法。
       1    仪器与试剂
          
       高效液相色谱仪：LabAlliance公司，prep 100 泵，Lab Alliance medol 500检测器，N2010双通道色谱工作站；SK3310LHC超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；AL204型电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；绿原酸对照品为成都福润德实业有限公司提供，含量在99％以上；滇桂艾纳香干草（广西桂西制药有限公司提供）。乙腈、甲醇为色谱纯试剂，乙醇、磷酸为分析纯试剂，重蒸水自制。
       2    方法与结果
       2.1    色谱条件  Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为0.2％磷酸－乙腈（93∶7）；流速1.0 ml ·min-1；检测波长326 nm［6］；柱温为室温；进样量10 μl。
       2.2  对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品25.5 mg,用甲醇溶解并定容至50 ml，摇匀。分别移取0.3，0.5，0.7，0.9，1.2 ml于5只10 ml容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀。得到浓度分别为15.3，25.5，35.7，45.9，61.2 mg/L的溶液。
       2.3  供试品溶液的制备  将滇桂艾纳香干草干燥后粉碎，过20目筛，混合均匀后精密称取1.5 g置于具塞烧瓶中，准确加入53%乙醇50 ml，称定重量，用超声波80℃提取1 h，放冷，再称定重量，用53％乙醇补足减失重量，摇匀备用。
       2.4  线性关系考察  精密吸取对照品溶液10.0 μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，见图1。以峰面积分值为纵坐标（Y），样品浓度（mg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线，结果表明绿原酸在15.3～61.2 mg/L范围内呈良好的线性关系。回归方程为：Y=12 494X-128 013，r=0.999 2。
       图1  对照品（左）和样品（右）色谱图（略）
       2.5  精密度实验精密吸取“2.3”项制备的样品溶液10 μl，重复进样6次，测定峰面积，RSD为0.72%，精密度良好，其色谱峰见图1。
       表1  回收率实验结果（略）
       2.6    稳定性实验取供试品溶液，于制备后0，2，4，7，24h进样10 μl，测定峰面积，RSD为0.45％，结果表明样品溶液在24 h内稳定。
       2.7  重复性实验称取同一批样品6份，按照“2.3”项下的方法处理并测定含量，RSD为0.71%。
       2.8  回收率实验精密称取已知含量的样品6份，并分别精密加入一定量的对照品，按“2.3”项下方法处理并测定含量，分别计算加样回收率。结果见表1。
       2.9  样品的含量测定  分别精密称取药材叶、枝、花各1.5 g，按“2.3”的方法制备供试液，测定含量。结果见表2。
       表2  样品含量测定（略）
       3  讨论
          
       在对乙醇浓度进行单因素实验时发现，绿原酸的提取得率随着乙醇浓度的升高呈先上升后下降的趋势，当乙醇浓度为53％时，绿原酸的提取得率达到最大。而随着提取温度升高，提取得率也增大，当提取温度上升到90℃以上，绿原酸得率反而下降，这和绿原酸在高温下可能分解有关。
       
       在选择流动相时，我们用了甲醇－水，甲醇－水－甲酸，乙腈－水，乙腈－水－磷酸几个系统。以甲醇－水为流动相时，样品的保留时间太长，而且分离度也不是很好。用乙腈－水为流动相，所测样品能够较好的分离，加酸后能够有效抑制拖尾。
       
       通过测定滇桂艾纳香叶、花、枝的含量可以看出其叶中绿原酸的含量最大，枝中含量最小。此方法的建立可以为滇桂艾纳香中药材及其制剂的质量控制提供参考。
       【参考文献】
         　　［1］ 中国植物志编委会.中国植物志,75卷［M］.北京:科学出版社,1979:13.
       
       ［2］ 孙香灵.妇血康冲剂用于药物流产后阴道流血116例体会［J］.现代中西医结合杂志,2004,13(3):365.
       
       ［3］ 陈 奇.中药药理研究方法学,第2版［M］.北京:人民卫生出版社,2006：478.
       
       ［4］ 吴卫华,康 桢,欧阳冬生,等.绿原酸的药理学研究进展［J］.天然产物研究与开发,2006,18:691.
       
       ［5］ 郑毅男,李向高,黄 晔,等.人参水提取物止血活性的药理研究［J］.吉林农业大学学报,1990,12(1):29.
       
       ［6］ 程令梅,李桂冬.HPLC法测定珍菊降压片中野菊花绿原酸的含量［J］.化学分析计量,2007,16(1):48.