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       【摘要】 
       目的建立活血止痛合剂的薄层色谱鉴别方法。方法采用薄层色谱法鉴别处方中投料量较大的5味药。结果处方中的红花、大黄、当归、赤芍、金银花的薄层色谱具有鉴别特征，且重现性好。结论薄层色谱法鉴别方法简便可靠，专属性强，可作为活血止痛合剂的质控指标。
       【关键词】  活血止痛合剂 薄层色谱 红花 大黄 当归 赤芍 金银花
       活血止痛合剂是我医院的固定处方制剂，由红花、川牛膝、大黄、防风、当归、柴胡、赤芍、金银花、川芎、乌药、桂枝等组成；其中当归、金银花、川芎、乌药等用水蒸气蒸馏提取挥发油，其余药味加水煎煮，滤过，取滤液与挥发油混匀，分装、灭菌即得；具有活血清淤，理气止痛的功能；临床上用于跌打损伤，新伤初期，淤血作痛等症，疗效好。本文用薄层色谱法鉴别了处方中所含的红花、大黄、当归、赤芍、金银花。现报道如下。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器AL104型分析天平，HH恒温水浴锅（江苏金坛中大仪器厂），202－1AB型恒温干燥箱，Model C3860型超声仪80－1型离心机 ，KDM型控温电热套ZF-I型三用紫外分析仪。
       
       1.2  试药甲醇（上海亭新化工试剂厂），无水乙醇、三氯甲烷、石油醚、氨水、正丁醇、丙酮等（洛阳市化学试剂厂），以上均为分析纯。薄层层析硅胶G化学纯（青岛海洋化工有限公司）红花对照药材（批号910－9807）、芍药苷对照品（批号110736－200220）、大黄素对照品（批号110756－200110）、绿原酸对照品（批号110753－200212）、当归对照药材(批号0927-9705)均购自中国药品生物制品检定所。
       2  方法与结果
       2.1  红花的薄层色谱鉴别［1］取本品10 ml，用石油醚（90～120℃）振摇提取两次，15 ml/次，弃去石油醚液，水溶液水浴蒸干，残渣加80%丙酮溶液1 ml使溶解，作为供试品溶液。取红花空白对照样品10 ml，同法制成红花空白对照样品溶液。另取红花对照药材1 g，加80%丙酮溶液10 ml，密塞，振摇15 min，过滤，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各5 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。结果见图1。
       2.2  当归的薄层色谱鉴别［2］取本品10 ml，加乙醚振摇提取两次，20 ml/次，合并乙醚提取液（水溶液备用），挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取当归空白对照样品10 ml，同法制成当归空白对照样品溶液。另取当归对照药材0.5 g，加乙醚20 ml，超声15 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰。结果见图2。
       图1  活血止痛合剂中红花的TLC图（略）         
       图2  活血止痛合剂中当归的TLC图（略）
       
       2.3  大黄的薄层色谱鉴别［3］  取鉴别“2.2”项下备用的水溶液，水浴加热除去残留乙醚，加水5 ml，加盐酸1 ml，置热水浴中加热30 min，立即冷却，用乙醚提取两次，10 ml/次,合并乙醚提取液，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取大黄空白对照样品10 ml，同法制成大黄空白对照样品溶液。另取大黄对照药材1 g，加乙醇30 ml加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各5 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。阴性样品无干扰。结果见图3。
       图3  活血止痛合剂中大黄的TLC图
       2.4  金银花的薄层色谱鉴别［3］取本品10 ml,用乙醚振摇提取两次，15 ml/次,弃去乙醚提取液，水溶液水浴加热挥去残留乙醚，加稀盐酸调节pH值至1～2，离心5 min（2 500 r/min），分取上清液，加醋酸乙酯25 ml振摇提取，分取醋酸乙酯溶液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取金银花空白对照样品10 ml，同法制成金银花空白对照样品溶液。另取绿原酸对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各1～2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-甲醇-甲酸（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰。结果见图4。
       2.5  赤芍的薄层色谱鉴别［2］取本品10 ml,用乙醚振摇提取两次，15 ml/次,弃去乙醚提取液，水溶液水浴加热挥去残留乙醚，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，15 ml/次，合并正丁醇提取液，置水浴上浓缩至约1 ml,加适量中性氧化铝，搅匀，在水浴上干燥，加在中性氧化铝柱（200目，1 g,内径约1 cm）上，用乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。取赤芍空白对照样品10 ml，同法制成赤芍空白对照样品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图5。
       图4  活血止痛合剂中金银花的TLC图（略）         
       图5  活血止痛合剂中赤芍的TLC图  （略）
       
       3  讨论
          
       在设计“2.1”项红花的薄层色谱鉴别时，分别采用了不同沸程的石油醚（60～90℃，90～120℃）来除去挥发油等亲脂性强的成分，结果表明石油醚（90～120℃）除去脂溶性成分效果好，使得薄层色谱图中红花的特征斑点清晰可见。
       
       在“2.2”项当归对照药材处理中用超声法简便，提取效果好，故没有采用加热回流的方法。
       
       本组方含16味药，既有水溶性成分，也含挥发油，在设计鉴别金银花的绿原酸和赤芍的芍药苷这些水溶性成分时，采用乙醚振摇提取除去挥发油等脂溶性成分后，使得薄层色谱分离效果好，斑点清晰可见。
       
       本实验所采用的方法稳定，斑点显色清晰，专属性及重现性好，可作为活血止痛合剂制剂的有效鉴别方法。
       【参考文献】
         　　［1］ 高景莘.逐淤消肿和剂的质量标准研究［J］.成都中医药大学学报，2000,23(3):47.
       
       ［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：271，89，146.
       
       ［3］ 钟 品.复方金银花冲剂的薄层色谱研究［J］.中华食用医药杂志，2004,17（4)：65.