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       【摘要】 
       目的探索蛇床子提取物对解脲支原体的体外抗菌效果，对蛇床子提取物进行体外抗解脲支原体（Uu）实验研究。方法微量稀释法，即以Uu液体培养基，将解脲栓倍比稀释后进行培养观察。结果与结论蛇床子提取物在体外对解脲支原体有抑菌作用，其最小抑菌浓度（MIC）值为62.5~125 μg/ml。
       【关键词】  解脲支原体 蛇床子提取物 最小抑菌浓度
       Study on the Anti-Ureaplasma Urealyticum Effect of Fructus Cnidii Extract
       FENG Feng, YANG Jianhong*, ZHANG Junwei
       （Ningxia Medical College, Yinchuan 750021, China; Chinese Medical Academy of Heilongjiang Province, Harbin 150036, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the anti-Ureaplasma urealyticum effect of Fructus Cnidii extract.MethodsUrealyticum was cultured in a liquid medium and the bacteriostasis of the Fructus Cnidii extract against Uu was observed.ResultsThe results showed that the range of MIC of Fructus Cnidii extract against Uu was 62.5~125 μg/ml.ConclusionFrudus Cnidiiertract has obvious inhibitory action against Uu.
       Key words：Fructus cnidii extracts;  Ureaplasma urealyticum;  MIC
       
       蛇床子有杀虫之功效,是治疗阴痒带下之常用药。许多文献报道其提取物对真菌有抑制作用，蛇床子水提取物还对一些细菌有杀灭作用［1，2］。但有关蛇床子抗解脲支原体的作用目前未见报道。为了证实蛇床子抗解脲支原体作用，探讨其作用机制，笔者对其进行了体外抗菌实验的研究。
       1  材料与仪器
       1.1  菌株解脲支原体标准菌株（Uu3），由首都儿科研究所馈赠。
       1.2  药物蛇床子由黑龙江省中医研究院中药所提供。
       1.3  培养基的配制取心脑浸液70 ml(pH 5.8～6.2),加胎牛血清20 ml，加鲜酵母浸液10 ml,加20万U青霉素0.5   ml，加20％尿素1 ml,混匀后置冰箱备用。
       1.4   仪器电热压力蒸气灭菌器DL-CJ-2F型医用洁净工作台，DH5000电热恒温培养箱， ESJ60-4电子天平， 微量加样器，96孔微量细胞培养板等。
       2  方法
       2.1   解脲支原体培养  将标准冻干Uu3型菌株用2 ml培养液在室温下混匀、密封，置于37℃恒温培养箱中孵育18~36 h,当培养液颜色由黄变为红色且液体澄明时，表示支原体培养为阳性。
       2.2   解脲支原体浓度的测定（CCU测定）取无菌试管10支，将Uu菌液0.1 ml从第1管至第10管以10倍梯度倍比稀释成10－1～10－10 系列浓度，密封后置于37 ℃恒温培养箱，1周后观察Uu生长情况，以发生颜色变化的最高稀释度作为颜色改变单位（color change unit,CCU），菌液浓度以CCU/ml计［3］。
       2.3   药物溶液的配制蛇床子提取物（主要成分为蛇床子素）用95%乙醇溶解成1 g/ml原液，滤菌器除菌后用无菌磷酸盐缓冲溶液稀释为2 mg/ml(pH 5.8～6.2)。红霉素用95%无菌乙醇溶解成1  g/ml原液后用生理盐水稀释成0.256 mg/ml。
       2.4   MIC的测定 将Uu菌液用培养基稀释为104～105 CCU/ml，在微量反应板每行的第1孔中按表1顺序加入200 μl药液，第2孔至第12孔分别加入100 μl液体培养基。取第1孔药液100 μl加入第2孔中混匀后再取100 μl加入第3孔中混匀……如此反复,按次序将药物从第1~10孔倍比稀释成表1所标浓度。在微量反应板第1~11孔内分别加入100 μl菌液为阴性对照孔，第12孔加100 μl培养基做为阳性对照孔。每孔内滴入1滴灭菌液体石蜡，37℃孵育7 d。培养液由黄色变为红色为阴性，不变色为阳性。每种药物重复3行，每日做1次，连续3 d。以不出现颜色变化的最小浓度为最小有效抑制支原体生长的药物浓度（MIC）［4］。见表1。
       表1  受试药物稀释浓度（略）
       3  结果
          
       各受试药物对解脲支原体的最低抑菌浓度如下：
       
       蛇床子提取物：62.5～125 μg/ml；红霉素：4～8 μg/ml。
       4  讨论
         
       　　解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu), 属于柔膜纲支原体目支原体科的脲原体属，是介于细菌和病毒之间能独立存活的最小原核型微生物。目前已确定，解脲支原体可以导致大约15%的男性非特异性尿道炎［5］，也是近年来最被关注的与不良妊娠结局相关的支原体［6］，它还可导致不孕症、早产儿呼吸道上皮溃疡形成及新生儿中枢神经系统出血及各系统感染［7］等疾病。
       
       Uu无细胞壁，由于其特殊的结构，β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类和洁霉素抗菌素对它均不敏感 ［8］。目前临床治疗药物常用抑制或影响蛋白质合成的大环内酯类、四环素类和喹诺酮类抗生素［9］。但目前越来越多的研究显示Uu对各种抗菌素已产生明显耐药性［10，11］，这给单纯使用抗菌素对泌尿生殖道Uu感染治疗带来很大困难。目前，很多科研工作者都在努力寻找新的、有效的抗Uu药物。中医药治疗Uu感染有着很好的疗效，但作用机理和作用成分不明确一直是妨碍其发展的主要原因之一。
       
       蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium mommieri(L.)Cusson的果实,具有强阳补肾、散寒祛风、燥湿杀虫之功效。临床上以外用为主，取其燥湿祛风杀虫作用，治阴痿囊湿、女子阴痛阴痒等症。蛇床子主要含有蛇床子素等香豆素类，具有多种药理作用［12］。许多文献报道蛇床子对部分病毒、细菌和真菌有抑制作用，但以蛇床子素为主要成分的提取物抗解脲支原体作用尚未见报道。
       
       我们通过体外抑菌实验测得蛇床子提取物抗Uu的MIC和MBC值，为中医药治疗Uu感染提供了一定的理论依据，也为耐药性不断增加的情况下寻找新的抗Uu药物提供了新的思路。
       【参考文献】
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