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       【摘要】 
       目的测定异株荨麻不同炮制品中总黄酮和多糖等两种有效成分的含量，探讨不同炮制方法存在的差异。方法分光光度计法。结果各炮制品中总黄酮含量按如下顺序减少：自然晾干荨麻＞炒荨麻＞105℃杀青晾干荨麻＞220℃烘荨麻＞焦荨麻＞120℃烘荨麻＞170℃烘荨麻。各炮制品中多糖含量按如下顺序减少：炒荨麻＞170℃烘荨麻＞220℃烘荨麻＞自然晾干荨麻＞120℃烘荨麻＞焦荨麻＞105℃杀青晾干荨麻。结论不同炮制方法能使异株荨麻中总黄酮和多糖含量产生变化。
       【关键词】  异株荨麻 炮制 总黄酮 多糖
       Analysis on Contents of Flavonoids and Polysaccharides in Urtica dioica L.and its Different Processed Products
       XIE Xiuli,  HE Bin,YU Haiqun ,WANG Lanzhen*
       (College of Natural Resources and Environment,Beijing Forestry University，100083,China)
       Abstract：Objective Determine the content of flavonoids and polysaccharides in different products of Urtica dioica L.,and the difference in different processed methods were discussed.MethodsAl(NO3)3 colorimetry.ResultsThe content of flavonoids in different products changed as following:products by natural airing＞products by frying＞products in natural air drying after deactivation of enzymes at 105℃＞products by drying at 220℃＞products by parching＞products by drying at 120℃＞products by drying at 170℃＞.The content of polysaccharides in different products changed as following:products by frying＞products by drying at 170℃＞products by drying at 220℃＞products by natural airing＞products by drying at 120℃＞products by parching＞products in natural air drying after deactivation at 105℃.ConclusionThe different processed methods can change the content of flavonoids and polysaccharides.
       Key words：Urtica dioica L.；  Drug processing；   Flavonoids；  Polysaccharides
       
       荨麻为被子植物门、荨麻科(Urticaceae) 荨麻属Urtica L.的一年生或多年生草本植物的干燥全草或根，为我国常用的民间药和民族药，在汉族和藏族、维吾尔族、布依族、傈僳族等多个少数民族中广泛使用。其药用历史悠久，始载于《益部方物略记》［1，2］，常用于治疗风湿病、扭伤疼痛及皮肤瘙痒、荨麻疹、风疹、产后抽搐、慢性支气管炎、糖尿病、高血压病等，疗效确切，无明显的毒副作用。    
       异株荨麻Urtica dioica L.是荨麻属植物中最具开发利用价值的种类，广泛分布在欧洲、美洲、非洲和亚洲的温带地区。国外对其功能的研究很详细，特别是德国对异株荨麻在医药上开发取得了显著效果，临床研究也取得了显著的进展，已获得了异株荨麻提取物和提取物复方配剂多项专利［3］。异株荨麻在我国云南、西藏、青海和新疆等地也有野生种分布，而目前国内对于其开发利用还处于起步阶段［3］，因此，合理利用我国的异株荨麻资源，将会具有广阔的开发利用空间和产生巨大的经济、社会效益，显示出其独特的药用价值。
       
       现有研究已从异株荨麻的醇提物和水提物中分离出约90种化合物，包括甘油硬脂酸酯、三萜酸、香豆素、简单酚、木脂素、神经酰胺及羟基脂肪酸、有机酸、多糖、植物凝集素等［4］。其活性成分主要有黄酮类、有机酸类、酚类、苯丙素类、甾醇、蛋白质、多糖等。相关药理和临床实验证实，黄酮类化合物作为药用植物的主要活性成分之一，具有广泛的药理功能，已经成为当今社会研究和开发利用的热点。药理研究也证实，荨麻多糖确有显著的抗炎、增强免疫作用，为抗炎、抗癌的主要活性成分之一［5~8］。本文选择异株荨麻中黄酮类化合物及多糖为指标，测定了异株荨麻不同炒制品、不同烘制品中此两类物质的含量变化，以探讨荨麻炮制的意义。
       1  仪器、药品及试剂
          
       752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所；其余试剂均为分析纯。
       
       异株荨麻采自北京林业大学西山林场，不同炮制方法处理后，经超微粉碎机粉碎，过60目筛网，干燥器中保存、备用。
       2  方法与结果
       2.1  药品炮制生荨麻1：取荨麻后自然晾干、粉碎、过60目筛。生荨麻2：取荨麻后在105℃杀青15 min后晾干、粉碎、过60目筛。烘烤制品：取荨麻后在105℃杀青15 min后，分别用120，170，220℃烘干后取出，粉碎、过60目筛。炒荨麻：取荨麻后用文火炒至表面颜色加深，取出，放凉、粉碎、过60目筛。焦荨麻：取荨麻后置热锅中，用文火炒至表面焦褐色，透出焦香气时取出、放凉、粉碎、过60目筛。测定异株荨麻的含水率为76%。
       2.2  总黄酮含量测定
       2.2.1  样品提取方法的选择
       
       提取时间及方法：取样品(异株荨麻)粉末(过60目)适量，精密称定，置于100 ml具塞锥形瓶中，各加甲醇溶液30ml和2NHCl各4 ml，浸泡过夜，1号样品于40℃超声波处理1 h，2，3，4号样品置水浴中分别加热回流1，2，4 h，过滤，提取液回收溶剂，残渣加甲醇溶解移至50 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过SpC18小柱，取滤液1 ml置于10 ml具塞试管中，按照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出各样品溶液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表1。由此可见, 加热回流2 h已基本提取完全，超声波辅助提取和热回流提取的效果基本相同，但提取时间缩短，故本研究中采用超声波辅助提取方式。
       
       提取溶剂的选择：取样品(异株荨麻)粉末(过60目)适量，精密称定，分别置于索氏提取器中，用氯仿溶液50 ml回流8 h脱脂，弃氯仿提取液［9］。荨麻挥干氯仿后，分别加入90%，80%，70%，60%的乙醇各50 ml, 称重，于40℃下超声波辅助提取45 min，放置室温，称重并补足失重，过滤。各准确吸取滤液1 ml至25 ml容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，取5 ml置于10 ml具塞试管中，按照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出各样品溶液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表2。结果表明, 80%乙醇提取效率最高。故本研究中采用80%乙醇作为提取溶剂。
       2.2.2  样品溶液制备分别称取生荨麻及各炮制品各约1 g，用50 ml氯仿浸泡过夜，在40℃用40 Hz超声波处理30 min脱脂，摇匀、过滤，挥干氯仿后，滤渣加入80%乙醇各50 ml，称重，同样超声处理30 min，取出放置至室温，称重，补足失重，过滤，混匀后，即得样品溶液。
       表1  提取方法的选择（略）、
       表2  提取溶剂的选择（略）
       2.2.3  标准曲线的制备精密称取芦丁5.6 mg（120℃烘至恒重）置于50ml容量瓶中，加80%乙醇稀释至刻度、摇匀（0.102 mg/ml），准确吸取0.0（空白），1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分别置于10 ml具塞试管中，各加30%乙醇至5 ml，先加5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，加4%NaOH 4 ml，各用水稀释到10 ml，放置15~20 min，在波长510 nm处测定吸收度以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘出标准曲线（如图1）。经回归分析,得到回归方程:Y=15.275X-0.150 3,R2=0.999 5(n=7)。
       图1  黄酮标准曲线（略）
       2.2.4   样品的测定各取样品溶液5 ml分别置于10 ml具塞试管中，按照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出各样品液中总黄酮浓度，然后计算样品中的含量。结果见表3。
       表3  异株荨麻不同炮制品中黄酮与多糖的平均含量（略）
       表4  异株荨麻不同炮制方法样品中的总黄酮和多糖含量的方差分析表（略）
       表5  异株荨麻不同炮制方法样品中总黄酮和多糖含量差异显著性检验（略）
       2.3   多糖含量的测定
       2.3.1  样品溶液制备精确称取样品(异株荨麻)粉末0.35 g，加95% 的乙醇40 ml回流1 h，趁热过滤，用95%的乙醇洗涤滤渣3次；将滤渣和滤纸一起置于烧瓶中，加50 ml蒸馏水，在80℃水浴条件下溶解30 min；趁热过滤,将滤液用蒸馏水定容到50  ml容量瓶中，制得待测溶液［10］。
       2.3.2  多糖标准曲线的绘制  精确称取葡萄糖0.100 9 g，用蒸馏水定容到100 ml容量瓶中，制得1.009 mg/ml的葡萄糖溶液。分别取葡萄糖溶液0.25，0.5，1，1.5，2，2.5 ml，定容到50 ml容量瓶中，得到不同浓度的葡萄糖溶液。各取上述不同浓度的溶液2 ml于具塞试管中，加1 ml苯酚，同时加入浓硫酸5 ml，摇匀，放置5 min，在沸水浴上加热15 min，冷却后在490 nm下测定。以吸光度为纵坐标，以质量(mg)为横坐标，绘制多糖标准曲线(图2)。 结果表明，吸光度与质量呈良好的线性关系，经最小二乘法回归处理得到方程，Y=50.665X-0.008 9,相关系数R2=0.992 5。
       图2  多糖标准曲线（略）
       2.3.3  样品的测定吸取2ml待测溶液，按“多糖标准曲线绘制”项下操作，测定吸光度，由回归方程求出各样品中多糖的含量。结果见表3。
       2.4  数据统计分析分别对各样品液中总黄酮含量和多糖含量测定数据做单因素试验的方差分析，以检验各样品液中的总黄酮含量或多糖含量间有无显著差异，方差分析结果见表4。方差分析结果显示，在显著水平а=0.01下，炮制方法不同，对荨麻中总黄酮及多糖含量影响均极显著。为了具体了解各样品间的总黄酮及多糖含量差异是否显著，进一步作q多重检验，比较结果列于表5。
       3  讨论
          
       异株荨麻不同炮制品中总黄酮的含量分别按自然晾干荨麻、炒荨麻、105℃杀青晾干荨麻、220℃烘荨麻、焦荨麻、120℃烘荨麻、170℃烘荨麻次序依次减少。数据经统计分析后显示自然晾干荨麻的总黄酮含量除了与炒荨麻总黄酮含量的差异不显著外，和其他几种炮制方法的总黄酮含量均有显著差异；其他炮制方法的总黄酮含量差异不显著。这可能与黄酮类化合物在高温下不稳定，结构易发生变化或遭到破坏有关。
       
       异株荨麻不同炮制品中多糖的含量按炒荨麻、170℃烘荨麻、220℃烘荨麻、自然晾干荨麻、120℃烘荨麻、焦荨麻、105℃杀青晾干荨麻次序依次降低。数据经统计分析后显示，不同炮制方法的样品间多糖含量差异极显著，炒荨麻多糖含量最高，这可能是在此条件下异株荨麻茎叶中细胞壁破裂地最彻底，而多糖结构在此条件下又未遭到破坏，故多糖含量最高。105℃杀青晾干荨麻多糖含量最低，可能在晾干的过程中部分多糖转化为其他物质成分而造成的。
       【参考文献】
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