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       【关键词】  蜂胶；,,超临界二氧化碳萃取,；,,气相色谱
       摘要：目的分析蒙山蜂胶挥发油组分。方法采用超临界CO2萃取法从蒙山蜂胶中提取挥发油，气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行分析，并用归一化法确定百分含量。结果蒙山蜂胶挥发油共鉴定出44种化合物，占色谱总馏出峰面积的93.12%，含量最高的组分为亚油酸23.91%，其次为正二十六碳烷12.92%，再次为二十九碳烷7.44%，棕榈酸6.65%。相对含量较高的还有二十四烷5.23%，亚油酸甲4.58%，油酸3.94%，麦角固醇3.90%，二十一烷3.42%等。结论超临界CO2萃取法简单、便捷，样品用量少，提取效率高，达到满意实验效果。
       关键词：蜂胶；  超临界二氧化碳萃取 ；  气相色谱质谱 
       Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Essential Oil from Propolis of Mount Meng and Analysis by GC-MS
       LI Yajie, LING Jianya*, DENG Yong
       （School of Life Science, Shandong University, Jinan 250100,China; State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Jinan 250100,China; Kashi Normal College, Kashi, Xinjinag 844000, China）
       Abstract：ObjectiveTo analyse chemical constituents of essential oil from propolis of Mount Meng.Methods After supercritical fluid extraction, the volatile oil was separated by GC-MS and determined by normalization method. Results44 components from propoils by SFE were separated and identified, representing 93.12% of the total area. The main compounds of volatile oil were 9,12-Octadecadienoic acid 23.91%,Hexacosane 12.92%,Nonacosane 7.44%,Hexadecanoic acid 6.65%, Tetracosane 5.23%,Octadecadienoic acid, methyl ester 4.58%,9-Octadecenoic acid 3.94%, Ergostero 3.90%,Heneicosane 3.42% etc. Conclusion Supercritical extraction has not been widely used yet, there will be more and more viewpoints that could justify it, as simple and convenient, high purity, residual solvent content.
       Key words:Propolis;   Supercritical fluid extraction;   GC-MS
   
　　蜂胶（Propolis）作为一味动、植物双性的中药，其免疫调节、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、改善心血管系统的相关药用价值受到世人广泛的关注。蜂胶的产地不同,萃取方法不同，会造成化学成分的差异；同时，蜂胶原料本身重金属含量高、杂质含量高和有效物质特别是挥发油含量低的特点也阻碍了被称之为“紫色黄金”-蜂胶的进一步应用［1,2］。超临界流体萃取技术 (Supercritical Fluid Extration, SFE)是近年来迅速发展被人们所认知的一种新型“绿色分离”技术。本文应用超临界CO2萃取技术提取了蒙山蜂胶挥发性组分，利用气质联用技术对其化学成分进行鉴定，首次报道了蒙山蜂胶的挥发油组成。
       　　1  仪器与试药
       SPE-ed SFE型超临界萃取仪（美国Applied Separations公司）；GCMS-QP2010型色谱-质谱联用仪（日本岛津公司）；蜂胶购自山东沂源蒙山蜂场；高纯液体CO2（纯度＞99.99％，北京大兴气体厂）。
       　　2  方法
       2.1  蒙山蜂胶挥发油的提取将6.0 g蜂胶真空冷冻干燥后粉碎、过筛加入10 ml超临界CO2萃取池中，参数设置为压力20 Mpa；萃取池温度50℃，解析温度40℃；静态萃取10 min，动态萃取75 min；CO2流量1.0 L /min。得黄色透明油状物，有浓郁臭味。
       2.2  气相色谱-质谱分析条件 色谱柱：弹性石英毛细管柱DB-1（30 m×0.25 mm，0.25  μm）；色谱柱程序升温条件：柱温60℃（4 min）12℃・min-1 180℃（2 min）5℃・min-1  250℃（50 min）；载气 He，分流比1∶30；接口温度280℃；离子源温度200℃；电离电压70 eV；扫描质量范围30 ~ 400 AMU。
       　　3  结果与讨论　　
       蒙山蜂胶挥发油 GC-MS总离子流图见图1（峰号与表中序号同）。采用色谱数据处理系统，以峰面积归一化法测得挥发油各组分相对含量；对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得质谱图，经过质谱数据系统检索（质谱数据库NIST），人工谱图解析，并查对有关质谱资料［3~6］，从基峰相对丰度等几个方面进行直观比较，从而确定出蒙山蜂胶挥发油的化学成分，结果如表1。提取蒙山蜂胶挥发油共分离出50种化合物，鉴定了其中的44种。已鉴定化合物组分占总馏出组分的88%，占色谱总馏出峰面积的93.12%。在蒙山蜂胶挥发油已鉴定的组分中，含量最高的组分为亚油酸，相对含量23.91%，其次为正二十六碳烷12.92%，再次为二十九碳烷7.44%，棕榈酸6.65%。相对含量较高的还有二十四烷5.23%，亚油酸甲酯4.58%，油酸3.94%，麦角固醇（3.90%），二十一烷（3.42%）等。值得注意的是，蒙山蜂胶挥发性组分中还含有较多的具有抗氧化活性的萜类化合物：（α，β，γ）桉醇和愈创木醇，及抗过敏性、麻醉特性的有机酸、芳香酸和芳香酸酯。同时，尽管黄酮类组分在超临界流体CO2溶解度极低，本文仍检测到相当含量的二羟基-4-甲氧基查尔酮、高良姜黄素、二羟基-7-甲氧基黄酮。以上数据都提示我们，蒙山蜂胶富含活性组分，有着较好的科研开发价值。
       图1  蒙山蜂胶超临界限 CO2萃取物的总离子流图（略）
       表1  SFE法提取蒙山蜂胶挥发油化学成分分析结果（略）
       　　参考文献：
       ［1］  Stefano Castaldo , Francesco Capasso. Propolis, an old remedy used in modern medicine［J］. Fitoterapia 2002,73:1.
       ［2］  O.J. Catchpole., J.B. Grey, K.A. Mitchell, J.S. Lan. Supercritical antisolvent fractionation of propolis tincture［J］. J. of Supercritical Fluids 2004,29:97.
       ［3］  丛浦珠.质谱学在天然有机化学中的应用［M］.北京:科学出版社，1987:57.
       ［4］  Masada Y. Analysis of Essential oils by Gas Chromatography and Mass Spectrometry［M］. New York: John Wiley and sons. Inc, 1976：157.
       ［5］  中国质谱学会有机专业委员会.香料质谱图集［M］. 北京：科学出版社，1992：161.
       ［6］  Heller S R. EPA/NIH mass spectral data base ［M］. Washington, US: Government Printing office, 1978:2694.
       (山东大学生命学院，山东  济南  250100； 山东大学微生物技术国家重点实验室，山东 济南  250100； 新疆喀什师范学院 ，新疆 喀什  844000）