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       【摘要】 
       目的探讨富硒蛹虫草的降血脂和抗氧化作用。方法昆明种雄性小鼠60只，随机分4组(n=15只/组)：正常对照组、高脂模型组、普通蛹虫草组、富硒蛹虫草组。用不同的饲料持续喂养5周，每周的固定时间称量小鼠体质量1次，第5周断头取血后解剖小鼠，检测血清总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果富硒蛹虫草组与高脂模型组相比，T-CHO和TG的含量降低，HDL-C的含量升高，均达到了显著水平(P<0.05); LDL-C含量降低(P>0.05)；GSH-Px和SOD活性升高，MDA含量降低，均达到了显著水平(P<0.05)。并且富硒蛹虫草的降血脂与抗氧化作用均高于普通蛹虫草。结论富硒蛹虫草具有良好的降血脂和抗氧化作用。
       【关键词】  蛹虫草； 硒； 降血脂； 抗氧化
       The Effect of Selenium-enrich Cordyceps militaris on Hypolipidemic and Qnti-oxidant on Mice
       ZHONG Ming,GAO Dan,HU Kun,CHEN Lijing,ZHANG Li,LI Haoge,ZHANG Yue
       Biotechnological Center of Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161 ,China
       Abstract：ObjectiveTo discuss the hypolipidemic and anti-oxidant effect of Se-enrich C.militaris. MethodsSixty kunming male mice were randomly assigned to four groups (n=15 in each group): base control group, high lipid model group, ordinary C.militaris group, Se-enrich C.militaris group. With different feed continuous feeding for five weeks, the body weights of mice were weighed at fixed-time weekly. In the fifth week, the mice were decapitated after taking out the blood from mice. The total cholesterol(T-CHO), triglyeride(TG), high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C), low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) of serum and the glutathione peroxidase(GSH-Px), superoxide dismutase(SOD), malondialdehyde(MDA) of liver tissue were measured. ResultsCompared Se-enrich C.militaris group to high lipid model group, T-CHO and TG content decreased, HDL-C content increased to significant levels (P<0.05); LDL-C content decreased(P>0.05). GSH-Px and SOD activity increased, MDA content decreased to a significant level (P<0.05). And Se-enrich C.militaris of hypolipidemic and anti-oxidant were higher than ordinary C.militaris. ConclusionSe-enrich C.militaris has good hypolipidemic and anti-oxidant effect.
       Key words：Cordyceps militaris (Fr.) Link;   Selenium;   Hypolipidemic;   Anti-oxidant
        硒是目前已知的14种人体必需的微量元素之一，被科学家誉为“生命的火种”“抗癌之王”［1］。研究表明，人类心血管疾病、艾滋病、肿瘤、高血压病、糖尿病、肺部疾病等均与硒缺乏有关［2～6］。蛹虫草作为食药两用真菌，以其降压、降脂、抗疲劳、抗衰老等作用而备受人们的青睐［7］。蛹虫草对于某些微量元素特别是硒具有高度的富集作用，并把无机硒转化为有机硒，生物源有机硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特点优于无机硒，有利于人体摄入［8，9］。因而可以采用现代发酵工程手段，将无机硒在其菌丝中转化为有机硒，融蛹虫草和有机硒之长，将具有更高的药用价值和经济价值。本实验采用高脂膳食诱导小鼠高血脂症模型，富硒蛹虫草是蛹虫草在加硒深层培养中得到的，通过与普通蛹虫草对比，探索富硒蛹虫草对小鼠降血脂和抗氧化作用的影响，为富硒蛹虫草的进一步开发应用提供理论依据。
       1　材料
       1.1  菌种
       普通蛹虫草和富硒蛹虫草（硒添加量为6.4 mg/kg）由沈阳农业大学蛹虫草栽培基地提供。
       1.2 动物及处理
       选择体质量（20±2）g的昆明种雄性小鼠60只，随机分4组，每组15只。正常对照组：喂饲基础饲料；高脂模型组：喂饲高脂饲料：胆固醇1%，猪油5%，胆盐0.25%，基础饲料92.75%；普通蛹虫草组：应用胆固醇1%，猪油5%，胆盐0.25%，普通蛹虫草1%，基础饲料92.75%；富硒蛹虫草组：应用胆固醇1%，猪油5%，胆盐0.25%，富硒蛹虫草1%，基础饲料92.75%。小鼠及饲料均购自沈阳药科大学实验动物中心。各组小鼠自由饮食，动物房室温控制在21～24℃。
       2方法
       2.1 有效成分测定
       蛋白质含量测定采用Folin-酚试剂法（Lowry法），多糖含量测定采用苯酚-硫酸法［10］，硒含量测定采用DAN荧光法（GB/T12399），虫草酸含量测定采用分光光度法［11］，腺苷含量测定采用薄层紫外分光光度法［12］。
       2.2 小鼠体质量的测定  
       在每周的固定时间用电子天平测量并记录各组小鼠的体质量。
       2.3 样品的采集
       2.3.1 小鼠血清的制备
       用不同的饲料喂养5周后，断头取血，采血后立即放入装血样的试管中，放入37℃恒温箱中静置3 h，之后在4℃下1 500 r/min离心15 min，离心后血清分装贮存于4℃冰箱中待分析。
       2.3.2 小鼠肝组织匀浆的制备
       小鼠处死后，解剖取出肝组织在冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，用灭菌后的生理盐水做匀浆缓冲液以1∶9(W/V)经玻璃匀浆器在冰浴上进行研磨匀浆，制得肝匀浆液。4℃下3 000 r/min离心10 min，取上清液。贮存于4℃冰箱中待分析。
       2.4 血脂指标的测定
       总胆固醇(T-CHO)的测定：CHOD-PAP法［13］。甘油三酯(TG)的测定：GPO-PAP法［14］。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的测定：PVS沉淀法［15］。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定：PTA-Mg2+法［16］。
       2.5 抗氧化指标的测定
       谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的测定：二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）显色法［17］。超氧化物歧化酶(SOD)的测定：黄嘌呤氧化酶法［18］。丙二醛(MDA)的测定：硫代巴比妥酸(TCA)法［19］。
       2.6 统计学处理应用SPSS12.0软件ONE-WAY进行方差分析。
       3　结果
       3.1 有效成分含量测定
       结果见表1。由表1可见，硒在浓度为6.4 mg/kg时不会降低蛹虫草子实体中主要营养、活性成分的含量，相反促进蛹虫草的蛋白质、多糖、虫草酸的合成，进而提高了它们的含量。说明适量的硒能够提高蛹虫草本身的营养和药理保健价值。表1  蛹虫草有效成分含量（略）
       3.2  体质量变化
       结果见表2。由表2可见，在饲养5周期间，4组小鼠的体质量均表现逐渐增长趋势。其中高脂模型组小鼠在整个试验期间体质量高于普通虫草组和富硒虫草组。在前4周各组小鼠体质量比较没有显著性差异(P＞0.05)，到第5周时，高脂模型组小鼠的体质量要显著高于正常对照组(P＜0.05)，而其他各组间差异不显著(P＞0.05)。表2  各组小鼠每周的体质量记录（略）
        数值旁小写字母相同时，表示组间没有显著性差异(P＞0.05)；小写字母不同时，表示组间有显著性差异(P＜0.05)
       3.3   血脂变化
       结果见表3。表3  各组小鼠血脂水平（略）
       
        数值旁小写字母相同时，表示组间没有显著性差异(P＞0.05)；小写字母不同时，表示组间有显著性差异(P＜0.05)。数值旁大写字母相同时，表示组间没有极显著差异；大写字母不同时，表示组间有极显著差异(P＜0.01)
        由表3可见，经高脂饲养诱导后，小鼠血清的总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量极显著上升(P＜0.01)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)极显著下降(P＜0.01)，高脂模型组血T-CHO、TG、LDL-C水平显著高于正常对照组(P＜0.01)，说明高脂模型形成。饲喂添加普通蛹虫草饲料的小鼠，T-CHO、TG、LDL-C的含量低于高脂模型组，HDL-C的含量高于高脂模型组，差异均不显著(P＞0.05)。饲喂添加富硒蛹虫草饲料的小鼠，LDL-C的含量低于高脂模型组，差异不显著(P＞0.05)；T-CHO和TG含量低于高脂模型组，HDL-C的含量高于高脂模型组，均达到了显著水平(P＜0.05)。说明富硒蛹虫草与普通蛹虫草均能改善高血脂症小鼠的血脂代谢，且富硒蛹虫草降血脂效果更加明显。
       3.4  抗氧化指标水平变化
       结果见表4。由表4可见，经高脂饲料诱导后，小鼠肝组织的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力低于正常对照组(P＞0.05)，超氧化物歧化酶(SOD)活力显著低于正常对照组(P＜0.01)，脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量显著高于正常对照组(P＜0.01)，说明高脂模型形成。饲喂添加普通蛹虫草饲料的小鼠， GSH-Px活力高于高脂模型组，MDA含量低于高脂模型组，差异均不显著(P＞0.05)；SOD活力显著高于高脂模型组(P＜0.05)。饲喂添加富硒蛹虫草饲料的小鼠，GSH-Px活力和SOD活力显著高于高脂模型组，MDA含量显著低于高脂模型组，均达到(P＜0.05)。说明富硒蛹虫草与普通蛹虫草均能提高小鼠的抗氧化能力，且富硒蛹虫草抗氧化效果更加明显。表4  各组小鼠抗氧化指标水平（略）
        数值旁小写字母相同时，表示组间没有显著性差异(P＞0.05)；小写字母不同时，表示组间有显著性差异(P＜0.05)。数值旁大写字母相同时，表示组间没有极显著差异；大写字母不同时，表示组间有极显著差异(P＜0.01)
       4  讨论
        随着我国人民生活水平的提高，人口老龄化比例不断升高，高血脂、高血压病、冠心病等心脑血管疾病的发病率、患病率呈逐年上升趋势。根据世界卫生组织统计，全球每年有1700万人死于心脑血管疾病，在这些人里面，估计有440万人是死于胆固醇过高［20］。近年来，许多证据表明高脂血症和动脉粥样硬化所致的冠心病是膳食中脂肪含量过高而致。动物试验和临床研究都表明高血脂症与脂质过氧化之间存在密切关系［21］，动脉粥样硬化发生与机体血清中高胆固醇含量和脂质过氧化的损伤有关［22，23］。中国医学认为高脂血症多见于肝肾两虚和痰阻血瘀，尤其是肝脾失调可能是其发病的基础。西医学将高脂血症分为高胆固醇血症、高甘油三酯血症和混合型高脂血症［24，25］。高胆固醇血症和LDL-C升高是冠心病的危险因素，因此，降低血脂对于防止冠心病的发生有重要意义。本研究中，我们对富硒蛹虫草和普通蛹虫草的有效成分进行了含量测定，结果表明硒提高了有效成分的含量。说明一定含量范围内的硒在很大程度上能够提高蛹虫草的各部分生理机能, 进而增强其富硒能力［26］。通过建立小鼠高血脂症模型及对4组小鼠的血脂和抗氧化能力的观察，发现富硒蛹虫草可以有效降低高血脂症小鼠的血脂水平，改善血脂代谢，提高高血脂症小鼠体内的抗氧化水平，增强抗氧化酶活性，减少过氧化脂质含量。试验结果证明了富硒蛹虫草比普通蛹虫草具有更好的降血脂和抗氧化能力，对预防动脉粥样硬化具有积极作用，是一种比较理想的降血脂抗氧化特殊功效保健食品。
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