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       【摘要】 
       目的观察白背叶提取物A对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用四唑盐比色实验（MTT法），以半数抑制浓度（IC50）为评价抗肿瘤活性强度的指标，分别对4种常见的人恶性肿瘤细胞进行抗肿瘤活性的筛选。结果白背叶提取物A在浓度为5 μg/ml时对人胃癌细胞SGC-7901，人肺癌细胞A549有明显抑制作用（P<0.05或P<0.01），其IC50分别为27.14 μg/ml,33.08 μg/ml；在浓度为20 μg/ml 时对人结肠癌细胞LoVo有抑制作用（P<0.05），其IC50为36.82 μg/ml；在浓度为40 μg/ml 时对人肝癌细胞Bel-7404有抑制作用（P<0.05），其IC50为37.70μg/ml。结论白背叶提取物A对以上4种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。
       【关键词】  白背叶提取物A；抗肿瘤；四唑盐比色实验
       白背叶Mallotus apelta Muell-Arg.为双子叶植物药大戟科植物白楸的叶，又名白背娘、白背桐，为岭南地区民间常用草药。在我国分布较广，资源较丰富，可见于广东、广西、湖南、福建、浙江、安徽、河南等地。白背叶全年可采，鲜用或晒干。中国壮药原色图谱记载其味苦，性平，具清热、解毒、祛湿、止血之功效［1］。本实验对白背叶提取物A进行了抗肿瘤作用的筛选研究。现将结果报道如下。
       1   材料与仪器
       1.1  药物
       白背叶提取物A由广西大学化学教研室提取分离，为淡黄色单体成分。
       1.2  肿瘤细胞株
       本实验所用细胞株均购自南京凯基生物有限公司。
       1.3  试剂
       RPMI-1640干粉(美国Gibco公司产品)；新生牛血清(杭州四季青公司产品，批号 080508)；四甲基二氮唑蓝(北京拜尔迪生物公司分装，Amresco 0793)；二甲基亚砜(博大泰克公司产品)；0.25%胰蛋白酶(美国 Hyclone Lab公司产品)；注射用生理盐水(武汉滨湖双鹤药业有限公司产品，批号 080429)；顺铂(齐鲁制药有限公司，批号 701003CF)。
       1．4  仪器
       ELX-800型酶标仪(美国 BIOTEK公司产品)；311二氧化碳培养箱(美国ThermoForma公司产品)；DLF560型超净工作台(荷兰clear Air Techniek bv公司产品)；细胞培养瓶(加拿大 BIOFIL公司产品)；96孔板(加拿大 BIOFIL公司产品)；倒置显微镜(德国Leica)；微量移液器(法国 Pipetman公司产品)；十万分之一电子天平(德国赛多利斯产品)。
       1．5  培养液及试剂的配制
       RPMI-1640不完全培养液：不加血清的RPMI-1640培养液；RPMI-1640完全培养液：10%新生牛血清+RPMI-1640不完全培养液+双抗（青霉素+链霉素，浓度各为100 U/ml）。
       2 方法
       2．1  肿瘤细胞培养
       细胞用RPMI-1640完全培养液，在37℃，5%CO2培养箱培养，待细胞生长贴壁约80%时传代，每瓶传代为2或3瓶。取对数生长期细胞用于实验。
       2.2  MTT法测定［2，3］
       将肿瘤细胞(2×104/ml)接种到96孔板，每孔200 μl，设细胞对照组，阳性对照组（顺铂5 μg/ml），药物组，细胞于37℃，5%CO2培养24 h。弃上清液，加入各药物，白背叶提取物A设5个浓度，分别为5，10，20，40，80 μg/ml，每浓度3个复孔，继续培养48 h。每孔加入使用生理盐水新鲜配制的MTT（5 mg/ml)10 μl，继续培养4 h，弃上清，加入DMSO150 μl，振荡10 min，以酶标仪在490 nm处测各孔吸光度值(OD)，计算抑制率，用对数回归方程求出半数抑制浓度(IC50)，肿瘤细胞生长抑制率按下式计算。
       
       肿瘤细胞生长抑制率（%）=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%
       3 结果
        见表1～2，白背叶提取物A在浓度为5 μg/ml时对7901，A549即有明显抑制作用（P<0.05-0.01），其IC50分别为27.14，33.08 μg/ml；在浓度为20 μg/ml时对LoVo有抑制作用（P<0.05），其IC50为36.82    μg/ml；在浓度为40 μg/ml 时对7404有抑制作用（P<0.05），其IC50为37.70 μg/ml，抑制作用均随浓度增加而增强，说明白背叶提取物A在体外具有抗肿瘤作用。表1  白背叶提取物A对7901，A549细胞增殖的抑制作用（略）表2  白背叶提取物A对7404、LoVo细胞增殖的抑制作用（略）
       4 讨论
        癌症是一类常见病，多发病，是目前严重危害人类健康的疾病之一。随着社会人口老龄化的加剧，工业化进程的加快，环境的恶化，癌症的发病率逐年提高，发病人群年龄也趋于年轻化。目前的治疗手段毒副作用大，患者的生存质量差 ，因此寻找有效的抗癌药物是当务之急。天然中草药具有毒性低，来源广泛等优点 ，因此研究中草药的抗癌作用十分必要。利用现代科学技术筛选中草药的有效成分和揭示中草药的作用机制是实现中药现代化、科学化 、国际化的必然要求，也是抗肿瘤中草药开发领域的重要研究手段。
        MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法，原理是运用MTT显色剂被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲臜，而间接反映出活细胞数量。该方法具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速等特点；目前已经被广泛应用于大规模的抗癌药物筛选研究。本实验采用MTT法观察了白背叶的两种提取物A对SGC-7901，A549，Bel7404，LoVo肿瘤细胞的抑制作用。结果显示，提取物A对此4种人恶性肿瘤细胞株的生长均有抑制作用，且呈剂量依赖关系。本实验为进一步将白背叶开发成一个新的抗肿瘤药物提供了初步的依据，但其体内抗肿瘤及其机制仍有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］朱华,蔡毅.中国壮药原色图谱，第1版［M］.南宁:广西民族出版社，2003:144.
       
       ［2］徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学，第3版［M］.北京:人民卫生出社,2005：1785.
       
       ［3］司徒镇强,吴军正.细胞培养(修订版)［M］.西安:世界图书出版公司,2005:250.