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       【摘要】 
       目的通过测定不同产地一点红中总生物碱含量，建立一种以总生物碱含量变化为基础的一点红质量测定方法。方法利用单因素法考察最佳提取条件，采用紫外-可见分光光度法，以苦参碱为对照品，于414 nm波长处测定总生物碱含量。结果各产地样品的总生物碱含量在0.441%～0.756%之间，贵州贵阳的一点红总生物碱含量较高。结论用所建立的方法检测一点红药材质量，重复性好，准确度高。
       【关键词】  一点红； 总生物碱； 质量测定方法
       Extraction and Analysis of Total Alkaloids Contents in Emilia sonchifolia from Different Regions 
       ZHOU Wuping ，CHEN Xiaowei，WEI Yuanyuan , LI Junsheng
       Department of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Technology, Liuzhou, Guangxi, 545006, China
       Abstract：ObjectiveTo establish a total alkaloids-based method for determining the quality of the Emilia sonchifolia. MethodsThe optimum extracting condition was set up by single-factor method, and the total alkaloids were determined by UV-visible spectrophotometry under 414 nm using matrine as a control. ResultsThe total alkaloids contents in the samples from different regions were 0.441～0.756%. The results showed the total alkaloids content in the sample which collected from Guiyang of Guizhou province was the highest. Conclusion The method has good duplication and high exactitude for quality determination of Emilia sonchifolia.
       Key words：Emilia sonchifolia；  Total alkaloids；  Quality-determination method
        一点红Emilia sonehifolia DC．，又名羊蹄草、红背叶、叶下红、红背果等，菊科一点红属一年生或多年生草本，分布于我国华南、华中和西南等地。一点红性味凉，具清热解毒、活血散淤之功效，临床上常用于治疗上呼吸道感染、口腔溃疡、肺炎、乳腺炎、疖肿疮疡、皮肤湿疹等［1］，是广西花红药业股份有限公司生产的妇科临床常用药花红片的主要原料药［2］。一点红在印度喀拉拉邦是用于治疗炎症、蚊虫叮咬、结膜炎、风湿病及创伤等的一种植物药。已报道该植物地上部分含有吡咯双烷类生物碱和黄酮类化合物，并且发现一点红的抗氧化和抗炎作用［3～5］。一点红还含有植物甾醇、脂肪酸等化学成分。目前对于一点红总黄酮成分已有相关研究报道［5～9］。一点红总生物碱的研究还比较缺乏，对一点红的鉴定和质量检测也只通过经验和外观品质进行简单的验证，而其生物碱类物质也有抗炎抗菌药理功效［10］。为了加强原药材质量监控，以苦参碱为对照品，总生物碱为考察指标，通过测定6个产地一点红总生物碱含量，以期建立一种以总生物碱含量变化为基础的一点红质量测定方法。
       1  材料与仪器
        UV2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司)；AL104型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；B2200S2T型超声波发声仪(必能信上海有限公司)；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液制备精密称取苦参碱对照品4.2 mg ，加氯仿定容至100 ml，即得浓度为42 μg/ml苦参碱对照品储备液。
       2.2 显色剂的配制准确称取溴麝香草酚蓝62.5 mg，置500 ml量瓶中，加配置好的pH=7.6磷酸二氢钾缓冲溶液至刻度，摇匀即得。
       2.3 波长的选择分别取苦参碱对照品液、一点红总生物碱样品液适量，加入溴麝香草酚蓝显色剂10 ml，密塞，剧烈振摇2 min提取，静置2 h，分取氯仿层。以未加样液的氯仿显色层作为参比在400～800 nm范围内进行光谱扫描，结果苦参碱对照品液和一点红样品液均在414 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.4 线性考察精密吸取苦参碱对照品储备液0.0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，加氯仿至刻度，按照上述条件显色，以第1管未加苦参碱的氯仿层作空白对照，在414 nm处测吸光度。以苦参碱对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果苦参碱在0.002 1 ～0.029 4 mg/ml范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。得到回归方程为Y=20.086X+0.135 6，R2=0.9921(n＝8)。
       2.5  提取条件的选择
       2.5.1 不同提取方式的考察取同一批一点红药材粉末4份，每份约2 g，精密称定，加浓氨水10滴，精密加入氯仿60 ml，分别用索氏提取法、冷浸法、超声提取法、回流提取法提取，比较提取效果，结果超声提取法操作简单，提取率高，所用提取时间可相对较短。结果见表1。表1  不同提取方法的对比（略）
       2.5.2  提取时间的确定称取一点红药材粗粉3份，每份约0.5 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶，加入4滴浓氨水，精密加入氯仿50 ml。分别超声提取15，30，45，60 min ，冷却，补足失重，滤过，取续滤液1.00 ml用氯仿定容至10 ml，样液备用。取5.00 ml样液加入10 ml显色剂，密塞，振摇2 min，静置2 h，取氯仿层，以5 ml未加样的氯仿做空白参比，在414 nm处测吸光度值。结果见表2，超声提取30 min提取量较高。表2  不同超声提取时间的对比（略）
       2.6  精密度实验取苦参碱对照品溶液，按显色条件显色后，于414 nm处测其吸光度，连续测定，吸光度的RSD为0.125%(n=6)，结果显示仪器精密度良好。
       2.7  稳定性实验取供试品溶液显色后于0，1，2，3，4，5 h进行吸光度测定，供试品溶液吸光度的RSD为0.537%（n=6）。结果显示样品溶液显色后在5 h内测定稳定。
       2.8  重复性实验取同一批号一点红6份，精密称定，按照样品测定项下制备供试品液，进行测定,测得吸光度RSD为1.176%(n＝6)，结果说明方法重复性良好。
       2.9  加样回收率实验取同一批已知含量的一点红全草粗粉6份，分别精密加入苦参碱对照品液适量，混匀蒸干，按照样品测定项下操作，测定含量，结果平均加样回收率为99.0%，RSD＝1.49%(n＝6)。结果见表3。表3  加样回收率（略）
       2.10  样品测定取6个不同产地的一点红全草粗粉约0.8 g，置具塞锥形瓶中，加入浓氨水4滴，精密加入氯仿40 ml，超声提取30 min，冷却，补足失重，滤过，精密吸取续滤液1 ml用氯仿定容至10 ml备用。取5 ml样液至分液漏斗，加入溴麝香草酚蓝显色剂10 ml，密塞，剧烈振摇2 min提取，静置2 h，分取氯仿层，以未加样液的氯仿层为空白，在414 nm波长处测吸光度。结果一点红总生物碱含量在0.441%～0.756%，不同产地的一点红中总生物碱含量累积存在着一定差异，贵州贵阳的一点红总生物碱含量最高，广东两产地的次之，广西3个产地的一点红总生物碱含量相对较低。结果见表4。表4  不同产地样品测定（略）
       3 讨论
        根据查阅文献，未见有相关一点红总生物碱含量测定的报道，本实验利用生物碱显色后进行光谱扫描，寻找到苦参碱为合适的对照品，经显色后与总生物碱样品液在414 nm波长处均有较大吸收。故以苦参碱为总生物碱含量考察的对照品，414 nm为检测波长。
        实验采用超声提取技术，具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点，利用超声波产生的强烈振动、高加速度、空化效应、搅拌作用等，加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且避免回流提取中高温对提取成分的影响。实验曾试用乙醇、丙酮、醋酸乙酯、甲苯、氯仿作为提取溶剂，发现氯仿碱提法提取效果较合适较好。
        一点红资源丰富，是我国南方部分地区人们喜爱的野菜或清凉解暑的凉菜［11］，也是我国传统中药之一，具有广泛的开发和利用价值。实验以苦参碱为对照品，通过检测不同产地一点红生物碱含量，建立了适合一点红药草质量检测的方法，方法准确可靠，结果满意。从各产地采集的样品总生物碱含量来看，不同产地、不同的生长环境、温度、湿度等多种因素对总生物碱的含量影响很大。提示我们是否可以选择最适宜生长条件的地域建立药材的GAP生产基地，进行大规模规范化的栽培和生产，提高药材内在质量的稳定性，保证临床用药安全性和有效性。
       【参考文献】
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