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       【关键词】  四逆散
       摘要：目的：观察四逆散对NOS阳性神经元，NO、Ach神经递质的影响，从而探明四逆散促胃动力作用及作用机理。方法：采用NADPH黄递酶组化法染色显示大鼠胃窦部NOS阳性神经元，医学彩色图象分析仪图象定量分析；采用放射免疫法检测大鼠胃窦组织中NO，Ach含量。结果：四逆散组和阳性对照组大鼠胃窦黏膜肌内NOS阳性神经纤维及其末梢的面积及平均吸光度值较空白对照组明显降低，具有粉肠显著性差异（P＜0.01）。四逆散组及阳性对照组大鼠胃窦组织中NO含量明显减少，Ach含量增多，与空白对照组均有粉肠显著性差异（P＜0.01）。结论：四逆散可显著减少胃窦组织中NOS阳性神经元，降低NO含量并同时增加Ach的含量，从而促进胃肠运动，缓解胃肠动力障碍，治疗功能性消化不良。
       关键词：四逆散；  功能性消化不良；  神经元；  神经递质
       Experimental Study of Treating Nerve Fiber and Nerve Transmitter of Functional Dyspepsia with  SiNiSan Decoction
       NIU Lufang, QIU Mingyi, SHI Tuo, FU Bensheng
       (Beijing University of Chinese Medicine, 100029, China; 2.Hubei College of Traditional Chinese Medicine, 430061, China; 3.General Hospital of PLA, 100037, China)
       Abstract:Objective:To observe the infection of SiNiSan decoction to NOS nerve fiber and NO, Ach nerve transmitter of rat gastric antrum, prove SiniSan decoction could promotion the stomach and intestine motility, explore clear function mechanism of SiNiSan decoction.Methods:Adopt NADPH-diaphorase histochemistry dyeing display NOS nerve fiber of rat gastric antrum,medicine analysis apparatus quantitative analysis. Adopt radiation immunity method detect NO，Ach content of rat gastric antrum.Results:SiniSan decoction group and positve comparison group NOS posive nerve fiber area and average absorbance evident redLice compare with blank comparison group(P＜0.01)，SiNiSan decoction group and positive comparison group NO content evident reduce，Ach content evident increase compare with blank comparison group(P＜0.01).Conclusion:SiNiSan decoction could evidence reduce NOS nerve fiber，reduce NO content,increase Ach content,consequently stimulate stomach and instestine motility.
       Key words:SiNiSan decoction;  Functional Dyspepsia;  Nerve fiber;  Nerve transmitter
        功能性消化不良（Functional Dyspepsia, FD)是一种胃肠功能紊乱性疾病，FD的发病机制涉及胃肠动力障碍、内脏感知过度、胃肠激素、神经元，神经递质、精神心理因素、胃酸分泌、胃幽门螺杆菌(HP)感染等多种因素［1］，目前关于 FD的实验研究中，胃排空肠推进、胃条离体实验等胃肠运动方面的实验较多，神经元，神经递 质方面的实验研究则少见报道，而 NOS(Nitric Oxidesynthase NOS)神经元，NO(Nitric Oxide)和Ach(Acetylcholine) 等神经递质对胃肠运动有显著调节作用［2］。四逆散是《伤寒论》名方，有舒肝解郁，调和肝脾之效，现代药理研究证明，四逆散 具有促胃肠运动功能。为探明其机理，我们进行了四逆散对大鼠胃窦组织中 NOS阳性神经元分布面积及活性的影响实验，四逆散对大鼠胃窦组织中NO,Ach含量影响实验。现将实验结果报告如下。
       　　1  材料
       1.1  实验动物健康SD系大鼠，体重（200±20）g，雌雄各半，以上动物购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。
       1.2  实验药物
       1.2.1  四逆散柴胡6 g，枳实6 g，芍药9 g，炙甘草6 g。其中药物剂量按《伤寒论》方中药物的比例而拟定，生药购自湖北中医学院附属门诊部。湖北中医学院中药研究所协助煎煮，浓缩为200%药液(即每毫升含生药2 g)、灭菌分装，4℃保存。
       1.2.2  莫沙比利鲁南制药股份有限公司山东鲁南制药厂生产，批准文号：国药准字X19990317，批号：020606。
       1.3  主要试剂 βNADPH，Sigma公司； N-BT，武汉亚法生物技术有限公司；Triton X100，武汉亚法生物技术有限公司；Tris 缓冲液武汉亚法生物技术有限公司；一氧化氮试剂盒，南京建成生物工程研究所；乙酰胆碱酯酶测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。
       1.4  主要仪器与器材电热恒温水箱 HW2Ⅱ型，北京市医疗设备厂；医学彩色图象分析仪 HPIAS500型，同济医科大学千屏影像公司；冷冻离心机 GL20GⅡ型，上海安亭科学仪器厂；电子天平 MPl0001型，金坛市恒丰仪器厂；微量移液器  WKYⅢ型，上海荣泰生化工程有限公司；分光光度计 721A型，上海第三分析仪器厂。
       　2  方法与结果
       2.1  四逆散对大鼠胃窦组织中NOS阳性神经元分布面积及活性的影响实验。
       2.1.1  动物分组取30只大鼠，随机分为 3 组：四逆散组、阳性对照组及空白对照组，每组10只。
       2.1.2  给药方法四逆散组、阳性对照组和空白对照组分别灌胃给予四逆散药液、莫沙比利药液及生理盐水。3组动物给药量均为5.0 ml/kg体重，四逆散加水使药物浓度为0.486 g/ml，莫沙比利研末，加水配为0.27 g/L，空白对照组给予等体积的生理盐水。
       2.1.3  动物取材用药后第14天，在给药后60 min后，处死动物，在胃窦区(距幽门0.5 cm)取组织1mm3，用4%甲醛进行固定24 h(4℃)，再入25%(4℃)蔗糖过夜。
       2.1.4  检测方法将组织标本用AO恒冷箱连续冰冻切片，厚度20 um,NADPH黄递酶组化法染色显示NOS阳性神经元，荧光显微镜下观察，医学彩色图象分析仪图象定量分析。
       2.1.5  统计学处理各组数据均采用均数±标准差表示，用SPSS统计软件进行数据处理，单因素方差分析，均采用组间两两比较。
       2.1.6  实验结果见表1。表1  四逆散对大鼠胃窦组织中NOS阳性神经元分布面积及活性的影响实验(略)
       2.2  四逆散对大鼠胃窦组织中NO,Ach影响实验
       2.2.1  动物分组同2.1.1。
       2.2.2  给药方法同2.1.2。
       2.2.3  动物取材用药后第14天，在给药60 min后，处死动物，在胃窦区(距幽门0.5 cm)取组织400 mg，加4 ml生理盐水，匀浆，3 500 r/min离心15 min，取上清液于-20℃冰箱中保存待测。
       2.2.4  检测方法NO、Ach均按照相应试剂盒说明书提供的检测方法，进行检测。
       2.2.5  统计学处理数据统计方法同2.1.5。
       2.2.6  实验结果见表2。表2  四逆散对大鼠组织中NO，Ach的影响(略)
       2.2.7  大鼠胃组织NOS阳性神经元分布见图1～6。
       　　3  讨论
       FD是一种高发病率性疾病，其发病率高达20%～30%，占消化道门诊患者的20%～40%。国外研究1/3的人群患过此病，占门诊总数的20%［3］。由于FD的发病机理尚未完全阐明，因此尚无确切的病因治疗，主要根据病人的临床表现及可能的影响因素进行相应的治疗。目前在临床已使用一系列促胃肠动力药，如胃复安、吗叮啉、西沙比利等，虽有肯定的疗效，但同时也发现这些药物具有不同的副作用。
       FD属于祖国医学的“胃痛”“痞证”“纳呆”“嘈杂”“反胃”“胃缓”“呕吐”“呃逆”等证的范畴。其发病多由情志内伤，饮食伤胃，劳倦伤脾等多种因素导致肝失疏泄，脾胃气机升降失常，运化功能减弱所致，以肝郁气滞，脾运失职，胃失通降为其基本病机。四逆散为仲景名方，原载于《伤寒论》，具有疏肝解郁，调达肝脾的功效。许多临床研究业已证实四逆散对于FD具有显著疗效［4］，但其具体作用机制尚未完全探明。因此我们以现代科学技术为媒介，从四逆散对大鼠胃窦组织中NOS神经元分布面积及活性影响，对大鼠胃窦组织中NO，Ach神经递质含量的影响，系统研究四逆散促胃动力作用及作用机理以期开发出行之有效的促胃肠动力中药。
       实验结果显示，在荧光显微镜下初步观测，四逆散组大鼠胃窦黏膜肌内NOS阳性神经纤维减少、变细，染色减弱，在黏膜下层很少看到阳性神经元胞体及从内突起，阳性对照组阳性产物与四逆散组类似。但空白对照组胃窦部黏膜肌内NOS阳性神经元较四逆散组和阳性对照组明显增粗、增多，染色增强。从表1中我们可以看到，四逆散组和阳性对照组胃窦黏膜肌内NOS阳性神经纤维及其末梢的面积较空白对照组明显减少，而其平均吸光度值较空白对照组也明显降低，具有非常显著性差异(P＜0.01)。从表2中我们可以看到，四逆散组及阳性对照组大鼠胃窦组织中NO含量明显减少，Ach含量增多，与空白对照组均有非常显著性差异(P＜0.01)。由此我们分析，四逆散促胃排空的功能，与其增加胃组织中兴奋性神经递质Ach的含量，同时降低胃组织中抑制性神经递质NO含量相关。NO的含量降低与四逆散减少大鼠胃窦壁内NOS阳性神经元成分，降低其活性相关。而四逆散使胃组织中Ach含量增加是否与其增强了乙酰胆碱酯酶阳性神经元活性相关，尚需进一步研究。
       　参考文献：
       ［1］林江，萧树东.功能性消化不良的发病机理研究进展［J］.胃肠病学，1997，2（1）：5053.
       ［2］余跃，候晓华，茹立强，等.非溃疡性消化不良患者胃窦壁内NO能、VIP能神经与胃排空关系的研究［J］.中华消化杂志，1988，18（5）：291294
       ［3］柯美云.功能性消化不良的研究动向［J］.新消化病杂志，1996，4（11）：601601.
       ［4］赵志刚.四逆散治疗功能性消化不良80例［J］.浙江中医杂志，1998，33（11）：514514.
       作者简介：牛路芳(1974)，女(汉族)，山西人，现为北京中医药大学2003级在读博士，主要从事经方治疗疑难病研究工作.
       (1.北京中医药大学2003级博士，北京  100029；  2.湖北中医学院，湖北 武汉  430061；
3.中国人民解放军海军总医院  100037)
       收稿日期：20050204