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       【摘要】 
       目的研究敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用的影响。方法用氢化可的松给小鼠皮下注射，造成肾阳虚动物模型，观察敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠体重、负重游泳时间、常压耐缺氧能力、负重游泳后肝糖原和血清乳酸含量的影响。结果与模型组比较，敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重，显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间，提高负重游泳后肝糖原含量，降低运动后血清乳酸含量。结论与模型组比较，敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重，显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间，提高负重游泳后肝糖原含量，降低运动后血清乳酸含量。
       【关键词】  肾阳虚证；抗应激；敦煌大宝胶囊
       Study on the Anti-stress Effect of DHDB on the Mice with Kidney-Yang Deficiency
       LIANG Yujie, DUAN Yongqiang,CHENG Yingxia, ZHU Liming,CHENG Rong,ZHANG Liqing
       1.Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou,730000，China； 2.The People"s Hospital of Qilihe District, Lanzhou,730050，China
       Abstract：ObjectiveTo observe anti-stress effect of DHDB on the mice with kidney-yang asthenia. MethodsThe model mice with deficiency of kidney-yang was induced by subcutaneously injecting hydrocortisone. The effects of DHDB on these targets, referring to the changes of body weight, the loaded swimming time, survival time under anoxia,level of glycogen and lactic acid,were observed.ResultsCompared with model group,DHDB could increase the body weight, prolong the loaded swimming time, survival time under anoxia and level of glycogen (P<0.05,P<0.05), also decrease the content of lactic acid obviously (P<0.05,P<0.05). Conclusion DHDB can improve anti-stress effect on the mice with kidney-yang asthenia.
       Key words：Syndrome of Kidney-Yang Deficiency;   Anti-stress;   Dunhuang Dabao Capsule (DHDB)
       
       敦煌大宝胶囊（Dunhuang Dabao Capsule，DHDB）由熟地、黄芪、当归、茯苓、大黄等组成，具有强肾填精、健脾益气、涤痰祛瘀、安和五脏之功效。该制剂经临床应用显示能够有效防治各种虚劳病症。为进一步探讨该药的药理作用及机制，本研究通过小鼠负重游泳实验以及测定小鼠运动后肝糖原和血乳酸水平的变化，探讨DHDB的抗应激作用。
       1  材料与仪器
       1.1 动物
       采用SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量（20±1）g，由甘肃中医学院医学实验中心提供［SPF级动物合格证号：SCXK（甘）2004-0006-0000201；SPF级实验设施合格证：SYXK（甘）2004-006-000092］。
       1.2 药品试剂
       敦煌大宝胶囊（DHDB，院内制剂，批号：040925）；桂附地黄丸（阳性对照组，兰州佛慈制药厂生产，批号：20040925）。乳酸（LA）测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20050123）；肝糖原测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20050123）。
       1.3 仪器
       游泳箱（36 cm×25 cm×30 cm）；快速混匀器（规格型号：XK96-A）；数显恒温水浴锅（规格型号：HH-4，郑州杜甫仪器厂）；离心机（规格型号：D-37520 ，德国）；数显电子分析天平（规格型号：FA2004N）。
       2 方法
       2.1  动物分组给药及模型的建立
       受试动物按体重编号，用随机数字表法［1］分为空白对照组，模型组，DHDB大剂量组，DHDB中剂量组，DHDB小剂量组，桂附地黄丸组（阳性对照组），每组8只，雌雄各半分笼饲养。
        肾阳虚模型的复制［2］：采用氢化可的松（HC）以25mg/kg（即0.05ml/10g）肌注，1次/d，连续7 d。
       
       空白对照组、肾阳虚模型组给予同体积蒸馏水灌胃；DHDB大、中、小剂量组分别予0.8，0.4和0.16 g/（kg·d）（相当于成人剂量的10倍、5倍和2倍）DHDB药剂灌胃，等效剂量按人与动物体型系数折算［3］；给予阳性对照组Ⅰ0.4 g/（kg·d）桂附地黄丸药剂灌胃（相当于成人剂量的5倍）。各组均以蒸馏水、标准饲料喂养。连续灌胃14 d。
       2.2  指标检测及方法
       2.2.1  DHDB对肾阳虚证小鼠一般生存情况的影响
       常规观察小鼠的外观、行为、活动、精神活动、食欲、大小便及其颜色、皮毛、呼吸、鼻眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡情况。
       2.2.2  DHDB对肾阳虚证小鼠负重游泳时间的影响
       ［4］昆明种小鼠48只，随机分为6组，即空白对照组，模型组，桂附地黄丸组（阳性对照组），DHDB大、中、小剂量组，每组8只。模型复建成功后其灌胃剂量同“2.1”项，1次/d，连续14 d。于末次给药后30 min，在小鼠尾部束一相当于体质量10%的重物，并放入游泳箱（36 cm×25 cm×30 cm，水温26℃）内游泳，立即开始计时。当发现小鼠头部沉入水中10 s不能浮出水面时结束计时，此为小鼠游泳时间。
       2.2.3   DHDB对肾阳虚证小鼠耐常压缺氧时间的影响
       ［5］昆明种小鼠48只，随机分为6组，即空白对照组，模型组，桂附地黄丸组（阳性对照组），DHDB大、中、小剂量组，每组8只。模型复建成功后其灌胃剂量同“2.1”项，1次/d，连续14 d，于末次给药后30 min将小鼠放入盛有15 g钠石灰的250 ml广口瓶内，用凡士林涂瓶口盖严，使之不漏气，立即计时，观察小鼠死亡的时间。
       2.2.4  DHDB对肾阳虚证小鼠负重游泳后肝糖原和血清乳酸的影响
       昆明种小鼠48只，随机分为6组，即空白对照组，模型组，桂附地黄丸组（阳性对照组），DHDB大、中、小剂量组，每组8只。模型复建成功后其灌胃剂量同“2.1”项，1次/d，连续14 d。于末次给药后30min，在小鼠尾部束一相当于体质量10%的重物，并放入游泳箱（36 cm×25 cm×30 cm，水温26℃）内游泳10 min后取出。立即摘眼球采血，离心取血清测定血清乳酸；并精确称取肝脏200 mg，经匀浆，离心后测定肝糖原。
       2.3  统计学方法
       采用SPSS13.0统计软件处理，组间计量资料比较采用单因素方差分析。
       3  结果
       3.1  DHDB对肾阳虚小鼠一般生存情况的影响
       结果见表1。空白对照组反应灵敏，活动及饮食正常，体毛浓密柔顺而有光泽，体重渐增。模型组注射后3 d即表现反应迟钝，7 d后出现少食、怠动、畏寒、体毛稀疏干枯、蜷缩拱背等阳虚表现，体重增长缓慢；DHDB组和阳性对照组一般表现相似，动物出现上述阳虚症状较迟、较轻，体毛基本正常，无蜷缩拱背表现。表1  DHDB对肾阳虚小鼠体重的影响（略）
       3.2  DHDB对肾阳虚小鼠负重游泳时间和耐缺氧存活时间的影响
       结果见表2。实验结果表明，与空白对照组比较，模型组小鼠负重游泳时间和耐常压缺氧时间缩短，对比组之间的差异具有统计学意义（P﹤0.05）；与模型组比较，DHDB各组小鼠负重游泳时间、耐常压缺氧时间计数水平显著提高，且以DHDB大剂量组作用为优，对比组之间的差异具有统计学意义（P﹤0.05）。表2  DHDB对肾阳虚小鼠负重游泳时间影响的结果比较（略）
       3.3  DHDB对肾阳虚小鼠负重游泳后肝糖原和血清乳酸的影响
       结果见表3。实验结果表明，与空白对照组比较，模型组小鼠负重游泳后肝糖原降低，血清乳酸计数水平有升高趋势，对比组之间的差异具有统计学意义（P﹤0.05）；与模型组比较，DHDB各组小鼠负重游泳后肝糖原升高，血清乳酸计数水平有降低趋势，对比组之间的差异具有统计学意义（P﹤0.05）。表3  DHDB对肾阳虚小鼠负重游泳后肝糖原的影响（略）
       4 讨论
        疲劳（Fatigue）是机体复杂的生理生化变化过程，是机体生理过程不能将其机能持续在一特定水平或器官不能维持其预定的运动强度。由于运动引起机体生理生化改变而导致机体运动能力暂时降低的现象，称为运动性疲劳。疲劳最主要的表现是运动耐力的下降，运动耐力是反映机体疲劳最直接、最客观的指标［6］。而运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最直接的表现，耐常压缺氧时间、游泳时间的长短可以反应动物运动疲劳的程度。
        糖原是由许多葡萄糖组成的多糖，它是机体细胞储存糖的主要形式。它可调节血糖浓度，当血糖高时，可在肝脏合成肝糖元；血糖低时，肝糖元则分解成葡萄糖以补充血糖，因此肝糖元对维持血糖的相对恒定十分重要。而且糖原又是运动时能量的重要来源，糖原的储存量可直接影响机体的运动能力，提高糖原储备量，有助于提高耐力和运动能力，进而抵抗疲劳的产生［7］。为此提高糖原的储备量有助于增强耐力及运动能力，有利于抵抗疲劳的产生。
       
       血乳酸水平可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度［8］。机体在一定负荷下运动，肌细胞对能量的需求量增加，能量代谢处在高度缺氧状态，此时主要依靠无氧糖酵解供给能量，所以血乳酸值显著增加，血乳酸堆积是导致肌肉疲劳的重要原因。运动停止后，因糖酵解过程停止和乳酸不断清除，血乳酸逐渐降低，疲劳得以恢复。因此，减少乳酸的产生和加快乳酸的清除，都可延缓疲劳的发生或加速疲劳的消除。
       
       在运动过程中血乳酸含量随着机体运动的进行而升高，血乳酸的含量说明了在无氧条件下体内糖酵解即能量的消耗的程度，血乳酸的积累会引起机体疲劳可反映机体疲劳程度，所以血乳酸含量是评价抗疲劳的常用生化指标。根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中抗疲劳实验结果判定规则：“若1项以上（含1项）运动实验（负重游泳实验或爬杆实验）和2项以上（含2项）生化指标（血乳酸、血清尿素氮、肝糖元/肌糖元）结果阳性，即可判定该受试样品具有抗疲劳的作用。”本研究结果表明，DHDB能显著延长小鼠负重游泳时间和耐常压缺氧存活时间（P ﹤0.05）；能明显升高肝糖原升高、降低小鼠运动后的血清乳酸的含量，差异具有统计学意义（P ﹤0.05），说明DHDB能够通过增加肝糖原的储备量，为机体提供更多的能量；能提高机体有氧运动能力，从而提高机体抗应激能力。
       【参考文献】
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       ［8］龚晨睿，李宇红，马 良.红景天复合制剂对小鼠运动代谢指标的影响［J］.湖北预防医学杂志， 2002， 13（6）: 5.