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       【摘要】 
       目的运用高效液相色谱法测定复方当归注射液中的羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量。方法色谱柱为依利特Hypersic ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm），测定阿魏酸的流动相为甲醇-0.4%醋酸水（30∶70），其检测波长322 nm；测定羟基红花黄色素A所用流动相为甲醇-0.6%醋酸水（15∶85），其检测波长403 nm。柱温25℃，流速1 ml/min。结果阿魏酸在4.44～ 266.4 μg/ml之间与峰面积呈线性关系;羟基红花黄色素A在4.508～ 360.64 μg/ml之间与峰面积呈线性关系;测得阿魏酸平均回收率为104.34%，RSD为2.77%；羟基红花黄色素A平均回收率为99.26%，RSD为2.20%。结论该方法简便快捷，重复性好，可用于复方当归注射液中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量测定。
       【关键词】  复方当归注射液； 羟基红花黄色素A； 阿魏酸； 高效液相色谱法
       Determination of Compound Angelica Injection
       PENG Hong, FU Jianwu, YU Riyue
       Department of Pharmacology, Jiangxi University of TCM, Nanchang 330004, China
       Abstract：ObjectiveTo make the determination of compound angelica injection in the quality standard more perfectly.MethodsUsing HPLC with Hypersic ODS2 Column，the mobile phase of ferulic was composed of a mixture of methanol-water with acetic acid ，which the concentration was 0.4%，and the oxhydryl -safflower yellow Element A was composed of a mixture of methanol-water with acetic acid ，which the concentration was 0.6%.The flow rate was 1ml/min，the UV detection wavelength was set at 322nm and 403nm，and the tempetature was at 25℃.ResultsFerulic and the oxhydryl-safflower yellow Element A showed linear relationship with peak areas in the range of 4.44～266.4   μg/ml and 4.508～360.64 μg/ml respectively.The average recovery were 104.34% and 99.26% and the RSD were 2.77% and 2.20% respectively.ConclusionThe method is simple，convinent and repeatable，and can be applied to the qualification control of theoxhydryl-safflower yellow Element A and Ferulic.
       Key words： Compound angelica injection；  Oxhydryl-safflower yellow Element A；  Ferulic
       
       复方当归注射液系以当归、川芎、红花3味中药为原料。临床上主要用于治疗痛经、经闭、跌扑损伤等。《中国药典》2005版规定采用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，本文通过高效液相法不仅对《中国药典》规定成分阿魏酸进行了含量测定，同时还对红花当中的羟基红花黄色素A也进行了定量研究和方法学考察，便于更全面地控制复方当归注射液的质量。现报道如下。
       1  仪器与材料
        Agilent1200色谱系统(DAD检测器)，阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611），羟基红花黄色素A(中国药品生物制品检定所，批号：111637－200503)，复方当归注射液（桔都制药厂），甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
       2  方法与结果［1～3］
       2.1  色谱条件的选择
       2.1.1  流动相的选择分别考察了甲醇-水、乙腈-水和甲醇-醋酸水几种系统，发现阿魏酸和羟基红花黄色素A未加酸梯度洗脱时，分离效果都不理想，峰形拖尾严重，无法达到基线分离；使用甲醇-醋酸水体系梯度洗脱，可使各色谱峰达到较好的分离，峰形较好。
       2.1.2  检测波长的选择结合相关文献及DAD图谱，选择322 nm为阿魏酸，403 nm为羟基红花黄色素A的检测波长。
       2.1.3  色谱条件的确定 阿魏酸选定的色谱条件：色谱柱为依利特Hypersic ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.4%醋酸水（30∶70），检测波长322 nm，柱温25℃，流速1 ml/min，进样量10 μl。
        羟基红花黄色素A选定的色谱条件：色谱柱为依利特Hypersic ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.6%醋酸水（15∶85），检测波长403 nm，柱温25℃，流速1 ml/min，进样量10 μl。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液的配制 称取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含栀子苷44 μg的溶液，得阿魏酸对照品溶液，同样条件下制成每毫升含羟基红花黄色素A 45 μg的溶液，得羟基红花黄色素A对照品溶液。
       2.2.2  供试品溶液的制备取复方当归注射液，过0.45 μm微孔滤膜后，即得。
       2.3  方法学考察
       2.3.1  线性关系分别精密吸取上述对照品储备液适量，加甲醇适量，配制成不同浓度的对照品溶液。阿魏酸：0.004 44，0.022 2，0.044 4 ，0.088 8，0.177 76 ，0.266 4 mg/ml，羟基红花黄色素A：0.004 508，0.022 54，0.090 16，0.180 32，0.027 048，0.360 64 mg/ml。结果表明，阿魏酸在4.44～ 266.4 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：A=54 715C+17.739，r2=0.999 9；羟基红花黄色素A在4.508～ 360.64 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：A=21 500C+64.812，r=0.999 9。
       2.3.2  精密度实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，重复进样6次，记录峰面积，分别计算阿魏酸和羟基红花黄色素A的RSD为0.46%和0.12%。结果表明仪器精密度良好。
       2.3.3  重复性实验取复方当归注射液10倍浓缩液，按照供试品溶液制备的方法平行制备6份，精密吸取10 μl注入色谱仪，记录峰面积，分别计算阿魏酸和羟基红花黄色素A的RSD为0.62%和0.35%。结果表明方法重复性良好。
       2.3.4  稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于0，1，2，6，12，24 h注入色谱仪，记录峰面积，分别计算阿魏酸和羟基红花黄色素A的RSD为0.51%和0.22%。表明供试品溶液在24 h内稳定。
       2.3.5  回收率实验
        阿魏酸加样回收：准确量取已知浓度的复方当归注射液9份，分别加入高、中、低3个浓度的阿魏酸对照品溶液，每个3份，按含量测定项下方法测定阿魏酸含量，测得平均回收率为104.34%，RSD为2.77%。
        羟基红花黄色素A加样回收：同上法测得羟A平均回收率为99.26%，RSD为2.20 %。
       2.4  样品含量测定按照供试品溶液制备的方法制备复方当归注射液供试品溶液，对样品中阿魏酸和羟基红花黄色素A进行含量测定。结果见表1～2，阿魏酸对照品和羟基红花黄色素A对照见图1，图3，样品图谱见图2，图4。表1  阿魏酸含量测定（略）
       3  讨论
        通过对色谱条件多方面的摸索，本实验建立了复方当归注射液质量标准的HPLC含量测定的方法，并对该方法进行了方法学考察，确定了HPLC色谱条件。该方法在药典的基础上，改进了阿魏酸含量测定方法，使之更简便。由于注射液工艺差异，当归川芎与红花分别操作，因部颁标准中仅通过薄层扫描控制阿魏酸含量不够严谨，因此确立了对阿魏酸和羟基红花黄色素A进行HPLC控制的复方当归注射液的含量检测方法。该方法简单易行，分析时间短，并有良好的重现性，应用此条件也可对当归和红花原药材进行含量测定项质量控制。
        试验初期欲摸索同一条件同时测定阿魏酸和羟基红花黄色素A，结果发现在短时间内，样品中二者分离度都难以达到要求，考虑到含量测定方法应快速简单易行，最后采用分别测量。
       【参考文献】
         　［1］黄罗，郭健新，刘咏梅，等.HPLC测定阿魏酸含量的探讨［J］.中成药，2004.26(2):134.
       
       ［2］王民合，徐玉水，符光华，等. 高效液相色谱法测定复方当归注射液中阿魏酸含量［J］.山东医药工业，2003，22(4)：19.
       
       ［3］陆仙芸，林德君，徐升亮. HPLC法测定注射用红花色素中羟基红花黄色素A［J］.中草药，2006，37(5):704.