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       【摘要】 
       目的从瓜蒌皮中提取多糖，并测定其含量。方法水提醇沉法提取瓜蒌多糖。以葡萄糖为对照品，硫酸-苯酚法进行含量测定。结果标准曲线回归方程为A=6.807 1 C+0.022 7，r=0.999 1，瓜蒌皮中多糖含量为5.43%，平均回收率99.11%。结论瓜蒌皮中多糖含量较高，该方法简便可靠，精密度好。
       【关键词】  瓜蒌皮； 多糖； 提取； 含量测定
       Extraction and Content Determination of Polysaccharides of Pericarpium trichosanthis
       TU Jiehong, HUANG Jia
       (Medical College of Jiaxing University, Zhejiang Jiaxing 314001)
       Abstract：ObjectiveTo extract and determine the content of polysaccharides in Pericarpium trichosanthis.MethodsPolysaccharides of Pericarpium Trichosanthis were obtained by hot water extraction and alcohol sedimentation. Phenol-vitriolic colorimetry was used to determine the content.ResultsThe standard curve was A=6.807 1C+0.022 7,r=0.9991.The polysaccharide content in Pericarpium trichosanthis was 5.43%, recovery rate was 99.11%.ConclusionThe polysaccharides content is high in Pericarpium Trichosanthis,and the method is precise,easy and reliable.
       Key words：Pericarpium trichosanthis;  Polysaccharide;  Extraction;  Content determination
       
       瓜蒌是我国传统中医用药之一。据《本草纲目》记载，其有润肺、化痰、散结、滑肠作用。现代医学研究表明，瓜蒌提取物有扩张冠状动脉、增加血流量、提高耐缺氧能力、降低血清胆固醇、抗菌、抗癌等多种作用［1］。关于瓜蒌所含挥发油、氨基酸、微量元素、甾醇类和三萜类、油脂等成分的研究已有一些报道，而瓜蒌的多糖成分一直少有研究。本实验对瓜蒌皮中水溶性多糖的提取纯化方法进行了研究，并用硫酸-苯酚法测定了多糖的含量。
       1  仪器与试药
       
       紫外分光光度计（岛津UV-2401，日本岛津公司），离心机（LD-2A型，北京医用离心机厂），旋转蒸发仪（ZFQ-85A，上海医疗器械厂），真空干燥箱（DZF-1B，上海跃进医疗器械厂）。瓜蒌皮购于浙江平湖药材公司，试剂均为国产分析纯。
       
       6%苯酚溶液的制备：取苯酚100 g，加0.1 g铝和0.05 g NaHCO3，在180～182℃蒸馏，空气冷凝，得白色针状结晶。取重蒸馏后的苯酚15 g，精密称定，置250 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，避光冷藏。
       2  方法与结果
       2.1  瓜蒌多糖的提取与精制瓜蒌皮粉碎，过20目筛，取200 g，用95%乙醇浸泡2 d脱脂，药渣加水3 000 ml，煮沸4 h，放置，8层沙布压滤，残渣重复煮沸提取4 h，过滤，合并滤液，离心分离，取上清液，60℃减压浓缩至原来体积的1/4，浓缩液加4倍量的乙醇，冰箱放置24 h，吸出多糖粗品。用Sevag法，氯仿∶正丁醇（4∶1）脱蛋白，以3 000 r/min离心20 min，除去蛋白质胶状沉淀，重复操作4 次，直至紫外测定在260，280 nm无蛋白质和核酸的吸收峰。上清液对蒸馏水透析48 h，除去氯仿和正丁醇。浓缩透析液至100 ml，加95%乙醇320 ml醇析多糖，静置24 h，过滤，沉淀物60℃减压干燥，得浅黄色瓜蒌多糖(1.859 5 g)。
       2.2  标准曲线的绘制
       2.2.1  葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，置500 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。
       2.2.2  标准曲线的制备［2］精密吸取上述葡萄糖标准溶液1，2，3，4，5，6，7， 8 ml，分别置10 ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1ml，加6%苯酚水溶液1.0 ml，浓硫酸6 ml，静止10 min，旋涡混合5 min，室温放置20 min，于波长490 nm处测定吸收度，以1 ml蒸馏水按同样显色操作为空白，以多糖毫克数为横坐标，吸收度值为纵坐标，求得标准曲线的回归方程为：A=6.807 1C+0.022 7,r=0.999 1。见图1。
       图1  多糖含量测定标准曲线（略） 
       2.3  换算因子的测定精密称取60℃干燥至恒重的瓜蒌多糖13.7 mg，置100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 ml，按测定标准曲线同样的方法测得吸收度A为0.487，从回归方程中求出多糖供试品中葡萄糖含量为0.068 2 mg，按下式计算换算因子f，测得f=2.01　f=W/(C×D)
       
       式中W为多糖的质量(mg)；C为多糖稀释液中葡萄糖浓度(mg/ml)；D为多糖的稀释倍数。
       2.4  供试溶液的制备和测定精密称取瓜蒌皮粗粉1.043 4 g，加水20 ml，沸水浴中提取两次，4 h/次，并随时搅拌补水。离心，合并上清液，加入95%乙醇40 ml沉淀两次，离心。将沉淀加水溶解并定容到100 ml容量瓶中,摇匀。精密吸取供试品溶液0.2 ml，加水至1 ml，按标准曲线项下测定吸收度值，按下试计算多糖含量：
       多糖含量（%）=CDf/W×100%
       
       式中：C为样品溶液的中葡萄糖含量(mg)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素，W为样品的重量(mg)，测得平均结果为5.43%，RSD=1.02%(n=3)。
       2.5  稳定性实验精密吸取供试溶液0.2 ml，加水至1 ml，按标准曲线项下操作。分别放置30，60，90，120，150，180，210 min，测得的吸收度值在3.5 h内无变化，RSD(%)=1.08(n=6)。
       2.6  精密度测定精密吸取供试溶液0.2 ml，共称6份，加水至1 ml，分别按标准曲线项下操作。
       2.7  加样回收率实验精密吸取已知含量的瓜蒌多糖溶液0.1 ml，共称6份，分别精密加入葡萄糖标准溶液一定量，按标准曲线项下操作，计算多糖含量，加样回收率平均为99.11%，RSD=1.67%(n=6)。结果见表1。
       表1  回收率实验结果（略） 
       3  结论
       
       通过水提、脱蛋白、透析、醇沉方法从瓜蒌皮中获得不含蛋白质、核酸的中性纯粹瓜蒌多糖，得率为0.929 8%。
       
       瓜蒌皮中多糖含量为5.43%，经UV扫描最大吸收波长为487nm，苯酚-硫酸法测定瓜蒌中多糖含量时，硫酸在总体积中所占比例是否合适是确保此方法可行性的重要环节，经对比实验硫酸体积和总体积比以2∶2.6为宜。
       
       此方法简便可靠，不需要特殊的设备和试剂，稳定性良好，从分析结果看出，在上述条件下测定瓜蒌中多糖的含量，显色反应在3.5h内基本稳定，并有较好的精密度（RSD=0.79%）和回收率（99.11%，RSD=1.67%）。
       【参考文献】
         　　［1］ 阴 健，郭力弓.中药现代研究与临床应用(1)，第1版［M］.北京：学苑出版社，1993:260.
       
       ［2］ 张惟杰.糖复合物生化研究技术，第2版［M］.杭州：浙江大学出版社，2003:12.