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       【摘要】 
       目的观察降脂宁肝胶囊对D-氨基半乳糖(D-Gal)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将60只NIH小鼠随机分为6组：模型组，正常对照组，联苯双酯阳性对照组，降脂宁肝胶囊高、中、低剂量组。用药组小鼠分别灌胃给药, 而正常对照组和模型组灌服等体积生理盐水20 ml/(kg·d），连续6 d。于末次药1 h后，除正常对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射10％D-Gal生理盐水溶液(1 000 mg/kg)，24 h后采血和取肝组织，检测血清ALT、AST及肝脏MDA水平，并观察其肝组织病理变化。结果降脂宁肝胶囊高、中剂量组与模型组比较，均能显著降低血清ALT、AST及肝脏MDA水平（P<0.05，P<0.01或P<0.001），明显地改善肝脏的病理变化,并呈明显的剂量-效应关系。结论降脂宁肝胶囊对急性肝损伤模型小鼠有显著的护肝作用。
       【关键词】  降脂宁肝胶囊； D-氨基半乳糖； 急性肝损伤； 小鼠
       Protective Effect of Jiangzhi Ninggan Capsule on Acute Hepatic Injury Induced by D-Galactosamine in Mice
       XUE Chuansong，YANG Qinhe*，LIU Shujuan，YANG Huanwen, ZHANG Yupei,  XIE Fang,OU Jian
       （Medical College of Jinan University, Guangzhou 510632, China；Guangdong Provincial Hospital of TCM,Guangzhou 510120,China）
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Jiangzhi Ninggan capsule on acute hepatic injury induced by D-galactosamine(D-Gal) in mice. MethodsSixty mice were divided into six groups at random: model group, control group, Bifendate group (positive control group), Jiangzhi Ninggan Capsule groups (high dose,middle dose,low dose). The mice in treatment groups were administered medicine respectively via gavage, while the others in control and model groups were treated with the same dose of nomal saline. After six days, all of the mice except those in the control group were treated with intraperitoneal injection of 10% D-Gal (1 000 mg/kg).twenty-four hour later, the mice were killed and the blood sample and liver tissue were taken. Liver pathological changes were observed and the activities of serum ALT，AST, and the content of liver MDA were detected. ResultsCompared with the model group, the effect on levels of ALT，AST in blood and the content of MDA in liver tissue of Jiangzhi Ninggan Capsule groups(high dose、middle dose) were reduced significantly (respectively, P<0.05; P<0.01; P<0.001), and the liver pathological changes were lightened obviously in dose.ConclusionJiangzhi Ninggan capsule has protective acute hepatic injury induced by D-galactosamine.
       Key words：Jiangzhi Ninggan capsule;   D-galactosamine;   Acute liver injury;   Mice
       
       降脂宁肝胶囊由泽泻、苍术、三七、厚朴、山楂、柴胡、茵陈等中药组成，具有清热利湿、疏肝理气、活血化淤等功效，用于治疗各种原因引起的脂肪肝，临床疗效确切［1］。为了进一步探讨该方药的作用机制，本研究观察了降脂宁肝胶囊对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤模型小鼠肝功能及肝脏MDA水平和病理变化的影响。
       1  器材
       1.1   动物  NIH小鼠60只，体重18～22 g，雌雄各半，由广州中医药大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：广东省科学技术委员会粤检证字2001A008；动物饲养于广州中医药大学实验动物中心，实验动物环境设施合格证号：广东省科学技术委员会粤检证字2001C003。
       1.2    药品  降脂宁肝胶囊浸膏粉，由广州中医药大学新药开发研究中心提供，批号：20010611，临用前用乳钵研磨，以蒸馏水按所需浓度配制成水溶液。冰箱保存，用时提前取出，恢复至接近室温时，摇匀，备用。联苯双酯滴丸，北京协和药厂产品，批号：20010613，配制成阿拉伯胶混悬液备用。D-氨基半乳糖，上海试剂二厂产品，批号：20011007。临用前配成10% D－Gal生理盐水溶液。
       1.3    试剂  丙二醛（MDA）试剂盒，批号：20020828，南京建成生物工程研究所产品；ALT试剂盒，批号：20011201；AST试剂盒，批号：20011101，均由卫生部临床诊断试剂实验中心（上海）提供。
       1.4    仪器  752紫外-可见光分光光度计。
       2  方法
       2.1    动物分组及给药［2］  将小鼠随机分为6组，每组10只，即正常对照组，模型组，阳性对照组，降脂宁肝胶囊高、中、低剂量组。降脂宁肝胶囊组每天灌服降脂宁肝胶囊的水溶液， 高、中、低剂量组分别按临床剂量（5 g/d）的30，20，10倍设置，即高、中、低剂量分别为3，2，1 g/kg，配制药液浓度分别为0.15，0.10及0.05 g/ml。阳性对照组灌服联苯双酯水溶液，剂量为12 mg/kg（浓度为0.6 mg/ml，相当于临床用量的15倍）。均连续给药6 d。正常对照组和模型组灌服等体积生理盐水20 ml/(kg·d)。
       2.2    急性肝损伤模型的复制  除正常对照组外，其余各组于第6天给药后1 h，每只小鼠均经腹腔注射 10％D-Gal生理盐水溶液（1 000 mg/kg ），正常对照组腹腔注射等容积生理盐水。禁食不禁水, 24h后采集血和肝脏标本，作相关检测。
       2.3    动物处理及样品检测   腹腔注射 D-Gal后24 h，首先眼眶取血，离心分离血清，测定ALT，AST含量；处死小鼠取部分肝组织制匀浆，测MDA含量，另取部分肝脏作病理观察。
       2.4   统计学处理方法  计量资料用±s表示， 各组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有显著性意义。采用SPSS11.0统计软件进行分析。
       3    结果
       
       降脂宁肝胶囊不同剂量对小鼠D-Gal肝损伤模型肝脏病理变化有明显的改善作用，对肝脏气球样变、嗜酸性变、嗜酸性小体的出现均有较好抑制作用，能明显减轻肝脏坏死等级和炎症程度，其中高剂量组作用与阳性对照药的作用接近。与正常对照组相比，模型组小鼠血中ALT，AST水平及肝脏MDA水平均显著升高（P<0.001）。降脂宁肝胶囊不同剂量组与模型组比较，高、中剂量组均能显著降低上述有关指标（P<0.05，P<0.01或P<0.001），不同剂量组之间呈较好的剂量-效应关系，高剂量组的上述3项指标与联苯双酯组比较无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
       表1  降脂宁肝胶囊对小鼠血清ALT、AST及肝脏MDA的影响（略） 
       与正常组比较，###P<0.001；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与联苯双酯组比较，▲P<0.05， ▲▲P<0.01；n=10
       4  讨论 
       
       血清转氨酶是肝细胞损害的敏感指标，其中最常用的是ALT与AST。MDA是自由基攻击生物膜引发的脂质过氧化反应产物，组织中的含量可反映脂质过氧化程度，间接地反映出细胞受自由基攻击和损伤的程度［3］。本实验模型组小鼠血清ALT与AST水平、肝脏MDA含量均显著高于正常对照组（P<0.001），表明D-Gal破坏了肝脏的抗氧化系统，对肝细胞造成了损害。降脂宁肝胶囊本为治疗脂肪肝而设，因其具有疏肝理气，清热利湿，活血化淤等功效，临床用于治疗脂肪肝疗效肯定。而肝损伤作为各种肝脏病最终的病理演变，必然有其相应的病理学基础，这即是中医的“异病同治”治法能够起效的原因。我们的实验研究表明，在急性肝损伤模型小鼠肝脏中MDA的含量显著增高。王军等［4］的研究表明，高脂饮食可以增加大鼠肝脏内MDA的含量，周俊英等［5］ 则在对酒精性肝病发病机理研究时则发现普弗细胞(KC) 荧光标记率与肝匀浆MDA 呈正相关。可见无论是酒精性脂肪肝或是非酒精性脂肪肝，MDA在肝脏中均有不同程度的升高，与我们的急性肝损伤模型的实验结果相一致。降脂宁肝胶囊能够显著降低急性肝损伤模型小鼠肝脏MDA含量及血清ALT，AST水平，改善肝组织病理变化，可能与其能够增加肝细胞抗自由基攻击的能力，稳定细胞膜结构，从而起到保护肝脏的作用有关，这也可能是降脂宁肝胶囊能够用于治疗各种脂肪肝，并取得较好临床疗效的药理学基础，其详细的作用机制尚需作进一步的研究和探讨。
       【参考文献】
         　　［1］ 杨钦河,陈孝银,徐云生. 降脂宁肝胶囊治疗脂肪肝53例［J］. 新中医,2003, 35(4):53.
       
       ［2］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1994:493.
       
       ［3］ Larsen M, Webb G，Kennington S, et al. Mannitol in cardioplegia as an oxygen free radical scanvenger measured by malondialdehyde［J］. Perfusion, 2002, 17 ( 1) : 51.
       
       ［4］ 王 军,文爱清,陈东风,等. 吉非罗齐对高脂饮食喂养的Wistar 大鼠肝细胞脂肪变性的保护作用［J］. 重庆医学，2007, 36（8）：704.
       
       ［5］ 周俊英,姚树坤,赵彩彦,等. 库普弗细胞在大鼠酒精性肝病发病机理中的作用［J］.国际消化病杂志，2007, 27(3)：231.