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       【摘要】 
       目的用高效液相色谱法测不同来源的民族药岩陀药材中岩白菜素的含量，为资源利用提供依据。方法Zorbax SB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：甲醇- 水（含0.1%磷酸）17∶83，流速：0.80 ml/min，检测波长：275nm，柱温30℃。结果岩白菜素线性范围为3.05～10.98 μg，相关系数r = 0.999 9，其平均回收率为101.17%（n＝5），RSD为 1.56 %。结论在民间作为岩陀使用的植物根茎中都含有岩白菜素，但种间差异较大，且与产地和采收期有一定的关系。　
       【关键词】  岩陀； 民族药； 岩白菜素； 高效液相色谱法
       Quantitative Analysis of Bergenin in Ethnodrug  Rodgersia by HPLC
       XIA Conglong, DUAN Xinyu , HE Huabin ,YANG Lan ,LI Wangan ,YANG Xuelian
       （Department of Pharmacology,Dali University, Dali 671000,China）
       Abstract：ObjectiveTo analyze and compare the content of bergenin in 3 species of Rodgersia and to supply a basis for the resources exploitation.MethodsThe chromatographic assay of bergenin was performed on Zorbax  SB- C18 column(4.6 mm×150 mm，5 μm) with a flow rate of 0.80 ml/min.The mobile phase consisted of CH3OH-0.1%H3PO4(17∶83) .The detection wavelength was at 275 nm,and the column temprature was maitained at 30℃ . ResultsThe result indicated good linearity over the range of 3.05～10.98 μg with coefficients(r)of 0.999 9 .ConclusionThis experimenal results show that those plants used for Yuantuo in folk medicine contain bergenin,but the difference is notable.
       Key words：YanTuo;  Ethnodrug ;  Bergenin;   HPLC
       
       岩陀为白族、傈族民间习用的民族药, 药材的傈僳文名为埃陀,白族则习称散药，为虎耳草科植物羽叶鬼灯檠Rodgersia pinnata Franch.，西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.或七叶鬼灯檠Rodgersia aesculifolia Batal.的干燥根茎。其根茎具有收敛、消炎、祛风除湿的功效，对菌痢、肠炎、感冒头痛、外伤出血、风湿骨痛、老年性支气管炎等常见疾病有较好的疗效［1］。岩陀根茎中主要含有糖类、鞣质、岩白菜素、槲皮素及山萘酚等黄酮类成分［2］。其止咳的主要成分为岩白菜素（bergenin），因岩白菜的资源减少，现主要从岩白菜属中岩白菜Bergenia purpurascens Hook. f. et Thoms.鬼灯檠属中西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.的根茎中提取岩白菜素，经多年的开发利用，上述两种植物面临资源短缺。本实验对3种鬼灯檠植物根茎中岩白菜素的含量进行了含量测定，为扩大药源和合理开发利用资源提供有用的数据。
       1  仪器与材料
       
       1100 LC高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UV1100紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；SK5200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；梅特勒－托利多电子天平（梅特勒－托利多仪器－上海有限公司）。甲醇（美国天地公司）为色谱纯，水为重蒸水。其余试剂为分析纯。
       
       岩白菜素对照品购自中国药品生物制品检定所，批号为1532-200202。
       
       实验材料（产地见含量测定项）由作者本人鉴定为虎耳草科植物羽叶岩陀Rodgersia pinnata Franch. ，西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.和七叶鬼灯檠Rodgersia aesculifolia Batal.的干燥根茎。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件   ZORBAX  SB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为甲醇- 水（含0.1%磷酸）17∶83；检测波长:275 nm；流速:0.80 ml/min；柱温:30℃。在该色谱条件下，岩白菜素被洗脱且达到基线分离，保留时间为11.33 min。按岩白菜素峰计算，理论塔板数应不低于5 000。
       2.2   对照品及供试品溶液的制备
       2.2.1  对照品储备液  精密称取对照品岩白菜素6.10 mg置10 ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容，配制成对照品储备液，浓度为0.61 mg/ml。
       2.2.2  样品溶液  精密称取粉碎过60目筛的样品各1 g，置于锥形瓶中，加入20 ml甲醇，浸泡5 h，超声提取45 min，滤过，以甲醇洗涤锥形瓶及滤渣3次，每次1 ml，定容置25 ml容量瓶中［3］，作为储备液使用。
       2.3    方法学考察
       2.3.1  线性关系考察   精密量取对照品储备液（0.61 mg/ml）5，8，12，15，18 μl注入高效液相色谱仪中，按选定的色谱条件进行测定，记录色谱图及峰面积。以峰面积的积分值定量，以进样量（μg）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析，岩白菜素的回归方程为：
       
       A= 1 829.569 2C+ 67.575 6    r = 0.999 9
       
       线性范围为：3.05～10.98 μg。
       2.3.2   精密度实验 取岩白菜素对照品（0.61 mg/ml）溶液，连续进样5次，每次进样5 μl。分别测定峰面积，计算RSD为0.17%(n=5)。表明进样精密度良好。
       2.3.3  重复性实验精密称取同一批七叶鬼灯檠粉末5份，每份1 g，分别按样品溶液的处理方法制备样品液，进样5 μl，在给定的色谱条件下测定岩白菜素的峰面积，计算RSD为1.71%。
       2.3.4  稳定性实验将同一样品溶液隔0，1，2，4，6，12 h进样5μl，在选定的色谱条件下测定岩白菜素的峰面积，计算RSD为1.16%。表明样品溶液在12 h内稳定。
       2.3.5   加样回收实验取已知含量的同一供试品溶液5份，分别添加对照品适量（岩白菜素：0.42 mg/ml溶液0.5 ml），按样品溶液处理方法操作，测得岩白菜素的平均回收率为101.17%；RSD为1.56%。
       2.4   样品含量测定  分别取供试品溶液，进样5 μl，在给定的色谱条件下，测定岩白菜素的峰面积，采用对照品对照法计算其含量，结果见表1～2（不同采收期的羽叶鬼灯檠、七叶鬼灯檠采自剑川县）。岩白菜素对照品及样品图谱见图1。
       表1  3种岩陀药材及岩白菜根茎中岩白菜素的含量（略）
       表2  不同采收期两种岩陀药材中岩白菜素的含量（略） 
       图1  HPLC图（略） 
       3  讨论
       3.1   检测波长的选择应用紫外可见分光光度计UV1100 在190～400 nm范围内对岩白菜素进行紫外扫描，并结合三维图，发现该化合物有两个吸收峰，分别位于220 nm和275 nm，考虑流动相中甲醇在220 nm波长处对基线有影响，故实验中检测波长选为275 nm。
       3.2  流动相与色谱柱的选择本实验曾比较过文献报道过的多种流动相：甲醇－水（25∶75），甲醇－水（45∶55），甲醇－醋酸－水（12∶0.5∶88）等系统［3～5］，经过反复多次实验，选择本文“2.1”项色谱条件；加0.1%磷酸可抑制拖尾。我们还对3种色谱柱［ZORBAX  SB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)， ZORBAX  DB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，ZORBAX  XDB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm) ］进行比较，在该色谱条件下，以ZORBAX  SB- C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)分离度较好，柱效高。
       
       通过测定发现，3 种岩陀药材中以西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.根茎中岩白菜素的含量最高，以七叶鬼灯檠Rodgersia aesculifolia Batal .根茎中岩白菜素的含量最低。同种岩陀药材在不同产地（采自同一月份）岩白菜素的含量也有差异。采于同一产地不同采收期的岩陀药材中岩白菜素的含量有明显的差异，以8月份含量最低，故作者认为最佳采收期为5月份前、10月份后。
       【参考文献】
         　　［1］ 云南省卫生厅.云南省药品标准［M］.昆明：云南大学出版社，1996：72.
       
       ［2］ 江苏新医学院. 中药大辞典［M］. 上海: 上海人民出版社,1999：2359.
       
       ［3］ 孙诗清，李多伟，郭培莹，等.RP-HPLC测定不同产地鬼灯檠中岩白菜素的含量［J］.中成药，2003，25（12）：979.
       
       ［4］ 张文珠，师彦平，刘 霞，等.中药岩白菜的反相高效液相色谱分析［J］.分析科学学报，2003，19（6）：525.
       
       ［5］ 丁家欣，张秋海，张 玲，等.RP-HPLC测定不同产地与采收期虎耳草中岩白菜素的含量［J］.中国中药杂志，2002，27（10）：792.