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       【摘要】 
       目的测定青梅和大叶鱼骨木不同有机溶剂提取浸膏的抑菌活性。方法采用常规扩散法测定青梅和大叶鱼骨木的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇提取浸膏对大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、枯草杆菌、根霉和黑曲霉的抑制活性。结果在两种药物提取浸膏中，只有青梅醋酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏以及大叶鱼骨木氯仿浸膏对这3种细菌有抑制活性，而所有浸膏对两种霉菌均没有抑制活性；同时，随着溶液浓度的增大其抑制效果也逐渐增强。结论青梅醋酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏以及大叶鱼骨木氯仿浸膏对3种细菌有抑制活性，而所有浸膏对两种霉菌均没有抑制活性。
       【关键词】  抑菌活性； 青梅； 大叶鱼骨木
       Antimicrobial Activity of Extracts from Vatica mangachpoi Blanco and Canthium simile Merr of Hainan Island
       CHEN Zhong,   YANG Yan, WANG Tianshan,CHEN Guangying*,MO Zhengrong, WANG Anwei
       (Hainan Provincial Key Lab of Tropical Pharmaceutic Herb Chemistry, Haikou, China 571158, China; Department of Chemistry, Hainan Normal University, Haikou, 571158,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the antimicrobial activity of the extracts prepared from Vatica mangachpoi Blanco and Canthium Simile Merr of Hainan Island.MethodsIn present study, the classic disc diffusion method was applied for testing the antimicrobial activity of petroleum ether, chroloform, ethyl acetate and n-butanol from V. mangachpoi Blanco and C. Simile Merr, respectively. ResultsOnly the ethyl acetate and n-butanol extracts from V. mangachpoi Blanco and the chroloform extract from C. Simile Merr showed antimicrobial activity against E. coli,  S.aureusand B.subtilis, but no remarkable activity was observed against R..nigricans and A.niger. ConclusionThe ethyl acetate and n-butanol extracts from V. mangachpoi Blanco and the chroloform extract from C. simile Merr has antimicrobial activity against these three bacteria, but has no antimicrobial activity against these two moulds.
       Key words:Antimicrobial activity；  Vatica mangachpoi Blanco；  Canthium Simile Merr
       
       海南素有“天然药库”的美称，分布有三千四百多种热带及亚热带植物，是南药的主要生产基地［1］，其中有40%的植物已被当地居民作为民族药物，主要用于治疗一些疑难病症。实验室利用地处海南的优势，长期研究海南地区黎苗族的传统药用植物，旨在寻找具有生物活性的天然药物和结构先导物。其中青梅在海南民间长期用作杀菌消毒，治疗肝炎及提取中药龙脑香。国外学者对大叶青梅属植物的化学成分进行了研究，主要得到白藜芦醇低聚物和三萜类化合物。白藜芦醇和它的低聚物由于具有抗人免疫缺陷病毒（HIV）［2］、抗肿瘤［3］、抗氧化和抗菌消炎等［4］生物活性而引起关注。而大叶鱼骨木在民间被用于治疗各种外伤疼痛、金伤、跌打损伤、淤血疼痛、肿胀、闷挫伤、扭伤。国外学者对大叶鱼骨木属植物的化学成分进行了研究，得到烯醚类、酚苷类［5］、氰苷类［6］和黄酮苷类［7］化合物。而这两种植物的化学成分和药理活性研究未见报道。本文报道了这两种民间药用植物的不同有机溶剂提取物对细菌和霉菌的抑制活性。
       1  材料
       1.1  供试菌种大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、枯草杆菌、根霉、黑曲霉，均由海南师范大学生物系提供。
       1.2  供试样品青梅与大叶鱼骨木采集于海南霸王岭地区，由海南霸王岭国家级自然保护区陈庆鉴定为青梅Vatica mangachpoi Blanco与大叶鱼骨木Canthium Simile Merr。
       2  方法
       2.1  浸膏提取方法取青梅的茎皮部分和大叶鱼骨木的叶子与嫩枝部分分别用70%的乙醇在80℃回流提取3 h，分别提取3次后合并提取液进行浓缩，得到醇提浸膏；此醇提浸膏分散于适量水中，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇提取浓缩后得到对应溶剂提取的浸膏。青梅的石油醚浸膏、氯仿浸膏、醋酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏分别标记为VMBA，VMBB，VMBC和VMBD，而大叶鱼骨木的石油醚浸膏、氯仿浸膏、醋酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏分别标记为CSMA，CSMB，CSMC和CSMD。这些提取浸膏供测试用。
       2.2   抑菌活性测定方法
       2.2.1  培养基细菌培养基：取19.5 g营养肉汤培养基粉末溶于1 L无菌水中，加15 g的琼脂，加热待其溶解后灭菌。
       
       霉菌固体培养基：取28.5 g真菌培养基粉末溶于1 L无菌水中，加15 g的琼脂，加热待其溶解后灭菌。
       2.2.2  抑菌实验方法用半径15 mm的滤纸片分别将各药品不同提取浸膏及不同浓度的溶液浸透滤纸片。待其自然晾干后放入接有菌种的培养皿中。利用其扩散作用，使滤纸片的药品溶入培养基中。菌种在经过24 h或48 h培养后（细菌培养24 h、霉菌培养48 h），然后用游标卡尺测量其抑菌圈大小，其计算方法如下：
       
       抑菌圈半径 R=±SD
       
       =Xn，SD=X2-（X2）/nn-1  （n=6，单位mm）
       3  结果与分析
       
       从青梅和大叶鱼骨木中提取的8种浸膏分别配制成浓度为0.025，0.050和0.100 g/ml的乙醇溶液，测试其对大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、枯草杆菌、根霉和黑曲霉5种微生物的抑制效果。测试结果显示，这些提取浸膏只对大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌和枯草杆菌这3种细菌有抑制作用，而对根霉和黑曲霉这两种霉菌没有抑制作用。这些提取浸膏在不同浓度下对不同细菌的抑制效果列于表1～3中。青梅的正丁醇浸膏和醋酸乙酯浸膏在测试浓度下对细菌有很强的抑制效果，其中对大肠杆菌和金黄色葡萄杆菌的抑制作用强于对枯草杆菌的抑制作用。而大叶鱼骨木的提取浸膏中只有氯仿浸膏有抑菌活性，且抑制作用明显弱于青梅相应浸膏相应浓度的抑制作用，在浓度为0.025 g/ml时没有抑制作用。
       表1  青梅、大叶鱼骨木提取物对大肠杆菌的抑菌效果（略）
       表2  青梅、大叶鱼骨木提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果（略）
       表3  青梅、大叶鱼骨木提取物对枯草杆菌的抑菌效果（略）
       4  讨论
       
       由于实验供试品是粗提取物，所含的化学成分较复杂，并且不是所有的化合物均表现出抑菌活性，因此所配制溶液的浓度均比较高。在此抑菌活性初步实验的指引下，我们正在研究具有抑菌活性的提取浸膏的化学成分。初步分离纯化的结果显示，大叶鱼骨木氯仿浸膏主要含有小分子酚类化合物；另外根据文献报道，青梅属植物的正丁醇浸膏和醋酸乙酯浸膏主要含有二苯乙烯类化合物，且这些化合物表现出很强的抗HIV活性。
       
       抑菌活性初步定性实验提示青梅和大叶鱼骨木这两种药用植物具有相当的生物活性，其活性部位的化学成分研究在国内外尚未有报道。因此对这两种药用植物的药理活性和化学成分正在研究中，可望从这两种药用植物中发现新颖的具有抗菌、抗HIV和抗HBV活性的天然产物。
       【参考文献】
         　　［1］ 谭业华，陈 珍，顾种宜,等.海南东北区中药资源及南药生产发展策略［J］.海南师范学院学报（自然科学版），2006，19（1）：65.
       
       ［2］ Zhang H J，Tan C T，Hoang V D， et al. Natural anti-HIV agents. Part IV. anti-HIV constituents from Vatica cinerea［J］.J.Nat. Prod，2003,66:263.
       
       ［3］ Ito T，Akao Y，Yi-H ，et al. Antitumor effect of resveratrol oligomer against human cell lines and the molecular mechanism of apoptosis induced by vaticanol C［J］.Carcinogenesis，2003,24(9):1489.
       
       ［4］ Joanna R，Alan J-Z-P，Lew B-F，et al. Antimicrobial resveratrol tetramers from the stem bark of Vatica oblongifolia ssp.oblongifolia［J］.J.Nat.Prod，2002,65,1554.
       
       ［5］ Kanchanapoom Tripetch，Kasai Ryoji，Yamasaki Kazuo，et al. Iridoid and phenolic diglycosides from Canthium berberidifolium［J］.Phytochemistry ，2002, 61(4)：461.
       
       ［6］ Murai Yoshihiro，Kashimura Shigenori，Tamezawa Syouhei，et al. Absolute configuration of (6S,9S)-roseoside from Polygonum hydropiper［J］.Planta Medica，2001, 67(5)：480.
       
       ［7］ Gunasegaran, R.，Subramani, K.，Azantha Parimala, P.， et al.7-O-(6-O-Benzoyl-D-glucopyranosyl) -rutin from leaves of Canthium dicoccum［J］.Fitoterapia，2001，72(3)：201.