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       【摘要】 
       目的改进高效液相色谱法测定人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的方法。方法最佳色谱条件：ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）为色谱柱，采用梯度洗脱（乙腈与水），检测波长203 nm，流速1.0 ml/min。结果人参皂苷Re的回归方程为Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，线性范围为1.88 ～60.16 μg/ml，平均回收率为99.35% (RSD=0.49%,n=6)。结论采用改进的测定方法简单、准确和重现性好，适合人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的质量控制。
       【关键词】  人参茎叶皂苷； 人参茎叶皂苷Re； 反相高效液相色谱
       Impovement of HPLC Determination of Ginsenoside Re in Ginsenosides
       CHEN Hanmei， ZHAO Guangcai
       （Guangzhou Sports Science Institute,Guangzhou,510650, China）
       Abstract：ObjectiveTo improve the HPLC method for determination of ginsenosid Re in ginsenosides. MethodsODS column（150 mm×4.6 mm，5 μm） was used. The mobile phase consisted of CH3CN-H2O, the detection wavelength was 203 nm，and the flow rate was 1.0 ml/min.ResultsThe regression equation of  ginsenoside Re was Y=9 505.448 8X－1 159.607 0 with a correlation coefficient of 0.999 8，and linear range was within the range of 1.88 ～60.16 μg/ml, the average recovery of ginsenosid Re was  99.35% (RSD=0.49%,n=6). ConclusionThis method is simple, quick, and reproducible and it is suitable for the quality control of Panax ginseng.
       Key words：Panax ginseng；  Ginsenosid Re；  RP-HPLC
       
       人参茎叶皂苷是从五加科植物人参的干燥茎叶中提取的有效成分经喷雾干燥而得，其中含有各种苷如人参皂苷Re。关于人参皂苷中人参皂苷Re的测定方法已有文献报道［1～4］，笔者也曾采用PR-HPLC法对人参茎叶皂苷中的人参皂苷Re的含量进行了测定，但有些样品中人参皂苷Re存在分离不完全的情况。为了准确地测定人参皂苷Re的含量，我们对该方法进行了改进和研究，采用梯度方法对人参皂苷Re的含量进行了测定。现报道如下。
       1   仪器与试药
       
       岛津LC-2010A高效液相色谱仪（LC-10AD泵，SPD-M10AVP检测器，SIL-10VP自动进样器，Class-VP色谱工作站）；超声波清洗器（CSX-370，上海医用恒温设备厂）；电子分析天平（岛津公司）。
       
       人参皂苷Re标准品，批号110754－200421，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供；甲醇为分析纯（广州市化学试剂公司），乙腈为色谱级（MERCK），水为重蒸水。人参茎叶皂苷粉由陕西禾博天然产物有限公司提供。
       2  方法与结果
       2.1    色谱条件Shim-pack VP-ODS分析柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为乙腈－水；流速1.0 ml/min；检测波长203 nm；柱温：35℃；梯度条件见表1。
       表1  流动相的梯度洗脱（略）
       在上述色谱条件下，人参皂苷Re与杂质完全分离，人参皂苷Re的保留时间约17 min（图1～3），理论塔板数按人参皂苷Re峰计算大于2 500。
       图1  空白溶液高效液相色谱图（略）
       图2  人参皂苷Re对照品溶液高效液相色谱图（略）
       图3  样品溶液高效液相色谱图（略）
       2.2  对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品5 mg（真空干燥至恒重）置25 ml量瓶中，加少量甲醇，超声溶解30 min，待溶液恢复常温后，用甲醇稀释至刻度，用0.22 μm的微孔滤膜过滤溶液备用。
       2.3  线性关系考察精密吸取上述人参皂苷Re对照品溶液，分别进样0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以人参皂苷Re对照品进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，人参皂苷Re的回归方程为：Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，在1.88～60.16 μg/ml范围内线性关系良好。
       2.4  精密度实验对含人参皂苷Re低、中、高3种浓度的标准溶液，于同日内分别测定6次，并对上述3种浓度的标准溶液于不同天分别测定6次。结果见表2。
       2.5  稳定性实验吸取同一供试样品溶液分别于0，4，6，8h及第1，2，4天后分别测定结果RSD分别为0.63%，1.13%，表明该样品溶液3 d内稳定。
       2.6  重复性实验取同一批号样品（20070401批号），照“2.2”项下方法制备6份，分别测定，计算RSD为0.52％。
       表2  日内及日间差异实验结果（略）
       2.7  加样回收率实验采用加样回收法。分别精密称取已测知含量的样品（含量人参皂苷Re12.2%）约10 mg ，共计6份，每2份为1组，每组分别加入18.80 μg/ml的人参皂苷Re对照品1，5，10 ml，精密加甲醇至50 ml，密塞、超声提取30 min，放冷，用甲醇补足失重，用0.22 μm滤膜过滤，测定实际含量，计算回收率，结果见表3。
       表3  回收率实验结果（略）
       2.8  供试品溶液的制备取（20070401批号）样品，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法，以人参皂苷Re含量为优选指标，分别超声处理15，30，45 min。结果表明超声处理30 min为最佳提取时间。
       
       取供试品约10 mg，精密称定，至25 ml量瓶中加甲醇，超声溶解30 min，待溶液恢复常温后，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm滤膜过滤，即得。
       2.9  样品测定按“2.2”项的方法进行处理3批样品，照上述色谱条件，反复进样6次。结果见表4。
       表4  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
       
       为了提高分离效能，本实验采用梯度洗脱的方法。流动相比例的确定：在上述色谱条件下，本实验对流动相A 相、B 相分别选择了不同比例的甲醇与水(磷酸溶液)、乙腈与水和多种梯度条件进行试验。结果证明，流动相选择乙腈与水进行梯度洗脱，人参皂苷Re与杂质分离效果最好。       
       
       该方法灵敏、准确可靠，可以作为人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的含量测定方法。
       【参考文献】
         　　［1］ 候团章.中草药提取物(第1卷)［M］.北京：中国医药科技出版社,2004:106.
       
       ［2］ 苗明三.现代实用中药质量控制技术［M］.北京:人民卫生出版社,2000:29.
       
       ［3］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:7.
       
       ［4］ 许海琴,许列琴.常用天然提取物质量标准参考手册［M］.北京：化学工业出版社，2003:108.