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       【摘要】 
       目的研究比较夏枯草不同提取物的镇静、催眠作用。方法采用镇静、催眠实验方法，观察夏枯草不同提取物对小鼠自主活动的影响以及对戊巴比妥钠小鼠睡眠的协同作用。结果夏枯草醇提物及其氯仿萃取部位和醋酸乙酯萃取部位均能明显减少小鼠自主活动次数，增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。结论夏枯草醇提物及其氯仿萃取部位和醋酸乙酯萃取部位均具有明显的镇静、催眠作用。
       【关键词】  夏枯草； 镇静； 催眠
       Study on the Sedative and Hypnotic Effects of Spica prunellae
       ZHAO Jiangli, WU Xiangyang,YANG Liuqing*,LI Yongjin,WANG Wenwen,ZOU Yanmin
       (School of Chemistry and Chemical Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang 212013，China； School of Pharmacology, Jiangsu University, Zhenjiang 212013，China； School of Medcine，Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China)
       Abstract：Objective To study the sedative and hypnotic effects of the different extracts of Spica prunellae. MethodsSedative and hypnotic experiments were made to observe the effects of different extracts of Spica prunellae on spontaneous motion and hyponosis in mice. ResultsThe ethanol extract of Spica prunellae together with its chloroform extract and ethylacetate extract could markedly inhibit spontaneous motion, enhance the sleeping number of pentobarbital sodium (subthreshold dosage) and prolong the sleeping time of sodium pentobarbital (superthreshold dosage).ConclusionThe ethanol extract of Spica prunellae together with its chloroform extract and ethylacetate extract has obvious sedative and hypnotic effects.
       Key words：Spica prunellae;   Sedative；  Hypnosis
       
       失眠是指睡眠的始发和睡眠的维持发生障碍，是睡眠质量或数量达不到正常需求的一种主观体验［1］。调查显示［2］，全世界50%～60%的成年人患有不同程度的睡眠障碍，我国失眠的发生率高达40%。目前对失眠的治疗大多选择具有镇静、催眠作用的合成类药物，但这类药物具有副作用，易产生依赖性和成瘾性。研究发现，一些中药具有镇静、催眠作用，可有效治疗失眠，并且不良反应少。夏枯草Spica prunellae为药食两用植物，是治疗失眠的传统中药。《重庆堂随笔》记载夏枯草“散结之中兼有和阳养阴之功效，失血后不寐者服之即寐”。《本经疏证》记载夏枯草能“通阴阳……治不眠”。现代临床也有半夏、夏枯草合用治疗失眠的研究报道［3～5］，但有关夏枯草镇静、催眠物质基础的系统研究未见报道。本文对夏枯草不同提取物的镇静、催眠活性进行研究，为进一步探明其物质基础及作用机制提供基础。
       1  材料 
       1.1  动物  健康昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由江苏大学实验动物中心提供。
       1.2  药材夏枯草干燥果穗，产地江苏，购自镇江江扬国药有限公司，由镇江市药品检验所陈黎主任药师鉴定，65℃干燥12 h，粉碎成粗粉，贮于干燥器中备用。
       1.3  仪器和试剂  ALPHA2-4冷冻干燥设备（德国CHRIST公司）；RE-520旋转蒸发装置（巩义市英峪予华仪器厂）；YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪（山东省医学科学院）；1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器（江苏金坛华晶石英玻璃厂）。生理盐水（湖南科伦制药有限公司，国药准字H51021158）。医用乙醇（95%，v/v）；其余试剂均为分析纯；所有用水均为双蒸水。
       
       地西泮（浙江医药股份有限公司新昌治药厂，批号051030）配制成0.2 mg/ml浓度的生理盐水溶液；戊巴比妥钠（serva公司，上海化学试剂分装厂，产品批号84-06-12）配制成1 mg/ml和1.75 mg/ml两个浓度的生理盐水溶液备用。
       2  方法与结果
       2.1  样品制备
       2.1.1  夏枯草提取物的制备  称取适量夏枯草，依次用石油醚(60～90℃)、95%乙醇、沸水进行回流提取，残渣用5×10-3mol/L NaOH 水溶液浸提，各提取液回收溶剂得浸膏，醚提浸膏和醇提浸膏挥尽溶剂分别得石油醚提取物（A）和乙醇提取物（B），水提浸膏和碱提浸膏冷冻干燥分别得水提物（C）和碱提物（D）。4种提取物均配制成生药浓度为1 g/ml的生理盐水溶液备用。
       2.1.2  醇提物各部位的制备  夏枯草醇提物（B）依次用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取，各萃取液回收溶剂得氯仿萃取部位（B1）、醋酸乙酯萃取部位（B2）和正丁醇萃取部位（B3），萃取物浓缩得浸膏B4。4种部位均配制成生药浓度为1 g/ml的生理盐水溶液备用。
       2.2   镇静、催眠药理实验
       2.2.1  对小鼠自主活动的影响［6］  实验前8 h小鼠禁食进水，实验时随机分为空白对照组、阳性对照组和不同给药组，每组10只，雌雄各半；各组给药体积以0.4 ml/20 g计，灌胃给药。阳性对照组给药地西泮（给药量按4 mg/kg计），不同给药组给各样品药。给药30 min后将小鼠放入自主活动记录仪的活动箱中，适应3 min 后记录5 min内小鼠的活动次数，得自主活动次数（即每只小鼠的平均活动次数）。
       2.2.2  对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响［6］  受试动物的处理、分组、数量、给药体积和方法同“2.2.1”项。各给药组给药30 min后和阳性对照组一起腹腔注射阈上剂量（35 mg/kg）的戊巴比妥钠。以给药后小鼠反正反射消失达1 min为入睡指标，反正反射消失至恢复所经历的时间为睡眠时间，记录各组小鼠的睡眠时间，得睡眠时间（即每只小鼠的平均睡眠时间）。
       2.2.3  对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响［6］  受试动物的处理、分组、数量、给药体积和方法同“2.2.1”项。各给药组给药30 min后和阳性对照组一起腹腔注射阈下剂量（20 mg/kg）的戊巴比妥钠，以给药后15 min内小鼠反正反射消失达1 min为入睡指标，观察记录各组小鼠入睡只数。
       2.2.4  统计学处理 数据用SAS统计软件进行处理，结果用(±s)表示，用组间t-检验比较各给药组与对照组之间差异的显著性。
       
       自主活动抑制率（%） =（空白组活动次数－药物组活动次数）/空白组活动次数×100%
       2.3  结果
       2.3.1  夏枯草提取物的镇静、催眠活性
       2.3.1.1  对小鼠自主活动的影响4种夏枯草提取物对小鼠自主活动的影响(见表1)。结果表明，与空白对照组比较，A，C，D对小鼠自主活动影响很小，B对小鼠自主活动有明显抑制作用，抑制率为36.56%，与阳性对照组效果相当。
       表1  夏枯草提取物对小鼠自主活动的影响（略）
       与空白对照组相比，*P＜0.05；n=10
       2.3.1.2  对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响4种夏枯草提取物对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的延长作用结果（见表2）。可见与阳性对照组比较，B对阈上剂量戊巴比妥钠睡眠时间有延长作用，且作用显著。
       表2  夏枯草提取物对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响（略）
       与阳性对照组相比，*P＜0.05；n=10
       2.3.1.3  对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响4种夏枯草提取物对阈下催眠剂量戊巴比妥钠的协同作用结果（见表3）。结果表明，B能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数，而A，C，D对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数几无影响。
       
       由上可见，夏枯草醇提物具有明显的镇静、催眠作用，因此本文对醇提物进行进一步分离，并测试各部位的镇静、催眠活性。
       2.3.2  夏枯草醇提物各部位的镇静、催眠活性
       2.3.2.1  对小鼠自主活动的影响夏枯草醇提物经萃取分离所得4种部位对小鼠自主活动的影响（见表4）。结果表明， B1和B2对小鼠自主活动次数的抑制率分别为41.79%和39.18%，高于阳性对照组，与空白对照组比较，B1具有非常显著差异，B2具有显著差异。
       表3  夏枯草提取物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响（略）
       2.3.2.2  对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响夏枯草醇提物四种部位对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的延长作用（见表5）。由表5可知，B1和B2对阈上剂量戊巴比妥钠睡眠时间有明显延长作用，与阳性对照组比较差异显著。
       表4  夏枯草醇提物各部位对小鼠自主活动的影响（略）
       与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；n=10
       表5  夏枯草醇提物各部位对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响（略）
       与阳性对照组相比，*P＜0.05；n=10
       2.3.2.3  对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响夏枯草醇提物4种部位对阈下催眠剂量戊巴比妥钠的协同作用（见表6）。结果表明，B1和B2能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数，B4对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数没有影响。
       表6  夏枯草醇提物各部位对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响（略）
       3  讨论
       
       夏枯草醇提物具有明显的镇定、催眠作用，对小鼠自主活动具有明显抑制作用，与阳性对照组相当；对戊巴比妥钠有协同作用，能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡数目，显著延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。
       
       夏枯草醇取物的氯仿萃取部位和醋酸乙酯萃取部位均具有显著的镇定、催眠作用。夏枯草醇提物分离所得4个部位中，氯仿萃取部位和醋酸乙酯萃取部位对小鼠自主活动有显著的抑制作用，高于阳性对照组；对戊巴比妥钠有明显的协同作用，能增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡数目，显著延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。
       
       夏枯草化学成分的研究表明，夏枯草中含有三萜类、黄酮类、苯丙素类和皂苷等多种化学成分，作者对夏枯草醇取物及其氯仿萃取部位和醋酸乙酯萃取部位进行了薄层色谱分离和柱色谱分离，鉴定了其中的一些化学成分，有关内容后续报道。
       【参考文献】
         　　［1］ 范 亮．失眠及临床药物治疗［J］.中国药物应用与监测，2006，1：35.
       
       ［2］ 欧军林，邓卓玉，黄 楠，等.“药”安眠［J］.中国处方药，2003，2（2）：60.
       
       ［3］ 王康锋，张洪斌，张立娟．半夏夏枯草合用治疗失眠的理论探讨及临床应用［J］.中医药学刊，2006，24（3）：484.
       
       ［4］ 林文谋，余家娃．半夏、夏枯草治疗失眠症113例临床观察［J］.海峡药学，1995，7（3）：109.
       
       ［5］ 孟凡振．自拟双夏汤加减治疗失眠56例［J］.安徽中医临床杂志，2003，15（5）：397.
       
       ［6］ 陈 奇．中药药理研究方法学（第2版）［M］.北京：人民卫生出版社，2006：667．