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       【摘要】 
       目的对盐酸青藤碱外敷贴散进行24 h体外释放测定及其释药规律的研究。方法应用体外透皮吸收实验仪模拟体内环境进行盐酸青藤碱外敷贴散的体外释放实验，并用高效液相色谱仪测定释放量。结果研究表明盐酸青藤碱外敷贴散在初期释放速率恒定，中期随时间释放速率减小，后期随时间增加释放速率变化不大。12 h内符合Higuchi方程，此方程为Q=3.082 6 T1/2-2.1479, r=0.982。结论盐酸青藤碱外敷贴散释放性好，并在12 h达到释药平衡。
       【关键词】  盐酸青藤碱； 外敷贴散； 体外释放
       Study on Drug Release of Sinomenine External Application Sticking Powder in vitro
       SUN Yu ,LI Yongji*, ZHANG Xiwu，GUO Yuyan
       (Heilongjiang University of TCM ,Harbin, 150040，China)
       Abstract：ObjectiveTo determine the 24h release in vitro of sinomenine external application sticking powder and to study its rules. MethodsBy simulating the in vivo environment using vitro percutaneous absorption equipment, the vitro releasing experiment of sinomenine external application sticking powder was conducted, and the releasing rate was determined by high-performance liquid chromatography. ResultsThe releasing rate of sinomenine external application sticking powder kept constantly in the initial stage, releasing rate decreased with the time in the middle stage, and the releasing rate changed little in the latter stage. It comformed the Highchi Equation in 12 h, and the equation was Q=3.082 6 T1/2-2.147 9,r=0.982. Conclusion The release property of sinomenine external application sticking powder is good and reaches the drug releasing equilibrium in 12 h.
       Key words：Sinomenine;  External application sticking powder;  Releasing in vitro
       
       经皮给药系统（Transdermal Therapeutic System, TTS或Transdermal Drug Delivery, TDD）是指在皮肤表面给药，使药物以恒定速度（或接近恒定速度）通过皮肤各层，进入体循环产生全身或局部治疗作用的控释新剂型。其优点表现为：药物吸收不受消化道内pH、酶、食物和药物在肠道移动时间等复杂因素的影响；避免药物在肝脏的首过效应；可持续控制给药速度；用药部位在体表，出现不良反应时可随时中断给药［1，2］。
       
       青藤碱（sinomenine）是中药青风藤的镇痛消炎有效成分，具有抗炎、免疫抑制、降压、抗心律失常等药理作用，临床治疗类风湿性关节炎等各类风湿病效果较好，已有正清风痛宁、盐酸青藤碱注射液，毛青藤总碱片等制剂应用于临床。由于青藤碱口服制剂生物利用度较低，半衰期较短，且需长时间口服给药，因而进行其TDD研究极有意义。
       1  器材
       1.1  试剂盐酸青藤碱（药用，西安塞邦贸易有限责任公司），青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇（色谱纯，DIMA TECHNOLOGY INC），糊精（药用，哈尔滨怡康药业提供），卡波姆（药用，北京市海淀会友精细化工厂），硬脂酸镁（药用，天津市春义化工料有限公司），氢氧化钠（药用，天津市耀华化学试剂有限公司），醋酸（药用，天津市津东天正精细化学试剂厂），乙醇，磷酸二氢钠等均为分析纯。
       1.2  仪器Waters高效液相色谱仪（美国）；透皮吸收实验仪（天津市正通科技有限公司），其中包括电控恒温水浴箱，磁力搅拌器，透皮渗透扩散装置；100～1 000 μl移液器（大龙医疗设备（上海）有限公司）。
       1.3  大鼠皮肤Wistar大鼠（180～200 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供）。其腹部用脱毛剂脱毛，饲养24 h，处死，取腹部皮肤，剥离皮下脂肪层，置于生理盐水中3℃低温保存，一周内使用。
       2  方法与结果
       2.1  青藤碱体外分析方法的建立
       2.1.1  贮备液的配置精密称取青藤碱对照品46.015mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度作为储备液（浓度为920.3 mg/L）。精密吸取5 ml储备液，置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度作为贮备液（浓度为92.03 mg/L）。精密吸取贮备液一定量，分别配置成浓度为9.203，46.015，184.06，368.12，552.18，736.24，920.3 mg/L的系列标准贮备液。
       2.1.2  色谱条件色谱柱KromasilC18柱，4.6 mm×250 mm；以甲醇-磷酸缓冲盐（0.005 mol/L磷酸氢二钠溶液）55∶45为流动相；检测波长为263 nm；流速1.0 ml·min-1,理论塔板数按青藤碱峰计算应不低于1 000。
       2.1.3  标准曲线绘制精密吸取1.0 ml浓度为9.203，46.015，184.06，368.12，552.18，736.24，920.3 mg/L的青藤碱标准贮备液，移入带塞刻度试管中，于40～50℃水浴蒸干甲醇［3］，分别精密加入接受液（生理盐水）1.0 ml，并滴加氨水至碱性，精密加入甲醇9 ml，得到浓度为0.920 3，4.601 5，18.406，36.812，55.218，73.624，92.03 mg/L.每个浓度进样10 μl，进行色谱分析，以青藤碱对照品浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程Y=987 729X-5 567.5，r=0.999 95。
       2.1.4  精密度实验
       
       日内精密度：精密吸取1.0 ml浓度为46.015，368.12，920.3 mg/L青藤碱标准贮备液，移入带塞刻度试管中，按“2.1.3”项下操作（自“于40～50℃水浴蒸干甲醇……精密加入甲醇9 ml”），配置的3个浓度在同一天内分别进样5次，测定峰面积，计算得RSD分别为2.4%，0.5%，0.2%。
       
       日间精密度：精密吸取1.0 ml浓度为46.015，368.12，920.3 mg/L青藤碱标准贮备液，移入带塞刻度试管中，按“2.1.3”项下操作（自“于40～50℃水浴蒸干甲醇……精密加入甲醇9 ml”），配置的3个浓度连续5天分别进样5次，测定峰面积，计算得RSD分别为0.6%,2.8%,1.7%。
       2.1.5  测定精密度精密称取6个样品，按“2.1.3”项下操作（自“于40～50℃水浴蒸干甲醇……精密加入甲醇9 ml”），分别进样，计算含量RSD为0.6%。
       2.1.6  回收率测定精密吸取6.5 ml储备液，2.5，5.0 ml贮备液各3份，于40～50℃水浴蒸干甲醇，加少量生理盐水，转移至10 ml量瓶，加1 g辅料，滴加氨水至碱性，加生理盐水至刻度，混匀，静置；取上清液1 ml，加甲醇于10 ml量瓶定容,混匀，静置，微孔滤膜滤过，取续滤液进样10 μl。计算平均回收率分别为101.4%，99.88%，99.12%，RSD分别为0.3%，0.8%，0.7%。
       2.2  盐酸青藤碱外用散的溶出测定透过率的测定采用透皮吸收扩散装置，该装置由上下两个筒状玻璃管对合而成，夹于玻璃管间的皮肤将其分为上下两室。上下两室为扩散室和接受室，在接受室的底部连有一个取样管，供取样、补充接受液和排除气泡用，接受室直径0.9 cm，渗透面积为0.635 85 cm2，实验中以磁力搅拌器维持接受室的动态环境，恒温水浴维持体温环境。实验时，取0.15 g样品精密称取，散在加在处理好的大鼠皮肤的扩散室上，压实，使药粉与皮肤紧密接触。放有在磁子的接受室中注入5.0 ml接受液，液面恰与皮肤接触无气泡，开动磁力搅拌器200 r/min和恒温水浴37℃，进行24 h检测，分别在2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h取样2.0 ml，取样后补加相同体积的新鲜接受液并排除接受室内的气泡。取出的样液，精密吸取1.0 ml，加氨水至碱性，用甲醇于10 ml量瓶中定容，混匀，静置。吸取上清液，以0.22 μm滤膜滤过,进样10 μl，根据峰面积计算样品中盐酸青藤碱的含量C。
       
       公式1 ：Q=（Cn×5+ Σn-1i=1Ci×2）/A
       
       公式2 ：q=（Cn×5+  Σn-1i=1Ci×2）×100%M
       
       公式中Cn：第n个取样点测得的药物浓度（mg/ml）；Ci：第i个取样点测得的药物浓度(mg/ml)；A：渗透面积（cm2）.以累计释药量Q对时间T1/2进行线形回归所得方程即为Higuchi方程，所得斜率k即为透皮速率常数J μg/（cm2·h）,q：透过率； M：称取量里的理论含药量。实验测得盐酸青藤碱外敷散体外释放百分率曲线，Q- T1/2曲线分别见图1～2。
       
       从各曲线可以看出，此制剂体外释药随时间而递增。在体外释放初期速率恒定，释放中期（8 h＜T＜12 h）则随时间释放速率减小，释放后期（T＞12 h）随时间增加释放速率变化不大。在12 h内符合Higuchi方程，此方程为Q=3.082 6 T1/2-2.147 9，r=0.982，说明本制剂在释放初中期属控释型TDD系统，随时间增加从12 h开始释药趋于平稳状态。3  讨论
       
       目前，盐酸青藤碱的体外给药制剂已有贴片、凝胶剂在研究，本品为外敷散剂，是盐酸青藤碱的新型体外给药制剂，既继承并发扬了中国传统制剂的优点，又改善了传统制剂的不足，制法简单，宜大量生产，定剂量分装，贴于皮肤使用方便。
       图1  37℃ 以生理盐水为接受液E 透过总量- T1/224 h监测曲线（略）
       图2  37℃ 以生理盐水为接受液E Q- T1/2 24  h监测曲线（略）
       
       本实验借助于体外透皮实验来测定药物的释放，用体外透皮吸收实验仪模拟体外环境，以生理盐水模拟体液，药物所处环境与其透皮吸收环境较为相似，能较真实反映药物的释放规律，且操作方便、简单。
       
       透皮吸收实验仪的扩散室和接受室的半径为0.9 cm，渗透面积为0.635 85 cm2，根据制剂的质量与面积的比例确定上药量为0.15 g。
       
       本实验监测并绘制了24 h的释药曲线，较为理想地反映药物的释放规律。
       【参考文献】
         　　［1］ 天 昕，李建春，孙宏伟. 中药透皮吸收研究述要［J］.中医药学刊，2003，21（11）：1862.
       
       ［2］ 李卫敏，车晓平. 促进药物透皮吸收的概述［J］.继续医学教育，2005，19（7）：70.
       
       ［3］ 周莉玲，刘 强，李 锐.青藤碱贴片释放度测定研究［J］.中成药,1999,21(6)：279.