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       【摘要】 
       目的考察关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化。方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测。色谱条件：色谱柱为Lichrospher-C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(70∶30)，流速1.0 ml/min,检测波长310 nm，柱温为30℃。结果炒焦、滑石粉炒、麸炒3种炮制品中的马兜铃酸A含量均较生品有所降低,并且滑石粉炒后的炮制品降低率最高。结论这3种炮制方法能够降低关木通中马兜铃酸A的含量，达到了降低毒性的目的。
       【关键词】  关木通 炮制品 马兜铃酸A
       关木通为马兜铃科植物东北马兜铃Aristolochia manshuriensis Kom.的干燥藤茎，主要含马兜铃酸类化合物。近年来，关于马兜铃酸引起肾损害的报道较多，称之为马兜铃酸肾病［1］。虽然含马兜铃酸的中药肾毒性是确定无疑的，但同时该类中药使用历史悠久，疗效确切，临床使用广泛，如果因噎废食，采取一刀切的办法，全部取消含马兜铃酸中药在临床上的使用，既不可能，也不现实。中药的应用是以传统炮制和复方配伍为特色的。关于关木通的复方配伍降低毒性的研究目前有很多，但是用传统炮制方法是否能降低其毒性尚未见系统研究报道。为降低毒性，本实验以炒焦、滑石粉炒和麦麸炒这3种方法对关木通进行处理［2］，并采用HPLC法测定了关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量，定量分析关木通炮制前后其马兜铃酸A的含量变化，从一个侧面探讨中药炮制理论的依据。
       1  仪器与试药
       
       日本岛津LC-10ADVP高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP紫外检测器，HW色谱工作站。甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯。马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定所，批号110746-200406)；关木通药材经南京中医药大学药学院生药教研室王春根教授鉴定。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件　采用Lichrospher-C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）,流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(70∶30)；流速1.0 ml/min；检测波长310 nm；柱温为30℃；进样20 μl。色谱图见图1～2。
       图1马兜铃酸A对照品的HPLC图（略）   
       图2关木通药材的HPLC图（略）
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  供试品及炮制品的制备 取关木通原药材，除去杂质，过40目筛。
       
       炒焦：称取关木通饮片100.0 g，置炒制容器内，用中火加热，炒至表面焦黄或焦褐色，断面深黄色，有香气逸出，取出，晾凉，装至密封袋封口。
       
       滑石粉炒：称取关木通饮片50.0 g，滑石粉20.0 g。先将滑石粉至热锅内，用中火加热炒至灵活状态时，投入关木通饮片，不断翻炒，炒至饮片表面颜色加深时，取出，筛去滑石粉，晾凉，装至密封袋封口。
       
       麸炒：称取关木通饮片100.0 g，麦麸10.0 g。先将锅烧热，撒入麦麸，用中火加热，待冒烟时投入关木通饮片，不断翻炒，炒至深黄色时，取出，筛去麦麸，晾凉，装至密封袋封口。
       2.2.2  对照品溶液的制备  精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的马兜铃酸A对照品适量，加甲醇溶解，制成每毫升含1.025 mg的溶液，作为母液。精密吸取1.025 mg/ml的母液4 ml，加甲醇定容至50 ml的量瓶，得0.082 mg/ml的对照品溶液，备用。
       2.2.3  供试品溶液的制备   精密称取关木通样品粉末2 g，置圆底烧瓶中，加入甲醇30 ml/20 ml，水浴加热回流提取2次，第1次2 h，第2次1 h，滤过,合并滤液，回收甲醇后，定容至25 ml量瓶中；取1 ml并定容至10 ml量瓶中，即作为药材供试品溶液。按该法制得“2.2.1”项下3种炮制品的供试品溶液。每种供试品均按此法做3份。
       2.3  线性关系考察  精密吸取浓度为0.082 mg/ml的对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml，甲醇稀定容释至10 ml。在上述色谱条件下进样20 μl进行测定。以浓度C（μg/ml）为横坐标，以马兜铃酸A平均峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程，C=4×10-5Y-0.466 5，r=0.999 8，线性范围是8.2～49.2 μg，结果表明马兜铃酸A在8.2～49.2 μg范围内线性关系良好。
       2.4  精密度实验  精密吸取浓度为24.6 μg/ml的对照品溶液20 μl，连续进样5次，测得马兜铃酸A峰面积值的RSD为1.11%,结果表明精密度良好。
       2.5  稳定性实验  精密吸取同一份药材供试液20 μl，分别于0，3，6，9，12，15 h进样，记录峰面积,其RSD为1.15%，结果表明在15 h内基本稳定。
       
       2.6  重复性实验  精密称取同一批关木通药材2 g,共5份，用与“2.2.3”项下相同的方法制得供试液，测得的马兜铃酸A的含量RSD=2.80%，结果表明重复性良好。
       2.7  加样回收率实验  精密称取已知含量的关木通药材1 g，共6份，分别置圆底烧瓶中，各精密加入一定量的马兜铃酸A对照，用与“2.2.3”项下相同的方法制得供试液。结果见表1。
       表1  马兜铃酸A加样回收率实验结果（略）
       2.8  药材及炮制品的测定精密吸取各供试液20 μl，注入液相色谱仪，各进3针，样品色谱图见附图用外标一点法计算含量（见表2）。由关木通生药材和炮制品含量测定结果计算，生药材与各炮制品之间马兜铃酸A含量有显著性差异(P<0.01)。
       表2  关木通原药材及炮制品中马兜铃酸A的含量（略）
       3  讨论
       
       稳定性实验结果表明，供试品溶液立即测定与放置24 h后测定的相对标准差在测定误差范围内，供试液在24 h内是稳定的。
       
       马兜铃酸是3，4-次甲二氧基-10-硝基-1-菲酸的衍生物，具有羧基［3］。本实验供试品图谱中主成分峰前有一杂质峰，最初采用甲醇-水作为流动相，结果峰形对称性不好，峰形宽，理论塔板数低，分离度达不到1.5以上，同一份样品多次进样重复性和稳定性差，加入冰醋酸后，分离度达到1.7，峰形可以得到改善，样品重复性好，稳定性好，随着甲醇的比例增大，保留时间缩短。本法简单，准确，快捷，可作为关木通药材中马兜铃酸A的含量测定方法。
       
       关木通在中国有悠久的用药历史和坚实的临床基础,常配伍使用,几乎不单独应用。本实验中考察了关木通炮制前、后马兜铃酸A煎出量的变化,结果表明,炮制后马兜铃酸A的煎出量较炮制前关木通药材明显降低,从一个侧面说明了通过炮制降低关木通毒性的合理性。另外,这3种炮制方法均是以药化的角度来考虑的，但是药理上是否一致，还需要进一步的实验研究。
       【参考文献】
         　［1］ 蒋 晔，郝 福. HPLC测定关木通配伍前后马兜铃酸A煎出量的变化［J］.华西药学杂志,2007，22(1)：93.
       
       ［2］ 龚千锋.中药炮制学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：307.
       
       ［3］ 赵 辉，张建夫.马兜铃酸的结构分析和性质研究［J］.周口师范学院学报，2003，20(2)：34.