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       【摘要】 
       目的建立HPLC法测定9个不同厂家的市售抗骨增生丸中淫羊藿苷的含量，探讨可能影响抗骨增生丸产品质量的因素。方法HPLC法测定。色谱柱为Alltima C18(5 μm, 250 mm × 4.6 mm)；流动相为乙腈²水(30∶70)；检测波长270 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温：30℃。结果淫羊藿苷色谱峰分离度良好，系统适应性试验和方法学考察结果符合《中国药典》要求，市售抗骨增生丸中淫羊藿苷的含量差异较大。结论淫羊藿药材和抗骨增生丸的制备工艺对其质量具有重大影响，建议新版《中国药典》对其进行一定的控制，切实保障临床用药的合理性和安全性。
       【关键词】  抗骨增生丸 淫羊藿苷 质量控制
       抗骨增生丸作为国家基本医疗保险药品目录收载品种，是由淫羊藿、熟地、狗脊等9味中药制成的蜜丸，具有补腰肾、强筋骨、活血、利气、止痛等作用，临床广泛用于增生性脊椎炎（肥大性胸椎、腰椎炎），颈椎综合症，骨刺等骨质增生症。该品种执行标准原为中药部颁标准（编号：WS3-B-0084-89），现已收载于《中国药典》（2005年版一部）［1］。目前，国家食品药品监督管理局共批准全国18个企业生产该产品，但无论原部颁标准还是《中国药典》均无其定量标准，本文即针对这一情况，测定了9个厂家的市售产品中代表性活性成分——淫羊藿苷的含量，探讨可能影响抗骨增生丸产品质量的因素，以期为国家药品质量制定及监管部门和广大药品生产企业提供参考。
       1  仪器与试药
       
       Agilent/HP 1100型高效液相色谱仪；Sartorius CP224S电子天平（1/100000）；SB5200超声波器（上海必能信超声有限公司）。
       
       淫羊藿苷对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110737-200414）；抗骨增生丸样品分别为河北冀衡(集团)药业有限公司、广西梧州制药(集团)股份有限公司、通化嘉丰药业股份有限公司、吉林紫鑫药业股份有限公司、海人生药业集团股份有限公司、天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂、山东临清华威药业有限公司、齐齐哈尔参鸽药业有限公司和太极集团重庆中药二厂等生产的市售产品；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件及其系统适应性试验
       2.1.1  色谱条件色谱柱为Alltima C18 (5 μm, 250 mm × 4.6 mm)；流动相为乙腈－水(30∶70)；检测波长270 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温：30℃。
       2.1.2  系统适应性试验在上述色谱条件下，各样品分离良好，理论板数不小于3 000，分离度不低于1.5，淫羊藿苷峰峰形对称。结果见图1～2。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液取在50℃减压干燥至恒重的淫羊藿苷对照品13 mg，精密称定，用甲醇溶解并定容至25 ml量瓶中，即得。
       2.2.2  供试品溶液取本品20 g, 研细，取2 g，精密称定，加甲醇50 ml，超声提取30 min，过滤，滤渣重复提取1次，用约5 ml甲醇洗涤滤渣及滤纸，合并滤液，通氮气浓缩至小体积，加甲醇并定容至10 ml量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过即得。
       2.3  方法学考察
       2.3.1  线性关系考察精密吸取对照品溶液一定体积分别加甲醇稀释1，20，50，80，100倍，摇匀，分别精密进样10 μl，测定，结果对照品峰面积Y与其进样量X (μg)之间呈良好的线性关系，线性范围为：0.0513 0 ～ 5.130 μg，回归方程为：Y=2 357X–18，r=0.999 9。
       图1  淫羊藿苷对照品色谱图（略）
       图2  供试品色谱图（略）
       2.3.2  精密度实验 将对照品溶液连续进样5次，10 μl/次，记录峰面积，RSD为0.21%。
       2.3.3  稳定性实验取供试品溶液分别在0，8，16，32，48 h进样，10 μl/次，记录峰面积，RSD为0.3%，表明供试品溶液在48 h内稳定。
       2.3.4  重复性实验取同一批样品2 g，5份，精密称定，按样品测定法测定，结果样品中淫羊藿苷平均含量(n=5)为0.42 mg/g；RSD为2.2%。
       2.3.5  回收率实验取已知含量的同一批样品1 g，9份，精密称定，分别精密加入样品含量80%，100%，120%的淫羊藿苷对照品，按样品测定法测定，平均回收率(n=9)为98.1%，RSD为1.8%。结果见表1。
       表1  加样回收试验结果（略）
       2.4  样品测定以“2.3.1”项下对照品溶液作为对照品溶液；照“2.2.2”项方法制备供试品溶液。分别吸取上述2种溶液各10 μl注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，以外标法计算样品中淫羊藿苷的含量，色谱图见图1～2，平行测定两次。结果见表2。
       表2  市售抗骨增生丸淫羊藿苷含量（略）
       3  讨论
       
       由上可见市售抗骨增生丸中活性成分淫羊藿苷的含量差别相当大。查阅文献，笔者认为其原因首先与药材有很大关系。淫羊藿药材来源为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying、或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分。《中国药典》规定其淫羊藿苷含量不低于0.5%［1］，但近年来屡有制药企业、药检部门、研发部门反映淫羊藿药材达不到此标准。王治平等［2］对广州地区几种市售淫羊藿药材的质量分析结果表明淫羊藿苷的含量为0. 051% ～ 0. 320%，各样品之间的含量相差较大，其中多数品种的淫羊藿苷含量明显低于《中国药典》标准；其他很多文献也表明淫羊藿药材的质量差别较大，如董然等［3］研究发现朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量高达6.006%，而X.J. Chen等［4］研究发现即使是同一个种的药材产地不同其淫羊藿苷含量差距也非常大，如四川采集的箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim.的含量为1.258%，但安徽采集的样品则在检测限以下。中药淫羊藿是品种来源最复杂的药材之一，其品质与产地及其种属有很大关系，因此郭宝林等［5］建议对全国的淫羊藿药材生产和收购进行分区，利于药材质量控制；贾敏鸽等［6］也建议新版《中国药典》调整淫羊藿的收载品种与含量测定项目。国家标准与现实情况之间的巨大差距很可能导致部分制药企业在投料时使用了含量不合格的药材，从而造成了市售药品质量较大的差别。
       
       抗骨增生丸的生产工艺对其质量也有很大的影响。《中国药典》规定其制法是“取狗脊、三分之二熟地黄，二分之一淫羊藿粉碎成细粉，过筛，其余的熟地黄，淫羊藿与莱菔子等6味加水煎煮二次，合并煎液滤过，滤液浓缩成稠膏状，与上述细粉拌匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀”［1］。该生产工艺极其粗略，留给各制药企业很大的操作空间。一些非常重要的参数，诸如煎煮时间与水用量、煎煮液浓缩温度以及干燥温度等，均未作出详细的规定，而事实上，陈彦等［7］研究发现温度和受热时间是影响淫羊藿苷含量的两个关键因素，淫羊藿药材无论在加工炮制过程还是经提取浓缩制备成制剂，都有加热的过程，淫羊藿苷的含量会随着温度和时间的增大而显著增加，可能存在黄酮苷类成分之间的相互转化，这些成分之间的相互转化改变了淫羊藿提取物中各组分的相对比例。
       
       按照现行国家标准，以上9个市售的抗骨增生丸均为合格产品，但其仅淫羊藿苷含量差别一项就非常大，这一差别对组分胃肠吸收代谢动力学的意义、体内药动学的影响及药效作用等，均值得进一步探讨。鉴于原料药材及其制备工艺等方面的因素，导致抗骨增生丸的质量参差不齐，建议新版《中国药典》对其进行一定的控制，切实保障临床用药的合理性和安全性。同时，本文也为已有国家标准的药品如何进一步控制并规范其质量提供了可行性参考。
       【参考文献】
         　［1］ 国家药典委员会．中国药典,Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2005：470．
       
       ［2］ 王治平，樊 化，杨 珂，等．广州地区几种市售淫羊藿药材的质量分析［J］．时珍国医国药, 2005, 16(11): 1075．
       
       ［3］ 董 然，冯玉才，秦佳梅，等．长白山区不同产地朝鲜淫羊藿有效成分含量对比分析［J］．特产研究，2003，2：35．
       
       ［4］ X.J. Chen, B.L. Guo, S.P. Li, et al. Simultaneous determination of 15 flavonoids in Epimedium using pressurized liquid extraction and high-performance liquid chromatography ［J］. Journal of Chromatography A, 2007, 1163(1-2):96.
       
       ［5］ 郭宝林，肖培根．中药淫羊藿主要种类评述［J］．中国中药杂志，2003, 28 (4)：303．
       
       ［6］ 贾敏鸽，孙文基，朱朝德，等．RP-HPLC测定淫羊藿不同品种和部位中柔藿苷和淫羊藿苷［J］．药物分析杂志，2005，25(1)：64．
       
       ［7］ 陈 彦，贾晓斌，蔡 垠，等．温度和受热时间—影响淫羊藿苷含量的两个关键因素［J］．中成药，2007，2(7)：1038．