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       【摘要】 
       目的复制实验性家兔动脉粥样硬化（AS）斑块模型，观察麝香银杏叶滴丸对模型家兔AS斑块的影响。方法40只家兔随机分为正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组和麝香银杏叶滴丸高、低剂量组，正常对照组给予普通饲料，其它实验组供给致动脉粥样硬化饲料，喂养45 d。观察麝香银杏叶滴丸对家兔AS斑块的形态学影响，测定MMP9，纤维帽厚度、中心脂质面积、斑块面积和主动脉血管切面中总的斑块数、血栓数。结果麝香银杏叶滴丸能明显降低家兔动脉粥样硬化斑块纤维帽厚度与中心脂质面积比值、中心脂质面积与斑块面积比值，能够减少斑块数和血栓数的发生，主动脉组织中的MMP9与蛋白含量比值亦有降低趋势。结论麝香银杏叶滴丸具有一定的稳定家兔主动脉粥样硬化斑块的作用。
       【关键词】  麝香银杏叶滴丸 动脉粥样硬化斑块 稳定性
       动脉粥样硬化斑块不稳定性与多种参与动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）形成的因素有关。本文采用实验性家兔AS斑块模型，观察了麝香银杏叶滴丸灌胃给药后，对模型家兔AS斑块稳定性的影响，探讨麝香银杏叶滴丸对AS斑块的稳定性作用的研究。现报道如下。
       1  材料
       1.1  动物普通级家兔，雄性，体重2.0～2.5 kg，购于金陵种兔场，合格证号：SCXK（苏）2002-0025；动物饲养环境：本院实验动物中心，清洁级，合格证号：SYXK（苏）2002-007。
       1.2  试药麝香银杏叶滴丸（棕褐色干粉），含生药材2.89 g/g粉，批号：20060622，由江苏省中医药研究院制剂室提供。辛伐他汀 20 mg×14片，批号：060301，宜昌长江药业有限公司。胆固醇,含量93.2%，批号：20060729，淮北市创凯生化原料厂产品。胆酸钠,含量66.5%，批号：20060620，淮北市创凯生化原料厂产品。丙硫氧嘧啶片 50 mg×100片，批号： 0600201，广东华南药业有限公司产品。
       2  方法［1～5］
       2.1  兔动脉粥样硬化模型的制备取雄性健康家兔40只，体重2.0～2.5 kg，随机分为5组，每组8只，分别为正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组和麝香银杏叶滴丸高、低剂量组。正常对照组给予普通饲料，其它实验组供给致动脉粥样硬化饲料（5%猪油，1%胆固醇，10%蛋黄，0.5%胆酸钠，0.2%丙基硫氧嘧啶），每日每只100 g，自由饮水，连续喂养45 d。
       2.2  给药途径和剂量从造模第1天起，按组分别给药。麝香银杏叶滴丸高剂量为1.82 g 生药/kg（此剂量约相当于拟临床人用等效剂量的4倍），低剂量为0.46 g生药/kg，辛伐他汀的剂量为2.5 mg/kg，正常对照组和模型对照组给予等体积的消毒饮用水，将供试药品配成相应浓度后，灌胃给药，各组动物给药量均为5 ml/kg，1次/d，连续给药45 d。
       2.3  组织的采集实验结束前24 h，禁食不禁水，实验当日空气栓塞处死动物，开胸分离从升主动脉直至横膈部的主动脉段，去除外膜的脂肪组织，用生理盐水冲洗干净，截取主动脉弓所在一段约1.0 cm血管环，置于10%福尔马林液中固定，供病理组织学检查切片使用，以观察主动脉斑块的形态学特点。余下血管速冻后于-70℃保存，供测定MMP9使用。
       2.4  主动脉斑块染色将10%福尔马林液固定的约1.0 cm主动脉血管环脱水，常规石腊包埋切片，把主动脉血管4等分，每个等分主动脉血管切面取连续的两张切片分别进行HE染色和MASSON染色。通过计算机图像分析仪进行分析，选取4个等分主动脉血管切面中最大的一个斑块，测量纤维帽厚度、中心脂质面积、斑块面积，计算纤维帽厚度/中心脂质面积的比值、中心脂质面积/斑块面积(%)的比值；测定四个等分主动脉血管切面中总的斑块数、血栓数。
       2.5  结果统计以±s表示，统计学处理均采用等方差假设t-检验，各组结果均与模型对照组进行比较。
       3  结果
       3.1  麝香银杏叶滴丸对家兔主动脉粥样硬化不稳定斑块的形态学的影响
       3.1.1  麝香银杏叶滴丸对家兔主动脉粥样硬化不稳定斑块的病理结构变化的影响病理组织学检查结果提示，模型组家兔主动脉内膜形成典型的主动脉粥样硬化斑块。MASSON染色可见斑块内大量胆固醇结晶和泡沫细胞，纤维帽厚度较薄，纤维组织少，呈蓝色，有大量结缔组织增生，部分标本可见斑块内有钙盐沉积，显示斑块不稳定。麝香银杏叶滴丸高、低剂量组、辛伐他汀组的上述病理改变的程度均轻于模型组，提示本品可能对家兔主动脉粥样硬化斑块有一定的稳定作用。
       3.1.2  麝香银杏叶滴丸对家兔主动脉粥样硬化不稳定斑块的纤维帽厚度/中心脂质面积比值的影响结果见表1。
       表1  麝香银杏叶滴丸对纤维帽厚度/中心脂质面积比值的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05；n=8
       
       麝香银杏叶滴丸高剂量组和辛伐他汀组，与模型组比较，维帽厚度/中心脂质面积比值明显升高，有显著性统计学差异（P<0.05）；麝香银杏叶滴丸低剂量组仅有一定的升高趋势。
       3.1.3  麝香银杏叶滴丸对家兔主动脉粥样硬化不稳定斑块的斑块数、血栓数的影响结果见表2。
       表2  麝香银杏叶滴丸对斑块数、血栓数的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05；n=8
       
       麝香银杏叶滴丸高、低剂量组和辛伐他汀组4个等分主动脉血管切面中总的斑块数，与模型组比较明显减少，有显著性统计学差异（P<0.05）。
       
       麝香银杏叶滴丸高剂量组和辛伐他汀组4个等分主动脉血管切面中总的血栓数，与模型组比较也有明显减少（P<0.05）。麝香银杏叶滴丸低剂量组血栓数，与模型组比较，发生率较低，但无显著性统计学差异（P﹥0.05）。
       
       结果表明，麝香银杏叶滴丸能够减少动脉粥样硬化模型家兔的主动脉中斑块数和血栓数的形成。
       3.1.4  麝香银杏叶滴丸对家兔主动脉粥样硬化斑块的中心脂质面积/斑块面积的抑制作用结果见表3。
       
       辛伐他汀组的中心脂质面积/斑块面积比值，与模型组比较有显著差异(P<0.05)，麝香银杏叶滴丸高、低剂量组仅有降低趋势。提示麝香银杏叶滴丸抑制家兔主动脉粥样硬化斑块的形成不及辛伐他汀的作用明显。
       3.2  麝香银杏叶滴丸对动脉粥样硬化模型家兔主动脉组织匀浆MMP9浓度/组织匀浆蛋白浓度的比值影响结果见表4。
       表3  麝香银杏叶滴丸对中心脂质面积/斑块面积的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05；n=8
       表4  麝香银杏叶滴丸对模型家兔MMP9与蛋白含量比值的影响（略）
       与模型对照组比较， **P<0.01；n=8
       
       由表4可见，模型对照组MMP9与蛋白含量的比值，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)，而麝香银杏叶滴丸高、低剂量组、辛伐他汀组，与模型对照组比较仅有降低的趋势，无显著性差异（P>0.05）。结果表明，麝香银杏叶滴丸有一定的降低主动脉组织匀浆MMP9/蛋白含量比值的作用趋势，其作用强度可能与给药时间的长短、给药剂量的大小有关，这有待进一步探讨。
       4  讨论
       
       急性心肌梗塞是由狭窄的冠脉病变引起，急性冠脉综合征的发生与冠状动脉狭窄程度无关，而与斑块的稳定性的继发血栓形成密切相关。炎症在不稳定斑块的发生、演变及破裂过程中起重要的作用，斑块的炎性细胞及炎性产物对粥样斑块脂质中心的扩大，纤维组织完整性的破坏及细胞外基质的降解均有明显的影响，可造成斑块的不稳定破裂。
       
       目前研究认为绝大多数急性冠脉综合征的发生是不稳定斑块出现裂缝、糜烂或破裂的基础上，血管内血栓闭塞、致心肌急性缺血。破裂斑块及附壁血栓在其后的血管重塑过程中，可自行修复或加重血管狭窄。斑块的生物特性是决定其稳定性的主要因素［6］。检出和稳定冠状动脉不稳定斑块将有助于降低冠心病的死亡率和致残率。
       
       麝香银杏叶滴丸是以麝香、水蛭、银杏叶组成的复方制剂。方中麝香性味辛温、功效开窍、通络、散淤；水蛭性味咸苦、平、有毒，功效破血逐淤。麝香和水蛭共为君药，通络祛淤，佐以银杏叶性味甘苦、涩平、益心敛肺，调理气机，得以活血通络止痛［7］。家兔对外源性胆固醇摄取率高，对高血脂的清除能力低，能形成明显的动脉粥样硬化斑块模型。本文以高胆固醇混合饲料复制了该模型，观察了其对家兔动脉粥硬化斑块稳定性的影响。
       
       家兔主动脉粥样硬化不稳定斑块的形态学显示，模型组家兔主动脉内膜形成典型的主动脉硬化斑块沉积。MASSON染色可见斑块内大量胆固醇结晶和泡沫细胞，纤维帽厚度较薄，纤维组织少，呈蓝色，有大量结缔组织增生，部分标本可见斑块内有钙盐沉积，显示斑块呈不稳定状态。麝香银杏叶滴丸高、低剂量组家兔的上述组织学改变均轻于模型组。高剂量能明显降低家兔动脉粥样硬化斑块纤维帽厚度与中心脂质面积比值、中心脂质面积与斑块面积比值，能够减少斑块数和血栓数的发生，另主动脉组织中的MMP9与蛋白含量比值有降低趋势，以上结果提示本品具有一定的稳定家兔主动脉粥样硬化斑块的作用。
       
       血脂异常是动脉粥样硬化的重要危险因素，已有研究证实，血清低密度脂蛋白升高，尤其是氧化型低密度脂蛋白，可以使斑块局部的基质金属蛋白酶（MMP9）分泌增加，导致斑块不稳定，而降低低密度脂蛋白治疗本身就可以改善病变血管重构，降低斑块内部的MMP9［3］。本实验研究结果表明，麝香银杏叶滴丸可以通过降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白以及超敏C反应蛋白（另外发表），降低主动脉斑块内部的MMP9，从而改善病变血管重构，抑制动脉粥样硬化的进展，以达到稳定斑块的目的。
       【参考文献】
         　［1］ 杨晓云，王 琳，曾和松，等.辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块中核因子kB-DNA结合活性和基质金属蛋白酶1及3表达的影响［J］.中国动脉硬化杂志，2006，14(4)：277.
       
       ［2］ 谢江娇，程 翔，廖玉华，等.兔动脉粥样硬化斑块内IL-8表达的动态变化［J］.中国分子心脏病学杂志，2005，5(6):773.
       
       ［3］ 李天奇，李 勇，范维琥.麝香保心丸和辛伐他汀对兔股动脉粥样硬化斑块稳定性的影响［J］.中华老年心脑血管病杂志，2006，8(5)：296.
       
       ［4］ 秦 玲，张家颖，王晔玲，等.阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块的抑制作用［J］.中国微循环，2006，10(1)：18.
       
       ［5］ 李朝辉，王 丽，唐 兰，等.兔主动脉粥样硬化斑块组织中ApoE的表达［J］.郑州大学学报，2006，41(2)：339.
       
       ［6］ Shah PK.New insights into the pathogenesis and prevention of acute coronary syndromes［J］. AM J Cardiol,1997,79：17.
       
       ［7］ 江苏新医学院.中医大辞典，第1版［M］.上海：上海人民出版社，1977：517.