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       【摘要】 
       目的优化芩连滴丸的最佳提取工艺。方法采用正交实验设计方法，以黄芩苷含量为评价指标，采用高效液相色谱法测定提取物中黄芩苷含量，对提取工艺中的提取方法和溶媒种类进行优化。结果最佳提取工艺为在药材中加入12倍量60%乙醇浸泡60 min，回流提取2次，每次60 min。结论该滴丸的提取工艺简便、合理可行。
       【关键词】  芩连滴丸 正交设计 提取工艺 黄芩苷 高效液相色谱
       芩连滴丸处方源于《中国药典》2005年版Ⅰ部芩连片。处方组成为黄芩213 g，连翘213 g，黄连85 g，黄柏340 g，赤芍213 g，甘草85 g，具有清热解毒，消肿止痛之功效。主治脏腑蕴热，头痛目赤，口鼻生疮，热痢腹痛，湿热带下，疮疖肿痛等症［1］。滴丸是固体分散体，药物在滴丸中高度分散，与片剂服用量大，崩解度差，药物奏效缓慢相比，具有表面积大，溶出速率快，生物利用度高等特点。本实验采用正交实验设计，以黄芩中的主要有效成分黄芩苷含量作为评价指标，优化芩连滴丸的提取工艺，为开发出溶出速率快，生物利用度高的新型制剂提供依据。
       1   仪器与材料
       
       Agilent 1100高效液相色谱仪、DAD检测器、四元泵、Agilent 1100工作站；Bp211D电子分析天平（德国，sartorius）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DZF-6050真空干燥箱（上海博迅实业有限公司）。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200514）；中药材（天津市中药饮片厂）；95%食用乙醇（天津市津酒集团）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
       2   方法与结果
       2.1   正交实验设计  选用L9(34)正交表进行实验，以黄芩苷含量为评价指标，采用高效液相色谱法测定提取物中黄芩苷含量。所确定的因素水平（拟水平）见表1。
       表1  因素水平（略）
       2.2   黄芩苷含量测定方法
       2.2.1   色谱条件［1］色谱柱：依利特C18 (4.6 mm × 200 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)；流速：1.0 ml·min-1 ;柱温：30℃；检测波长：277 nm。
       2.2.2   线性关系  精密称取黄芩苷对照品9.80 mg置25 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.6，2.4，3.2 ml，分别加入到5 ml容量瓶中，用甲醇稀释定容。按上述色谱条件，分别精密吸取10 μl进样，测定峰面积积分值（见图1）。以对照品溶液浓度X（mg·ml-1）为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，建立回归方程为：Y＝31 281X－165.66 (r＝0.999 3)，线性范围为0.016～0.251 mg·ml-1。
       图1  黄芩苷对照品HPLC图谱（略）
       2.3   实验方法及结果  称取黄芩、连翘、黄柏、赤芍、黄连和甘草，混合后用溶媒浸泡60 min，然后按设计方案进行提取。提取液过滤，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥至干膏，粉碎成细粉。精密称取提取物细粉适量置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，用0.45 μｍ微孔滤膜过滤制备成提取物测定液。精密吸取各提取物测定液10 μl，按上述色谱条件依次进样，测得黄芩苷峰面积积分值（见图2），并计算出各提取物中黄芩苷的含量。见表2。
       2.4   结果分析
       2.4.1    极差分析  由表2中的R值可知，提取方法是影响黄芩苷含量的主要因素，溶媒种类、提取次数和溶媒用量次之。
       2.4.2   方差分析  采用SAS统计软件对正交实验结果进行方差分析（见表3），结果，因素A对提取物中黄芩苷含量的影响有显著性。结合表2中的数据及根据低耗高效的原则，确定芩连滴丸最佳提取工艺条件为A2B2C3D3，即采用回流提取方法，加入12倍量60%乙醇浸泡60 min，回流提取2次，60 min/次。
       图2  提取物HPLC图谱（略）
       表2  实验结果（略）
       表3  黄芩苷含量方差分析（略）
       3  讨论
       
       在进行提取工艺条件考察时，采用了60%，30%乙醇和水作为溶媒进行提取。结果表明，3种溶媒的提取结果无显著性差异。考虑到用水和30%乙醇提取后提取液中含杂质较多，需再用乙醇进行醇沉除杂，而用60%乙醇作溶媒进行提取，提取液经过滤、回收乙醇后再浓缩即可。与水提比较，方便、快速，故本实验采用60%乙醇作为提取溶媒。另外，提取液在回收乙醇后黄芩苷产生水不溶性沉淀，为了避免黄芩苷成分的损失，未将经回收乙醇后的提取液过滤（曾采用HPLC法同时测定了过滤后滤液和滤饼中的黄芩苷含量，发现滤饼中黄芩苷的含量也较高）。但是，可能会出现增加服药量的问题，怎样在保持药效的情况下，对提取液进行纯化以降低服药量有待作进一步的研究。
       
       参照《中国药典》2005年版(Ⅰ部)黄芩中黄芩苷含量测定和芩连片中黄芩苷含量测定项下的方法，对不同流动相进行了实验，如甲醇- 水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）等溶剂系统。通过实验，流动相选用甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1），黄芩苷具有较好的峰型和相对合理的保留时间和分离度。
       【参考文献】
         　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:464.