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       【摘要】 
       目的研究脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法采用结扎双侧颈总动脉制作不完全脑缺血损伤大鼠模型，连续给药30 d后，进行血液流变学、脑组织丙二醛（MDA）与一氧化氮（NO）的含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力的检测，并观察海马神经元、神经胶质细胞与微血管内皮细胞超微结构的变化。结果与假手术组比较，不完全脑缺血损伤大鼠全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数明显升高，脑内MDA、NO含量明显升高，SOD活力明显下降，海马神经元、神经胶质细胞与血管超微结构发生明显改变。脑力智宝能显著降低全血高切黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数、脑组织内MDA、NO含量，提高SOD活力，并明显改善海马神经元、神经胶质细胞与血管超微结构的损伤。结论脑力智宝对脑缺血损伤具有保护作用，其作用机制可能与其促进血液循环，改善血液流变性，减轻自由基损伤，从而改善脑组织的超微结构有关。
       【关键词】  脑力智宝 脑缺血 超微结构 血液流变学 自由基
       脑力智宝主要由当归、红花、远志、石菖蒲、黄精、益智仁、龟甲、枸杞子等组成，用于治疗精神发育迟滞、脑瘫、癫痫、脑血管病后遗症、脑外伤后遗症、脑炎后遗症、老年性痴呆等脑病伴发的智力和肢体功能障碍，具有一定的疗效。临床研究表明脑力智宝能明显改善脑梗塞后遗症患者运动、语言及精神方面的症状［1］。本实验观察了脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠的保护作用，旨在阐明脑力智宝用于治疗脑缺血损伤性疾病后遗症的机理。
       1  材料与仪器
       1.1  动物与分组  Wistar大鼠，体重220～250 g，雌雄各半，广州中医药大学实验动物中心提供。
       1.2  药物  脑力智宝由广东高明脑病医疗医药研究院提供，制备成1 g生药/ml供试液，灌胃前按所需浓度稀释。尼莫地平（nimodipine, Nim）片剂，德国拜耳公司产品，批号CAGFT3。
       1.3  试剂与仪器 丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）与总蛋白试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；LBY-NM微量血浆粘度计，LBY-N6A型旋转式血液粘度计，北京普利生精密仪器研究中心产品；JEM-1200EX透射电子显微镜，日本JEOL公司产品。
       2  方法
       2.1  不完全脑缺血损伤模型的制备［2］大鼠经10%乌拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，行颈正中切口，分离双侧颈总动脉，用丝线结扎，缝合皮肤。假手术组大鼠同法分离双侧颈总动脉，但不结扎。
       2.2  分组与给药  将造模成功动物随机分为3组：模型组、尼莫地平组、脑力智宝组，每组8只，雌雄各半。假手术组大鼠8只，雌雄各半。待大鼠苏醒后，尼莫地平组按12 mg/kg灌胃给予尼莫地平混悬液，脑力智宝组按8 g/kg灌胃给予脑力智宝供试液，假手术组和模型组分别给予等容量生理盐水，1次/d，连续30 d。
       2.3  血液流变学及生化指标测定  连续给药30 d后，每组各取6只，眼内眦静脉取血3 ml，进行血液流变学测定。麻醉下处死，快速断头取脑，脑组织用预冷的生理盐水制成1∶10（W/V）的匀浆，3 000 r/min离心10 min，取上清液，依照试剂盒说明书检测SOD活力及MDA、NO及组织蛋白含量。
       2.4  电镜观察  每组剩余的两只大鼠，腹腔注射乌拉坦麻醉后，剪开胸腔，暴露心脏，先以100 ml生理盐水经主动脉冲洗，然后灌注由2%多聚甲醛和2.5%戊二醛组成的4℃ 0.1 mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.4)300 ml，取脑背侧海马CA1区组织1.0 mm×1.0 mm×1.0 mm。常规电镜样品制备程序漂洗、脱水、浸透及环氧树脂包埋，超薄切片后，将切片捞至载网上，干燥后行铅铀双染，透射电镜观察超微结构的改变。每个标本观察神经元、胶质细胞与血管的病理变化，并进行拍摄。
       2.5  统计学方法  实验数据用±s表示，运用统计软件SPSS for windows 11.5 进行单因素方差分析。
       3  结果
       3.1  脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠血液流变学的影响不完全脑缺血损伤大鼠全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数均较假手术组明显升高（P<0.05或P<0.01），红细胞压积则无明显变化。尼莫地平与脑力智宝能显著降低全血高切黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数（P<0.05或P<0.01），对其它指标则影响不显著（P>0.05），结果见表1。
       表1  脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠血液流变学的影响（略）
       与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=6
       3.2  脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠脑组织内MDA、NO含量及SOD活力的影响与假手术组比较，不完全脑缺血损伤大鼠脑内MDA、NO含量明显升高（P<0.01），SOD活力明显下降（P<0.01）；尼莫地平与脑力智宝能显著降低损伤大鼠脑组织内MDA、NO含量（P<0.05或P<0.01），提高SOD活力（P<0.01），结果见表2。
       表2  脑力智宝对不完全脑缺血损伤大鼠脑组织内MDA，NO含量及SOD活力的影响（略）
       与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=6
       3.3  脑力智宝对海马超微结构变化的影响假手术组神经元结构完整、清晰，核大而圆，染色质均匀分布，核仁明显，胞浆内细胞器丰富，结构完整，线粒体无肿胀，嵴清晰可见，粗面内质网表面附着有丰富的核糖体，星形胶质细胞无肿胀，毛细血管无变形，血管内皮细胞无肿胀，血脑屏障紧密联结，血管周围星形胶质细胞足突紧覆于血管基膜表面，神经毡、髓鞘结构和形态正常，可见大量突触，内含丰富的突触小泡。见图1之A1，A2与A3。
       
       模型组神经元大量固缩或肿胀，细胞轮廓模糊，核固缩或溶解坏死，染色质凝集成块状或溶解，异染色质边集，核仁结构紊乱、变形或溶解消失；神经元和胶质细胞核膜及胞膜的连续性破坏，甚至消失；核周围细胞器减少、崩解、消失，线粒体肿胀成空泡状，嵴断裂、溶解消失，粗面内质网增生，表面核糖体脱落，滑面内质网、高尔基体等肿胀呈泡状，溶酶体、脂质颗粒增多；星形胶质细胞肥大，胞突肿胀变形，特别是毛细血管旁的星形细胞足突高度肿胀，核固缩破裂；毛细血管变形，管腔狭窄，基底膜屈曲增厚，内皮细胞肿胀内突、变性，出现空泡变化，血脑屏障连续性破坏；神经毡水肿，大片空化，轴浆内微管解聚呈絮状，髓鞘板层松散，分层变形，突触减少，膜结构严重破坏，突触小泡明显减少。见图1之B1，B2与B3。
       
       尼莫地平组神经元仍有部分核膜内陷，少量染色质凝集，核周部分内质网及高尔基氏体肿胀，线粒体虽未见空泡样变化，但嵴断裂仍存在。见图1之C1，C2与C3。脑力智宝组海马超微结构基本正常，多数神经元及胶质细胞未见不可逆性损害，毛细血管痉挛缓解，管腔扩张，内皮细胞基底膜正常，神经毡无明显水肿，髓鞘结构基本正常，突触增多，膜结构基本正常。见图1之D1，D2与D3。
       4  讨论
       
       脑缺血损伤的机制与细胞间液兴奋性氨基酸浓度升高、N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDA）激活、一氧化氮合酶（NOS）过度表达、一氧化氮（NO）生成过多、自由基大量产生以及细胞内Ca2+超载等因素有关。在脑缺血时，自由基生成增加，防御机制活性降低，自由基作用于多价不饱和脂肪酸，发生氧化反应，诱导DNA、RNA、蛋白质的交联和氧化反应，促使多糖分子聚合，从而损伤脑组织，出现结构及功能的改变［3］。脑缺血时大量的NMDA受体激活，细胞内钙增多，Ca2+与钙调蛋白（CaM）结合激活NO合酶（NOS），合成大量NO，过量的NO扩散作用于邻近神经元，促进兴奋性氨基酸的释放与自由基的形成，造成神经元坏死和凋亡［4］。
       图1  各组大鼠的海马超微结构（略）
       
       既往研究表明脑力智宝可以通过抗氧化作用、Ca2+拮抗作用、促进Bcl-2蛋白的表达和调节细胞膜的流动性，从而抑制NO诱导的PC12细胞凋亡［5］。在本研究中，不完全脑缺血损伤大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数均较假手术组明显升高，血液处于高度浓、黏、凝、聚状态，血液循环阻力增高，脑微循环障碍，缺血缺氧，加剧脑水肿和继发性脑损害。脑组织内MDA与NO的含量明显升高，SOD活性则明显降低，海马中的神经元、神经胶质细胞与微血管内皮细胞的超微结构均表现出严重的损伤改变。经脑力智宝治疗后，全血高切黏度、血浆黏度、红细胞刚性指数显著降低，MDA与NO含量降至正常水平，SOD活性亦恢复正常，海马的超微结构基本正常。研究结果提示脑力智宝能在脑缺血损伤状态下，改善血液流变性及微循环障碍，并能增强SOD酶活性，减少自由基形成，减轻NO的神经毒性作用，从而抑制脑缺血损伤后脑组织结构与功能的变化。本研究为脑力智宝用于治疗脑缺血损伤性疾病后遗症提供了实验依据。
       【参考文献】
         　　［1］ 瞿 泸. 脑力智宝治疗脑梗死后遗症的疗效观察［J］.昆明医学院学报, 2007, 28 (2B)：51.
       
       ［2］ 李 斌，刘汇波，郭德玉，等. 双侧颈总动脉结扎大鼠行为学观察［J］.中国实验动物学杂志，2000，10(1)：15.
       
       ［3］ Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons［J］. Physiology Review, 1999, 79(4)：1431.
       
       ［4］ Pacher P, Beckman JS, Liaudet L. Nitric Oxide and Peroxynitrite in Health and Disease［J］.Physiology Review, 2007, 87(1)：315.
       
       ［5］ 包金风，李锦明，包金云，等. 脑力智宝及其含药血清对硝普钠诱导的PC12细胞凋亡的影响［J］.中国中西医结合杂志，2005， 25(S1)：12.