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       【摘要】 
       目的比较不同提取方法对洋葱中多糖的提取效果。方法采用热水浸提法、微波辅助冻融法和超声波法从新鲜洋葱和洋葱皮中提取多糖，用DNS法测定多糖含量。结果以葡萄糖为标准品，采用DNS法测定多糖含量是可行的，平均回收率达到了98.5％，RSD为2.65％。不管是新鲜洋葱肉质部分还是洋葱皮干粉，微波辅助冻融法提取的多糖的得率最高，超声波法提取的多糖的含量最高，其中微波辅助冻融法提取洋葱皮中多糖得率为3.58%(含量为63.9%)；肉质部分多糖得率为3.15%（含量为62.0%）。结论微波辅助冻融法是提取洋葱多糖较为合适的方法，该法提取洋葱多糖得率高，且多糖含量也较高。
       【关键词】  洋葱 多糖 微波 超声波
          　Comparison of Different Technology for Polysaccharides Extraction from Onion
        ZHANG Fenglun, WU Suling, SUN Xiaoming, ZHANG Weiming*
        （Nanjing Research Institute for the Comprehensive Utilization of Wild Plants, Nanjing, 210042, China）
        Abstract：ObjectiveTo compare the effects of different extraction methods on extraction of the polysaccharides from onion. MethodsPolysaccharides was extracted from fresh onion and onionskin by hot water leaching method, microwave-assisted freeze thawing method and ultrasonic wave method. The content of polysaccharides was determined by DNS method. ResultsUnder the condition that the glucose was confirmed as standard, it was accurate and feasible to determine the content of polysaccharides in onion by DNS method; the average recovery rate reached 98.5% with RSD of 2.65%. Weather fresh onion or onionskin dry powder, the yield of polysaccharides obtained by microwave-assisted freeze thawing was the most, and the content of polysaccharicle obtained by utrasonic wave was the most. The yield of polysacchalides obtained by microwave-assisted freeze thaucing in onionskin was 3.58% (the content of polysaccharides was 63.9%); and its yield in fleshy parts was 3.15% (the content of polysaccharides was 62.0%). ConclusionMicrowave-assisted freeze thawing method is an appropriate method for extracting polysaccharides from onion. The polysaccharides obtained by microwave-assisted freeze thawing method, and its yield and content were the most.
        Key words：Onion;  Polysaccharides;  Microwave;  Ultrasonic wave
        洋葱Alliun cepa L.，别名玉葱、葱头，为百合科(Liliaceae)葱属(Alliun)植物。洋葱栽培历史悠久，原产于西南亚，20世纪初才在我国大量栽培。洋葱具有消炎抑菌、活血化淤、防癌抗癌、利尿、降血糖以及预防心血管疾病等功效［1，2］，它所具备的这些功能使其成为备受全世界青睐的食品。洋葱的化学成分主要为硫化物、类黄酮、苯丙素酚类、甾体皂苷类、含氮化合物和前列腺素类、多糖等，国内外对于前几种物质的研究报道较多，而有关洋葱多糖方面的研究甚少。多糖是由各种单糖组成的天然高分子化合物，具有许多生理功能。洋葱多糖［3］对超氧阴离子自由基、羟基自由基均有较好的清除能力，具有较高的研究开发价值。本文比较了热水浸提法、超声波提取法［4～7］和微波辅助冻融法［8～10］对洋葱中多糖的提取效果差异，并比较了洋葱肉质部分和洋葱皮中多糖的含量差异，为洋葱多糖的进一步研究开发奠定了基础。
       1  仪器与试剂
        TU-1800紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；JJ-2型组织捣碎机（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；WP700J17微波炉（顺德格兰仕电器厂有限公司）；JY92-2D超声细胞粉碎机（宁波新蓝科器研究所）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海荣华生化仪器厂）；LXJ-II型离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）；EL-410S电子分析天平（美国setra）；高速万能粉碎机（天津市泰斯特有限公司）。新鲜洋葱（购于南京市白云亭农贸市场，紫皮扁圆形）；洋葱皮（选取较好的革质洋葱皮，洗净烘干，粉碎过40目筛备用）；葡萄糖（纯度98.6%）；其他试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
        2.1  洋葱肉质部分多糖的提取
        2.1.1  热水浸提法取500 g新鲜洋葱（去皮），切成细小的碎块，加入300 ml蒸馏水，用组织破碎机破碎，用200 ml蒸馏水分多次冲洗，放入90℃恒温水浴锅中加热提取，时间为40 min，过滤，残渣加入500 ml蒸馏水重复提取3次。合并滤液，备用。
        2.1.2  微波辅助冻融法取500 g新鲜洋葱（去皮），切分成细小的碎块，加入300 ml蒸馏水，用组织破碎机破碎后取出，用200 ml蒸馏水分多次冲洗，置于冰箱中(约－20℃)冷冻12 h，取出后用微波间歇处理40 min（每隔5 min停止一次，10 min/次）后，过滤。残渣加入500 ml蒸馏水，重复提取3次，合并滤液，备用。
        2.1.3  超声波提取法取500 g新鲜洋葱（去皮），切分成细小的碎块，加入300ml蒸馏水，用组织破碎机破碎后取出，用200 ml蒸馏水分多次冲洗。置于超声波细胞破碎仪中，超声处理50 min（工作时间30 s，间歇时间5 s，功率500 W），过滤，残渣加500 ml蒸馏水重复处理3次。合并滤液，备用。
        2.2  洋葱皮中多糖的提取分别取干洋葱皮粉末10 g，加入蒸馏水200 ml，室温浸泡2 h。按洋葱肉质部分方法同法提取。
        以上滤液分别减压浓缩至约150 ml，sevage法（氯仿－正丁醇＝4∶1）去蛋白，加乙醇使含醇量达80％，放置24 h，离心，沉淀分别用无水乙醇，丙酮洗涤，抽干，干燥，即得洋葱多糖粗品。并计算粗多糖得率。结果见表1。表1  不同提取工艺洋葱粗多糖得率比较
        2.3  不同提取工艺的洋葱多糖含量测定［11～13］
        2.3.1  对照品及样品溶液的制备对照品溶液的制备：精密称定105℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置50 ml容量瓶中，蒸馏水溶解，稀释至刻度，即得0.1%葡萄糖标准液。
        样品溶液的制备：精密称取上述不同工艺制备的粗多糖各0.1 g，放入大试管中，加入10 ml  6 mol/L盐酸和15 ml蒸馏水，混匀。在沸水浴中加热水解30 min，用碘化钾-碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。立即冷却，加入酚酞指示剂1滴，以10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色，过滤，滤液定容至100 ml，备用。
        2.3.2  检测波长的确定分别取对照品溶液和样品溶液各1.0 ml，各加蒸馏水使均达到2 ml，并以2ml蒸馏水做空白对照，再分别加入1.5 ml DNS试剂，在沸水浴中加热5 min显色，立即用流动的冷水冲洗使其迅速冷却，再各加入20 ml蒸馏水，混匀后，在400～600 nm扫描，样品和对照品溶液均在520 nm处有最大吸收，因此确定520nm为检测波长。
        2.3.3  标准曲线的绘制分别精密吸“2.3.1”项下的标准液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml于9只大试管中，各加蒸馏水使均达到2 ml。再分别加入1.5 ml DNS试剂，在沸水浴中加热5 min显色，立即用流动的冷水冲洗使其迅速冷却，再各加入20 ml蒸馏水，将上述各管溶液混匀后，在紫外分光光度计上测定520 nm处的吸光度，用空白管溶液调零点，记录吸光值。以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制出标准曲线并线性回归得方程为：Y=0.941 X－0.020，r＝0.999。
        2.3.4  精密度实验精密吸取对照品溶液1.0 ml，共6份，按“2.3.2”项下操作，测定吸光值，计算RSD为1.45％。
        2.3.5  稳定性实验精密吸取样品溶液1.0 ml，按“2.3.3”项下操作，在3 h内，每隔20 min测定520 nm处吸光值，计算RSD为2.35％，样品溶液在3 h内稳定性良好。
        2.3.6  样品含量的测定精密吸取处理液各1.0 ml，加蒸馏水至2 ml，按“2.3.3”项下同法操作，测定520 nm处吸光值，代入回归方程，计算还原糖含量，按下式计算得总糖含量。结果见表2。
        总糖含量（％）＝水解后还原糖毫克数×样品稀释倍数/样品重量×100%
        2.3.7  加样回收实验准确称取多糖样品0.05 g共9份，按高、中、低3个浓度分别加入适量对照品，按样品测定项下方法测定多糖含量，平均回收率为98.5％，RSD为2.65%，表明该方法准确可靠。结果见表3。表2  不同工艺提取样品中多糖含量测定结果表3  回收率实验结果
       3  讨论
        以葡萄糖为对照品，采用3，5－二硝基水杨酸比色法［12，13］测定洋葱中的多糖含量是可行的，该法操作简便、快速准确、杂质干扰较少，重现性好，灵敏度高。
        实验结果表明，洋葱肉质部分和外表皮的多糖含量相差不大，微波辅助冻融法提取洋葱多糖得率最高，为3.58％，而超声波法得率为1.75%；微波辅助冻融法和超声波法提取的洋葱多糖含量差异不大，均在62％以上。因此，微波辅助冻融法是提取洋葱多糖最为合适的方法。
        本实验中，微波辅助冻融法提取洋葱多糖的得率高于其他方法，多糖含量也较高，分析主要原因是由微波加热的特殊性质决定的，细胞内水分子吸收微波能后温度迅速上升汽化，产生压力使细胞壁破碎，再加上微波加热前的冰冻效果，进一步促进了细胞壁的破碎效果，使胞内产物更易倾出。微波结合冻融是提取洋葱中多糖较为高效的方法，为洋葱多糖的开发应用奠定了基础。
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