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       【摘要】 
       目的优选油茶粕中总皂苷的提取工艺。方法采用丙酮-水法自油茶粕中提取总皂苷,考察提取时间、温度、次数、溶剂与物料比及溶剂浓度对总皂苷收率的影响，利用正交实验优选总皂苷最佳提取工艺。结果总皂苷的最佳提取工艺为：9倍量60%丙酮-水在70℃下提取2次，3 h/次，总皂苷的收率可达12.80%，总皂苷含量为55.37%。结论丙酮-水提取法可用于油茶粕中总皂苷的提取，溶剂与物料比对总皂苷的提取有显著影响。
       【关键词】  油茶粕 总皂苷 提取工艺 正交实验
       油茶总皂苷系山茶科山茶属油茶组植物油茶Camellia oleifera Abel种籽榨油后的茶粕经提取、富集、纯化后得到的一类皂苷化合物，具有乳化、溶血等性能，是一种优良的天然表面活性剂［1］，可毒杀软体动物［2］，亦被水产养殖业用于鱼塘和虾塘的清塘消毒。我们在其药用价值研究中发现油茶粕中所含的皂苷类成分具有非常强的抗肿瘤活性，其中丙酮-水提取物的活性明显高于醇提取物。本实验的提取方法经验证可从油茶粕中提取出高纯度的油茶总皂苷，初提物中总皂苷纯度即可达到55.37%。本文即在此基础上，以油茶粕中油茶总皂苷收率为指标，利用正交实验优化总皂苷的提取工艺。
       1  材料与仪器
        油茶种子为200603自广西壮族自治区燕洞乡采集后经辽宁师范大学陈辰教授鉴定为山茶属山茶亚属油茶组植物油茶Camellia oleifera Abel；油茶皂苷对照品（湖南今汉生有限公司提供）；试剂均为市售分析纯试剂；Unico7200可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）；Laborata4000型旋转蒸发仪（Heidolph公司）；BP210S十万分之一电子天平（Sartorius公司）。
       2  方法和结果
        2.1  油茶粕中总皂苷的UV法测定［3］
        2.1.1  标准曲线的绘制将总皂苷标准品于120℃烘箱中烘至恒温，于干燥器中冷却后称取50 mg用甲醇溶解，定溶至100 ml，得0.5 mg/ml总皂苷对照品溶液。精密吸取对照品溶液 0.00,0.40,0.80,1.20.1.60.2.00 ml，分置于具塞试管中，挥去甲醇，精密加入新鲜配制的5%香草醛溶液0.20 ml，高氯酸0.80 ml加塞，于60℃水浴中反应15 min，取出，冰水中冷却至室温，精密加入冰乙酸5.0 ml，摇匀， 随行做空白试验，588 nm波长下测吸光度。计算回归方程为：Y=0.467X-0.008 2(r=0.999 9)。线性范围为0.2～1.0 mg/ml。
        2.1.2  样品溶液的测定准确称取10.0 g油茶粕，粉碎，于250 ml圆底烧瓶中，加入90 ml丙酮-水，按试验设置的处理条件提取，回收溶剂后干燥，准确称取干燥粉末20 mg甲醇溶解，定容至10 ml容量瓶中，准确吸取一定量置于具塞试管中，照“2.1.1”项下自“挥去甲醇”后同法测定吸光度。代入回归方程中计算总皂苷的质量，并计算总皂苷的收率〔总皂苷收率(%)=提取液中总皂苷质量/油茶粕质量×100%〕。
        2.2  单因素试验
        2.2.1  提取时间对总皂苷收率的影响在恒定浸提温度为70℃、提取次数为1次、固液比（g∶ml）为1∶14、提取溶剂为60%丙酮-水的条件下，分设1，2，3，4，5 h共5个提取时间，计算总皂苷的收率（如图1）。可知，油茶皂苷收率随提取时间的延长而增大，但提取时间超过3 h后总皂苷的含量明显下降，故选定3 h为最佳提取时间。
        2.2.2  提取温度对总皂苷收率的影响在恒定提取时间为3 h，提取次数为1次、固液比为1∶14(g∶ml)、提取溶剂为60%丙酮-水的条件下，分设60，70，80，100℃4个温度点进行提取，计算总皂苷的收率（见图2）。可知，油茶皂苷收率随提取温度的升高而增大，但温度高于70℃，总皂苷含量明显下降。因此，选定70℃为最佳提取温度。
        2.2.3  浸提次数对总皂苷收率的影响在恒定浸提时间为3 h，浸提温度为70℃，固液比为1∶14，提取溶剂为60%丙酮-水的条件下，分设1，2，3，4次共4个提取次数进行提取，计算总浸膏的收率（见图3）。可知，两次提取就可以基本将皂苷提取完全。故设定提取次数为2次。
        2.2.4  提取溶剂倍量对总皂苷收率的影响在恒定浸提时间为3 h、浸提温度为70℃、浸提次数为2次、提取溶剂为60%丙酮-水的条件下，分设1∶6，1∶8，1∶10，1∶12，1∶14(g∶ml) 共5 个溶剂倍量进行提取，计算总皂苷的收率，结果如图4。可知，油茶总皂苷的收率和纯度在溶剂倍量比为1:10时到达最高点，故选定提取溶剂倍量（W/V）为1:10。
        2.2.5  提取溶剂的浓度对总皂苷收率的影响在恒定浸提时间为3 h，浸提温度为70℃，提取次数为2次，固液比为1∶10的条件下，分设60%，70%，80%，共3个提取浓度进行提取，计算油茶皂苷的收率（见图5）。结合总皂苷的纯度可知，60%丙酮-水溶剂中油茶总皂苷收率最高，故选定提取溶剂为60%丙酮-水。
        图5  提取溶剂的浓度对总皂苷收率的影响
        2.3  正交实验考察采用L9（34）正交表考察最佳工艺条件。正交实验因素水平安排见表1，实验结果分别见表2～3。表1  因素水平表表2  L9(34) 正交实验结果表3  实验结果分析
       3  讨论
        由分析可知，各因素的影响主次为A>B>C>D，即提取溶剂倍量>提取温度>提取时间>提取溶剂浓度,所以最佳工艺组合为A1B2C2D2，即9倍量的60%丙酮-水70℃ 提取2次，3 h/次。其中提取溶剂倍量对总皂苷提取的影响显著。
        以往油茶皂苷的提取方法多采用水提法，但此法尚有不足，一是杂质较多，粗提物中总皂苷含量较低，而且为提高提取物收率，需要很长的提取时间，费时费工；二是糖类、蛋白质等杂质的大量存在给后续处理工作带来很大难度。本法采用丙酮-水来提取，所用溶剂剂量少，方便回收，提取时间短，可大大节约能源，此外使用本法提取总皂苷收率高，大于12%，而且总皂苷纯高很高，粗提物中就可达到50%以上。
       【参考文献】
         ［1］ 朱 英，罗永明，付小梅.大孔树脂分离油茶皂苷和黄酮的研究［J］.林产化学与工业，1999,19(3):40.
       
       ［2］ 王小艺，黄炳球.茶皂素对福寿螺的药效试验［J］.广东农业科学，1998，3：32.
       
       ［3］ 高声传，郭 涛，夏维杰，等.比色法测定酸枣仁提取物中总皂苷的含量［J］.实用药物与临床，2005，8（1）：15.