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       【摘要】 
       目的分析栀子主要有效成分在煎煮过程中的溶出特点，为临床合理用法提供依据。方法采用高效液相色谱法测定栀子单煎和黄连解毒汤合煎溶液中西红花苷-I和栀子苷的含量。结果单煎、合煎两种状态下，栀子苷在各时间点的溶出量没有明显差别，煎煮30 min达到最大；合煎时西红花苷-I的溶出量较单煎显著增加，单煎、合煎均在15 min时溶出量达到最大，其后随着煎煮时间延长西红花苷-I的含量降低。结论栀子不宜长时间煎煮，煎煮时间宜控制在20 min以内。
       【关键词】  栀子 煎煮时间 栀子 西红花苷 溶出量
       
       中药饮片的用法是《中国药典》的内容之一，对临床用药具有指导意义。用法的确定多以传统经验为主，缺乏实验依据。为此，本研究选取栀子为实验药材，采用单煎、黄连解毒汤合煎的方法［1］，分析其主要有效成分—栀子苷、西红花苷［2,3］的溶出过程，为栀子的临床用法提供参考，并为其他中药的用法实验研究提供借鉴。
       1  仪器与材料
        1.1  仪器Waters 515高效液相色谱仪，DAD检测器；控温电热套；BP-211D十万分之一电子分析天平（德国Sartorious公司）。
        1.2  试药西红花苷-I化学对照品自制（经高效液相归一化法检测，纯度在98%以上）；栀子苷 购于中国药品生物制品检定所（批号 110749-200511）；甲醇（GR北京化工厂）；蒸馏水（自制）。
        1.3  药材栀子饮片购于北京永安堂药店，产地江西；黄连饮片购于北京永安堂药店，产地四川；黄柏饮片购于北京永安堂药店，产地黑龙江；黄芩饮片购于北京永安堂药店，产地内蒙古。
       2  方法与结果
        2.1  对照品溶液的配置称取1.741 mg西红花苷-I，置于50 ml容量瓶中，用甲醇定容，对照品溶液浓度即0.034 82 mg/ml。称取1.697栀子苷，置于50 ml容量瓶中，用甲醇定容，即0.033 94 mg/ml。
        2.2  供试品溶液的制备
        2.2.1  黄连解毒汤复方煎煮供试品的制备按处方比例取黄连9 g，黄芩6 g，黄柏6 g，栀子9 g。根据临床煎药量加入300 ml水，煎煮时间分别为5，15，30，40，50，60 min，水沸后开始计时。每次煎煮完后放凉、过滤，置于300 ml容量瓶中定容，再用移液管精密移取5 ml置于25 ml量瓶中，用乙醇定容至刻度备用。
        2.2.2  栀子饮片单煎供试品的制备为了与黄连解毒汤复方煎煮做比较研究，取栀子饮片9g，置于500 ml圆底烧瓶中，加入300 ml水进行煎煮，水沸后开始计时，煎煮时间分别为5，15，30，40，50，60 min。每次煎煮完后放凉、过滤，置于300 ml容量瓶中定容，再用移液管精密移取5 ml置于25 ml量瓶中，用乙醇定容至刻度备用。
        2.3  色谱条件
        2.3.1  西红花苷-I色谱条件［4］采用Diamonsil C18色谱柱 （5 μm, 4.6 mm×250 mm），流动相为甲醇-水（45∶55），检测波长440 nm ，流速 1 ml·min-1。供试品的色谱图见图1。
        2.3.2  栀子苷的色谱条件［5］采用Diamonsil C18色谱柱 （5 μm, 4.6 mm×250 mm）；流动相为乙腈-水（15∶85）；检测波长238 nm；流速1 ml·min-1。供试品的色谱图见图2。
        2.4  方法学考察结果见表1。
        2.4.1  线性关系考察分别精密吸取西红花苷-I和栀子苷对照品2，4，6，8，10 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积。进样量(μg)为横坐标X，以峰面积积分值为纵坐标Y，计算回归方程。2.4.2  精密度实验精密吸取黄连解毒汤供试品溶液10 μl连续进样5次，按上述色谱条件下分别测定西红花苷-I和栀子苷色谱峰峰面积。
        2.4.3  稳定性实验精密吸取黄连解毒汤供试品溶液，分别于制备后0，1，2，4，8，10 h进样10 μl，测定西红花苷-I和栀子苷色谱峰峰面积。
        2.4.4  重复性实验按“2.2.1”项下黄连解毒汤供试品的制备方法，取煎煮时间为30 min的样品，进样10 μl，按上述色谱条件下分别测定西红花苷-I和栀子苷色谱峰峰面积，进行重复性实验（n＝5）
        2.4.5  回收率实验按“2.2.1”项下黄连解毒汤供试品的制备方法，取煎煮时间为30 min，煎煮完毕放凉后加入适量西红花苷-I和栀子苷对照品，按“2.2.1”项下制备供试品。在述色谱条件下分别测定西红花苷-I和栀子苷色谱峰峰面积，计算回收率（n＝5）。 表1  方法学考察实验结果
        2.5  实验结果分别取“2.2”项下制备的供试品溶液，过0.45 μm滤膜，准确吸取供试液10 μl，进样，在上述色谱条件下测定，并随行标准品。用外标两点法计算出测定结果并折合成300 ml煎煮液中西红花苷-I和栀子苷的溶出量结果见表2及图3～4。表2  栀子饮片单煎及复方煎煮西红花苷-I和栀子苷的溶出量
       3  讨论
        栀子作为临床常用药，在用法上没有特殊规定，但是，《中国药典》中对用法的规定，多依据历代文献记载和临床经验，缺乏客观试验依据。
        本研究通过单煎、合煎分析栀子主要有效成分的溶出，发现单煎、合煎两种状态下，栀子苷在各时间点的溶出量没有明显差别，煎煮时间在30 min以内，溶出量增加明显，其后溶出量没有明显增加；合煎时西红花苷-I的溶出较单煎显著增加，单煎、合煎均在15 min时溶出量达到最大，其后随着煎煮时间延长西红花苷-I的含量降低，说明西红花苷-I具有不稳定性，不宜长时间煎煮。
        依据实验结果，综合考虑栀子苷和西红花苷-I的溶出特点，认为栀子的煎煮时间控制在20 min以内为好。
       【参考文献】
         ［1］ 张丽美,李贵海.黄连解毒汤的药理及临床研究进展［J］. 时珍国医国药，2007,18(7):1635.
       
       ［2］ 绪广林,钱之玉,任 萱.西红花苷对培养的牛内皮细胞内钙的调节作用［J］.中国药科大学学报，2002，33(5):445.
       
       ［3］ Soeda S,Ochiai T,Paopong L,et al.Croin suppresses tumor necrosis factor-alpha-induced cell death of neuronally differentiated PC-12 cells［J］.Life Sci,2001,69(24):2887.
       
       ［4］ 刘 璇,钱之玉,付 健.西红花苷-1的高效液相色谱测定［J］.中国药科大学学报,1996,27(12):734.
       
       ［5］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005：173.