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       【摘要】 
       目的观察黎氏哮喘方对哮喘患儿细胞因子白介素18（IL-18）、免疫球蛋白E（IgE）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法采用免疫吸附法（ELISA）测定17例哮喘儿童血清IL-18，IgE和TNF-α水平，并与正常健康儿童进行对比。结果哮喘患儿血清IL-18，IgE和TNF-α水平均比正常儿童明显升高；血清IL-18与IgE，TNF-α水平存在显著正相关关系；经治疗患儿血清IL-18，IgE和TNF-α水平均明显下降。结论黎氏哮喘方具有降低哮喘患儿血清细胞因子IL-18，IgE和TNF-α含量的作用。
       【关键词】  哮喘 儿童 白介素18 炎症因子
       
       Effect of Chinese Herbs on Inflammatory Cytokines in Children with Asthma
        CHEN Jie1, YUAN Yuesha2*,HUANG Huxiang1,LIU Dan1,WANG Lin3,ZHOU Shaohua3
        （1.Medical School of Yangtze University, Jingzhou, 434000,China; 2.Clinical Medical School of Yangtze University, Jingzhou, 434000,China; 3.Affiliated Hospital of Yangtze University, Jingzhou, 434000,China）
        Abstract：ObjectiveTo explore the effect of Lishi Xiaochuan on inflammatory cytokines in asthmatic children.MethodsSerum IL-18,IgE and TNF-α were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in 17 children with asthma and 20 health children. ResultsSerum IL-18,IgE and TNF-α level in 17 cases of the stage of attack(212.79±14.77; 235.71±23.73; 99.12±9.06) (P<0.01)were remarkably higher than those in 20 healthy children(64.30±8.13, 60.85±7.94, 38.40±4.96) (P<0.01). There was a remarkably positive relationship between serum IL-18，IgE and TNF-α level.（r=0.696；r=0.653）.ConclusionLishi Xiaochuan has a decreasing effect on seram levels of IL-18, IgE and INF-a in asthmatic children.
        Key words：Asthma;  Child;   IL-18 ;  Inflammtory factors
        支气管哮喘是儿童常见病，是由多种细胞和细胞因子共同参与的气道慢性炎症性疾病，近年来其发病率有逐渐增长的趋势，严重影响患者的学习、生活，甚至影响其生长发育。临床多表现为呼吸困难、喉中痰鸣有声、甚则喘息不能平卧。宋氏认为，小儿哮喘的病因可分为内因和外因，内因责之于伏痰，与素体肺脾肾三脏功能失调有关，对于小儿来说，尤多责之于肺脾两脏。外因则以感受外邪或异物为主，尤以风寒、风热之邪为主［1］。胡氏认为，小儿脏腑娇嫩，肺脏尤娇，脾常不足，肾常虚弱［2］。张伟等［3］指出，小儿支气管哮喘的病理机制是诱因引起处于生理边缘的肺虚肝旺关系破坏，致使肺风发动气道挛急。肺虚肝旺是哮病发病基础。国内外也有不少学者研究认为细胞因子网络失衡在哮喘的发病机制中起着重要作用，主要涉及IL-1，IL-4，IL-5，IL-8，IL-12，IL-13和TNF-α等［4］，尤红等［5］使用黎氏哮喘方用于治疗小儿支气管哮喘的效果已得到临床观察证实和实验室检验证明。本研究观察该方对支气管哮喘患儿治疗前后IL-18，IgE和TNF-α水平的变化及其相关性影响。
       1  临床资料
        全部哮喘患儿来自2005-01～2006-01我院住院及门诊病例，均符合全国哮喘诊断标准［6］，按拟订方案治疗并完成足够疗程。其中治疗组患儿17例，男8例，女9例，年龄2～14岁，平均7岁； 20例同期体检健康儿童作为对照，男9例，女11例，年龄2～14岁，平均6岁。治疗组患儿病情程度属于轻、中度哮喘急性发作，中医辨证属于寒哮、寒热夹杂及虚实夹杂型哮喘(参照全国高等教育中医药类规划教材《中医儿科》六版标准)。
       2  方法
        2.1  治疗方法  治疗组用黎氏哮喘方：炙麻黄、葶苈子、当归各6g，桂枝、苏子、熟地、补骨脂、法半夏各10g，鹅管石、毛冬青各15g，五味子、炙甘草各5g。用法、用量及疗程均严格按照尤红等［5］研究执行。根据患儿病情程度变化可适当使用普米克喷雾剂（每次1～2喷/d）；对照组不加任何药物干预。观察期间均不得静脉注射激素类或茶碱类药物。
        2.2  标本采集及实验方法 哮喘患儿和对照儿童取静脉血3ml，常规分离血清，置-20℃冰箱待测。IL-18 ，IgE及TNF-α测定均采用ELISA法，药盒分别为法国Diaclone公司和美国biosource公司产品，专人严格按说明书操作。
        2.3  统计学方法 检测结果用±s表示，多个样本间比较采用单因素方差分析，两组间做q检验；治疗前后配对资料采用配对t检验；相关性检验采用Perason直线相关性分析；用SPSS11.5统计软件包完成数据处理，以P<0.05为差异有显著性意义。
       3  结果
        3.1  治疗前后哮喘儿童血清IL-18,IgE及TNF-α水平的比较结果见表1。
        从表1可以看出，经黎氏哮喘方治疗前后哮喘儿童血清IL-18、IgE及TNF-α水平均有明显下降，差异有非常显著意义（P<0.01）。
        3.2  血清IL-18与IgE水平的相关性分析将治疗前儿童血清IL-18与IgE水平进行直线相关分析，相关系数r=0.696，经统计学检验P<0.01，表明两者存在非常显著的正相关关系。
        3.3  血清IL-18与TNF-α水平的相关性分析将治疗前儿童血清IL-18与TNF-α水平进行直线相关分析，相关系数r=0.653，经统计学检验P＜0.01，表明两者间存在非常显著的正相关关系。表1  治疗前后哮喘儿童血清IL-18，IgE及TNF-α水平的比较与治疗前比较,▲P＜0.01
       4  讨论
        支气管哮喘以可逆性气道阻塞、气道高反应性、气道炎症为其三大主要特征，其中以气道炎症为最主要的病理变化，并决定气道阻塞和气道高反应性的程度［3］。其发病机制复杂，至今尚未完全阐明，有多种免疫细胞、炎性细胞及细胞因子参与其发病过程，最近对IL-18参与哮喘发病过程的研究越来越引起关注。
        IL-18是Okamura等于1995年从中毒休克的小鼠肝脏中发现并提取的一种能诱导T细胞产生干扰素-γ的细胞因子。1996年由Ushio等成功克隆命名为IL-18，其分子量约为18～19KD，是IL-1家族的一员，是一个具有多重生物效应的炎症因子。IL-18主要来自巨噬细胞、NK细胞或T细胞，作为Th1细胞分泌的因子，IL-18可与IL-12协同，促进IFN-γ产生，诱导Th1分化和抑制B细胞合成IgE。近来研究发现，IL-18本身还可以诱导IgE和促进炎症过程，即促进Th2反应。也就是说，IL-18既可以调节Th1细胞分泌，又可以调节Th2细胞分泌，是体内具有双向调节作用的因子［7，8］。IL-18可诱导炎症早期细胞因子的产生，如TNF-α，IL-1β等，这些炎症因子可以进一步促进外周血和细胞系中嗜酸粒细胞IL-18表达和释放［9］，促进IL-8、巨噬细胞炎症蛋白-1α（MIP-1α）和单核细胞趋化因子-1（MCF-1）等细胞因子的表达增强。IL-18的作用机制与细胞的NF-κB和ICAM-的表达增强有关［10］。因此，IL-18在气道炎症级联效应中可能起重要的作用。在小鼠模型中，IL-18与嗜碱性粒细胞释放组胺和IL-4密切相关，能诱生IL-4从而参与哮喘病的发生［11］，Wild等［12］通过对北美豚草过敏性哮喘的小鼠模型研究，证实了IL-18能介导体内的Th2应答而引发哮喘。哮喘主要是I 型变态反应性疾病, IgE是一种介导I 型变态反应的主要免疫蛋白，国内有学者认为T淋巴细胞的免疫功能低下是导致哮喘体内IgE合成增加、灭活减少的重要原因，哮喘体内Th1型细胞增加功能亢进或Th2细胞减少功能下降致使IgE合成增加。IgE水平是随着病情缓解而下降。TNF-α是由单核巨噬细胞产生的具有广泛生物活性的多肽调节因子，与机体炎症有着极为密切的关系［13］。哮喘的本质就是多种细胞因子参与的慢性气道炎症，TNF-α便是其中之一，且和病情相一致［14］。TNF-α可刺激内皮细胞、成纤维细胞及单核巨噬细胞产生大量的IL-6，IL-8，IL-1，进入血液循环，诱导中性粒细胞的趋化作用及局部浸润，从而启动炎症反应活化嗜酸性粒细胞，进而引发支气管痉挛。
        本研究结果表明，哮喘患儿存在血清IL-18水平增高，尤其在治疗前期更为明显，提示IL-18参与儿童哮喘的发病过程。我们同时对其血清IgE，TNF-α水平进行检测，结果同样显示患儿明显高于正常对照组，并与血清IL-18水平呈明显的正相关关系，说明了IgE，TNF-α的增高与IL-18密切相关。随着有效治疗，血清IL-18和IgE，TNF-α水平均下降，与Ohnishi等的报道相似［11］。同时，在治疗前期，大量炎性细胞分泌IL-18，使其血清中的水平升高，而升高的IL-18又趋化、聚集和激活中性粒细胞，加重炎症反应。另外，在治疗后，IL-18和IgE，TNF-α水平虽有明显下降，但仍明显高于正常对照儿童，说明即使在缓解期，细胞因子网络的失衡仍然存在。我们分析认为，哮喘的反复发作是由于炎症细胞及某些细胞释放的许多细胞因子和趋化因子使网络调控异常，而导致炎症-支气管上皮细胞损伤-气道重塑的恶性循环过程。
        综上所述，在黎氏哮喘方中的麻黄、法半夏等所含麻黄碱、皂苷等能缓解支气管平滑肌痉挛；甘草等能覆盖呼吸道炎症粘膜，减少感染或致敏原的刺激；五味子、补骨脂等补肾健脾之品，有类激素样作用，能抑制过敏性气道反应［15］。黄钢花等［16］关于该方对哮喘患儿痰液细胞学研究中，证实了黎氏哮喘方可以显著降低痰液细胞总计数、嗜酸性粒细胞分类、淋巴细胞分类，说明了黎氏哮喘方能抑制炎性细胞的产生，有治疗气道炎症的作用。本文通过对两种炎症因子IL-18和TNF-α的测定，发现治疗后较治疗前水平显著下降，进一步证明了该方能有效抑制炎症因子的产生，同时，IgE治疗后较治疗前水平显著下降,说明了黎氏哮喘方抗过敏作用同样重要，可对Th1/Th2型细胞相互调节，这给黎氏哮喘方治疗轻、中度哮喘提供了新的科学依据。
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