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       【摘要】 
       目的从玉郎伞(YLS)中分离出玉郎伞多糖，并对其化学组成进行研究。方法YLS经醇提后的药渣用热水提取，乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素（DEAE52）柱层析分离纯化，气相色谱和薄层色谱分析其组成。结果分离得到的YLS多糖经Sephadex75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法(HPGPC) 证实为单一多糖，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成。结论YLS多糖首次从YLS中提取获得，为YLS主要成分之一。
       【关键词】  玉郎伞 多糖 分离纯化 组成玉郎伞（YLS）
       原植物经考证为蝶形花科植物疏叶崖豆Millettia pulchra Kurzvarlaxior (Dunn) Z. Wei的块根。民间常用于高血压病、跌打损伤和风湿病的治疗，也用于治疗智力减退、消化不良、营养不良和病后虚弱等。药理实验表明，YLS多糖能明显延长小鼠游泳时间、耐缺氧时间及耐高温时间，显著提高小鼠血清SOD、GSHPx活性及减少MDA含量，具有较好的抗衰老作用［1］。本实验对YLS多糖作了分离纯化并对其组成性质进行研究。现报道如下。
       1  材料与仪器
        1.1  材料与试剂玉郎伞饮片，购于南宁医药公司；D木糖，生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司，批号011130；L（＋）－鼠李糖，生化试剂，北京化学试剂公司，批号011204；阿拉伯糖，生化试剂，武汉生命技术有限公司，批号030625；葡萄糖，分析纯，上海伯奥生物科技有限公司，批号030305；D（＋）半乳糖，生化试剂，sigma ，批号 B002211。DEAECellulose52,  whatman 批号010410；Sephadex G75， pharmacia,　批号：279867；胰蛋白酶，美国sigma，批号030409。用于气相色谱分析的试剂均为色谱纯，其余试剂为分析纯。
        1.2   仪器1525 WATERS高效液相色谱仪，美国 WATERS公司；4890D气相色谱仪，美国Agilent公司；TU1800SpC紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。
       2  方法
        2.1  粗多糖的提取 玉郎伞饮片粉碎后，加70%乙醇回流提取除去脂溶性杂质，药渣加蒸馏水煮3次，3 h/次，合并滤液，离心分离，浓缩至适当体积，加入5倍量95%乙醇，醇析24 h，过滤，依次用95%乙醇、丙酮洗涤多次，沉淀物加蒸馏水溶解，加入适量胰蛋白酶，摇匀，37 ℃水浴保温12 h，采用Sevage法除去蛋白［2］，药渣用蒸馏水溶解，透析48 h，除去小分子杂质及色素，透析后浓缩至适当体积，加5倍无水乙醇，醇析8 h，收集沉淀物，真空干燥得YLS粗多糖。
        2.2  多糖纯化 YLS粗多糖适量，加蒸馏水溶解，上已处理好的DEAE52纤维素（OH，400 mm×26 mm）柱层析，用蒸馏水洗脱，流速1 ml·min-1，分部收集，每管5 ml，用硫酸苯酚法显色［3，4］，收集合并含糖洗脱液，用旋转蒸发仪蒸干洗脱液，得白色YLS多糖。
        2.3  多糖的纯度鉴定
        紫外光谱：取上述分离纯化后的多糖，配成0.1%水溶液，在TU1800SpC紫外可见分光光度计对200～400 nm区间扫描。
        凝胶柱层析：YLS多糖经Sephadex G75柱层析，蒸馏水洗脱，流速0.1 ml/min，每管1 ml分部收集，苯酚硫酸显色，以管号为横坐标，光密度为纵坐标，根据分部收集中出现的峰数和形状断定多糖的纯度。
        高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)［5］：美国Waters高效液相色谱仪，2410示差折光检测器（附加GPC软件）。色谱柱为日本TOSOH公司TSKgel G3000 pWxl凝胶色谱柱(300 mm×7.8 mm)，流动相为0.7%硫酸钠水溶液，流速0.6 ml·min-1，柱温35 ℃，进样量20 μl。
        2.4  多糖的组成分析
        薄层色谱分析［6，7］：　将60 mgYLS多糖加入8 ml  2 mol·l-1的硫酸中，加入N2除O2封管，105 ℃烘箱中水解8 h，水解液用饱和Ba(OH)2溶液中和，离心去除BaSO4沉淀，上清液减压浓缩至干，得多糖水解物备用。取1%的多糖水解物于高效硅胶G薄层板（10 cm×20 cm）上点样，以标准单糖为对照。
        展开系统：醋酸乙酯∶异丙醇∶乙酸∶水＝11∶4∶4∶1（V/V）
        显色：10%硫酸乙醇溶液，喷雾后于105 ℃加热10 min。
        气相色谱分析［4，6，8］：取上述水解多糖30 mg按下列步骤进行，加入30 mg盐酸羟胺和1.0 ml吡啶于90 ℃恒温水浴中振荡，加热反应30 min，取出冷却至室温，加入1.0 ml醋酸酐，于90 ℃恒温水浴中乙酰化30 min，生成具有挥发性的糖腈乙酸酯衍生物。反应产物用旋转蒸发仪蒸干，残渣用2 ml氯仿溶解，取样，进行气相色谱分析，以标准单糖衍生物为对照。
        色谱条件：Hp Agilent 4890D气相色谱仪。色谱柱为石英毛细管柱Hp5（0.53 mmid×15 m）；FID检测器（氢火焰）；柱室温度200 ℃；气化温度270 ℃；燃气H2，0.22 MPa；载气N2，0.19 MPa，空气助燃0.30 MPa；进样量1 μl；程序升温，开始时，150 ℃保持1 min，接着以5 ℃·min-1升至200 ℃，并于200 ℃保持10 min。
       3  结果
        分离纯化得到的YLS多糖呈白色粉沫，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
        3.1  紫外光谱分析YLS多糖在250～280 nm之间无吸收，说明其中无蛋白质、氨基酸及核酸(见图1)。
        3.2  凝胶柱层析洗脱曲线为单一洗脱峰，表明所得多糖纯度较高(见图2)。
        3.3  HPGPC测定结果 在图谱中只有单一峰，证明纯度较高（见图3）。
        3.4  薄层色谱分析见图4。在薄层板上从左至右依次为木糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和YLS多糖水解样品（有两个斑点，分别表示为YLS R1和YLS R2）。结果表明，玉郎伞多糖主要由葡萄糖和阿位伯糖组成（各糖Rf值见表1）。表1  YLS多糖水解物和标准单糖的Rf
        3.5  气相色谱分析 YLS多糖水解物在气相色谱上出现两个峰，其保留时间分别为9.456 min和14.980 min，与阿拉伯糖和葡萄糖的保留时间一致(见图5～6)，说明YLS多糖是由阿拉伯糖葡萄糖两种糖组成，与薄层色谱的结果相符，其百分组成（面积归一化法）见表2。表2  YLS多糖成分单糖百分组成
       4  讨论
        本实验利用较为常规的方法提取YLS多糖，经DEAE52和Sephadex G75分离纯化，紫外、凝胶柱层析、气相色谱分析，证明所得多糖纯度较高，并首次证实YLS多糖是由葡萄糖和阿拉伯糖组成。YLS中多糖含量多，作用广泛，具有较高的研究和开发价值。
       【参考文献】
         ［1］ 黄忠仕，黄仁彬，林 兴,等. 龙眼参粗多糖抗衰老作用的实验研究［J］. 中华现代中西医杂志，2004，2（2）:97.
       
       ［2］ 张国升，樊明月，张佳美，等.　芦根多糖的提取及含量测定［J］. 安徽中医学院学报，2002,21(1):51.
       
       ［3］ 贡济宇，于 波，于 澎，等. 酚硫酸法测定灵芝多糖含量的实验研究［J］. 长春中医学院学报，2002，18（1）:45.
       
       ［4］ 程荷凤，蔡 春，李小凤.　化橘红多糖的分离纯化及其组成的气相色谱分析［J］. 广东医学院学报，1998，16（1）:15.
       
       ［5］ 吕志华，于广利，赵 峡,等. 不同标准品对HpGpC法测定多糖相对分子质量的影响［J］. 中国新药杂志，2002， 11（3）:220.　
       
       ［6］ 程 霜，冯泽静. 冬瓜多糖的分离与鉴定［J］. 粮油加工与食品机械，2002，9：44.
       
       ［7］ 商 澎，杨铁虹，贾 敏，等.当归多糖的分离、纯化及分析鉴定［J］. 第四军医大学学报，2001,22(14)：1311.
       
       ［8］ Hostettmannk,MarstonA (赵维民等译). 制备色谱技术在天然大分子物分离中的应用［M］. 北京:科学出版社，2000：256.