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       【关键词】  药用菊花；,,栽培类型；,,绿原酸；,,高效液相色谱
       摘要：目的测定并比较药用菊花不同栽培类型中绿原酸的含量。方法用分析纯甲醇回流提取，高效液相色谱法测定，流动相为0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液甲醇（70∶30），流速1.0 ml/min；检测波长为328 nm。结果21个菊花样品的绿原酸含量，以干品计在0.15%~0.63%之间，其中安徽省歙县的晚贡菊含量最高（0.63%），安徽省亳州市阴干的小亳菊含量最低（0.15%）。平均回收率（n=6）为100.4%，变异系数（RSD）为2.0%。结论  药用菊花中绿原酸含量因栽培类型和加工方法不同而存在差异。安徽省歙县的贡菊含量最高；硫熏的小亳菊高于阴干的小亳菊。
       关键词：药用菊花；  栽培类型；  绿原酸；  高效液相色谱
       Comparison on Content of Chlorogenic Acid from Different Cultured Flos Types of Medicinal Chrysanthemum morifolium
       CHEN Yuehua， LIANG Lixiang， YIN Jian ， CHEN  Lijun ， HU Kongfeng ， YANG Haixia
       (Xinyang Agricultural College, Xinyang, Henan 464000, China)
       Abstract：ObjectiveTo measure and compare the chlorogenic acid contents from different cultured flos types of medicinal Chrysanthemum morifolium .MethodsThe chlorogenic acid was extracted by analytically pure methanol and measured by high performance liquid chromatograph. The conditions for HPLC were as follows: the mobile phase, sodium dihydrogenphosphate buffer-methanol (70∶30) with a flow rate of 1.0ml/min; the detection wavelength 328nm. ResultsChlorogenic acid contents in 21 dry samples of flos from chrysanthemum were between 0.15% and 0.63%.The highest one was the flos of late chrysanthemum from county She, province Anhui, but the lowest was the small shade-dried chrysanthemum from City Bozhou, Province Anhui. The average recovery percentage was 100.4%and the mutant index (RSD) was 2.0%. ConclusionThe chlorogenic acid contents in the flos of medicinal Chrysanthemum morifolium manifest remarkably different by way of the cultured type and processed method. The content is the highest in the type from county She, province Anhui; and the content is higher in the type by sulfur fumigation than that in shade-drying.
       Key words：Flos of medicinal Chrysanthemum morifolium;   Cultured type;  Chlorogenic acid;  HPLC
   
　　菊花为菊科植物Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序，含绿原酸、挥发油、生物碱及黄酮等多种成分。菊花为常用中药，亦可作茶饮，其性味甘、苦，微寒，归肺、肝经，有散风清热、平肝明目之功效。用于风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花［1］。菊花按产地和加工方法不同分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”［1］。菊花因其产量高，价格便宜，饮用方便，作为保健饮料已经广为应用，而且有望在新兴的功能性食品，特别是抗衰老食品中发挥作用［2］。国外最新研究也发现菊花提取物有抗HIV作用［3］。国内外学者已在菊花的化学成分研究方面作了大量工作，其中绿原酸是一类重要成分，具有抑菌利胆作用［4］，而且绿原酸的药理活性与菊花的功效是相符的。《中国药典》中用高效液相色谱法测定菊花绿原酸含量［1］，本文在相同条件下用高效液相色谱法测定了21个样品的绿原酸含量并进行了比较。
       　　1  器材
       1.1  供试材料为200311采自8个产地的21个菊花样品。
       1.2  仪器与试药Waters高效液相色谱仪，515泵，2487紫外/可见检测器，Breeze色谱工作站。色谱柱：Novapak C18（150 mm×4.6 mm，4μm）；绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。
       　2  方法
       2.1   供试材料中含水量的测定具体方法见文献［1］ 。
       2.2  绿原酸的含量测定具体方法见文献［1］ 。
       2.2.1  色谱条件Waters高效液相色谱仪系统（515泵、2487紫外/可见检测器、Breeze色谱工作站），流动相为0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液甲醇（70∶30）；流速1 ml/min；检测波长328 nm。
       2.2.2  对照品溶液的制备称取绿原酸对照品10 mg，置棕色量瓶中，加水100 ml配制成每毫升中含绿原酸0.1 mg的溶液，即得。
       2.2.3   线性关系考察取对照品溶液，分别进样2，4，6，8，10 μl，依法测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程为：Y＝713 839X-756 267（r=0.999 8）。结果表明绿原酸在0.2~1.0μg范围内其进样量与峰面积呈良好的线性关系。
       2.2.4  供试品溶液的制备取样品粉末（过40目筛）1.0 g，置锥形瓶中，加50.0 ml甲醇，称重，回流提取2h，冷却，再称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，过滤，弃去初滤液，收集续滤液。吸取续滤液10 ml，在水浴上挥干甲醇，加氯仿5 ml，浸渍3 min，弃去氯仿，挥干氯仿，残渣加水适量使溶解，并转移至5 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
       2.2.5   样品测定吸取制备的供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定。绿原酸含量(%) ={［（Y+756267）/713839］1}×0.5     W×(1M)×100%      Y：峰面积    W：样品重量(g)　  M：含水量
       2.2.6  回收率考察取已测定含量的样品粉末1.0 g，共6份，加入绿原酸对照品各1.0 mg，按2.2.4方法制备供试品溶液，测定并计算回收率。结果回收率分别为98.2%，101.7%，99.3%，102.4%，101.3%，98.3%，平均值为100.4%，变异系数（RSD）为2.0%。
       　　3  结果与分析
       3.1  测定了21个菊花样品的绿原酸含量和含水量，并根据含水量计算出干品中绿原酸含量，结果见表1。结果显示21个样品的绿原酸含量在0.15%~0.63%之间，以安徽省歙县的晚贡菊含量最高（0.63%），明显高于《中国药典》（2000年版Ⅰ部）规定的最低标准（0.20%）；安徽省亳州市阴干的小亳菊最低（0.15%），未达到《中国药典》规定的标准；产自浙江省桐乡市的异种大白菊、晚小洋菊、小汤黄、大洋菊和江苏省射阳县的小白菊也未达到药典规定的最低标准。
       3.2  本实验中小亳菊有两种不同的加工方法，从结果可以看出硫熏小亳菊的绿原酸含量明显高于阴干的小亳菊。结果见表1。
       　4  讨论
       4.1  此次含量测定虽然有几个品种的绿原酸含量未达到《中国药典》规定的最低标准（0.20%），但从结果上看，浙江省桐乡市的异种大白菊和江苏省射阳县的小白菊含量都是0.19%，接近0.20%，如果将实验误差考虑在内，这两个品种的含量有可能达到最低标准。
       表1  菊花不同栽培类型及其加工品绿原酸的含量测定结果（略）
       图1  绿原酸对照品HPLC图（略）
       图2  样品中绿原酸HPLC图（略）
       4.2  浙江省桐乡市的早小洋菊（0.20%）高于晚小洋菊（0.174%），这可能与早收获有关，且二者均高于大洋菊（0.156%）。
       4.3   加工方法对绿原酸含量的影响方面，阴干的小亳菊（0.15%）明显低于硫熏的小亳菊（0.46%），可能是硫熏能减少绿原酸在干燥过程中的损失。
       4.4  有研究发现江苏省射阳县的红心菊、小白菊、大白菊、长瓣菊按传统蒸晒干燥其绿原酸含量明显高于摊晾后烘干者［5］。若按此结果将安徽省歙县的早贡菊、晚贡菊和黄药菊改为蒸晒干燥可能使含量测定结果更高，可考虑作为工业提取绿原酸的原料。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：254.
       ［2］  张福维，韩玉兰. 多次添料酶法提取菊花挥发油的研究［J］.辽宁农业科学，1999，（6）:11.
       ［3］  姜从良，芦金清，李  竣，等. 神农香菊中挥发油、总黄酮与杭菊花贡菊花的比较研究［J］. 湖北中医学院学报，2001，（3）:48.
       ［4］  梁光义.中药化学［M］.北京：人民卫生出版社，1998：236.
       ［5］  郭巧生，钱大玮，鞠建明，等. 药用白菊花4个栽培类型内在质量的比较研究［J］.中国中药杂志，2002,27（12）:896.
       (信阳农业高等专科学校，河南 信阳  464000）