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       【摘要】 
       目的探讨清毒汤对大鼠肝损伤内毒素血症的作用机制。方法建立硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠肝损伤内毒素血症模型，以清毒汤进行干预，通过血液生化及病理检查，观察其对内毒素血症大鼠肝功能、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内毒素（ET）的影响。结果清毒汤能明显降低TNF-α，ET的含量，减轻肝细胞坏死程度，与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。结论清毒汤能使ET含量、TNF-α水平降低是其对TAA所致大鼠肝损伤具有防护作用的机制之一。
       【关键词】  清毒汤 药效学 内毒素血症 大鼠
       
       清毒汤是由《伤寒论》中的小承气汤化裁而来。该方具有清热燥湿解毒、活血凉血育阴的功效。经临床验证清毒汤治疗慢性肝病肠源性内毒素症安全有效，用后可以迅速改善症状，抑制内毒素（ET）的产生，提高机体清除ET的能力，是重症肝病治疗过程中重要的辅助治疗药物［1］。为了进一步研究清毒汤的作用机制，我们采用硫代乙酰胺所致肝损伤模型进行了如下实验。
       1   材料与仪器
        1.1   动物  选用SD大鼠38只，体重200～220 g，雌雄兼用，清洁级。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）-2006-0003。
        1.2   药物  清毒汤，常规水煎制，生药含量为1.1 g/ml。
        1.3   试剂  硫代乙酰胺，由北京化学试剂公司提供，批号010629；戊巴比妥钠，北京通县育才精细化工厂生产，批号950427；鲎试剂盒，由上海伊化临床医学科技公司（上海市医学化验所）提供；丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）试剂盒，由Roche公司提供； 肿瘤坏死因子-α（TNF-α）放免试剂盒，由北京北方生物技术研究所提供。
        1.4   仪器  Reicheit-Jung 2040切片机德国产；BH-2光学显微镜，Olympus，日本；Qwin图像分析系统，Leica德国产；752C紫外可见分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；GC-911 γ放射免疫计数器，中国科学技术大学科技实业总公司产品；日立7170全自动生化分析仪，日本产。
       2   方法
        2.1   分组及处理    将28只大鼠随机分为3组：正常对照组10只，模型组9只，清毒汤组9只。 清毒汤组按照1   ml/100 g 体重给予灌胃，1 h后腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）600 mg/kg体重，分别于6，12h后再次灌胃给予清毒汤；模型组灌胃给予同容积的蒸馏水，1 h后腹腔注射TAA，剂量同清毒汤组，分别于6，12 h后再次灌胃给予相应等量的蒸馏水；正常对照组灌胃相应等量的蒸馏水和腹腔注射相应等量的生理盐水。注射24 h后，将各组大鼠以45 mg/kg体重的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，于腹主动脉无菌取血，分离血清、血浆，分别用于ALT，AST，TNF-α以及内毒素含量的测定。取肝脏，用10%福尔马林固定。
        2.2   指标测定
        2.2.1   肝脏损伤情况的病理形态学观察取肝脏，常规取材，石蜡包埋，HE染色。光镜下对其进行病理形态学观察，并用Qwin图像分析系统测定其损伤面积百分比。测定方法：在200×光镜下，随机选取10个视野，测定其损伤面积百分比，取其平均值。
        2.2.2  血清中ALT，AST活性浓度测定用日立7170全自动生化分析仪进行测定。
        2.2.3  血清中TNF-α含量测定按照试剂盒所附说明书，用GC-911 γ放射免疫计数器进行测定。
        2.2.4   血浆中内毒素含量测定按照试剂盒所附说明书，用752C紫外可见分光光度计进行测定。
        2.3   统计学处理结果以±s表示，采用方差分析进行检验。
       3  结果
        3.1   病理形态学观察结果 
        3.1.1  正常对照组肝脏结构正常，被膜不增厚，小叶境界清晰，肝板以小叶中央静脉为中心，呈放射状排列。肝板为一个细胞厚度。肝窦未见扩张，亦无狭窄。肝叶实质细胞未见变性及坏死。中央静脉壁无增厚，门管区三管清晰可见，无淋巴细胞浸润，未见结缔组织增生。间质细胞不增多。见图1。
        3.1.2  模型组肝脏结构基本正常，被膜不增厚，肝小叶境界尚清晰，肝板未见增厚。肝实质可见多发灶状水泡变性及气球样变，并可见新鲜的点状、灶状、带状及桥联状坏死。坏死灶可见细胞碎片，并见中性粒细胞、少量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润。浸润之炎性细胞可见退变及核碎裂。坏死灶内有处可见圆形嗜酸性小体。 点、灶状坏死多见于中央静脉旁小叶下静脉周围，严重处小叶中心带呈带状坏死，坏死灶有时可与邻近的中央带或周边带相连，构成桥连状坏死。见图2。
        3.1.3  清毒汤组所见与模型组相似，但点灶状坏死、中央带状坏死及桥连状坏死均较模型组为轻。见图3。
        图3  清毒汤组
        进一步的图像分析结果显示，清毒汤组的肝脏损伤面积百分比明显低于模型组。见表1。表1  各组大鼠肝脏的损伤情况模型组比较，△P<0.05, △△P<0.01
        3.2   各组大鼠血清中ALT,AST活性浓度的影响   结果见表2。表2  各组大鼠血清中ALT,AST活性浓度的变化与正常对照组比较，*P<0.05, **P<0.01;与模型组比较，△△P<0.01
        3.3   各组大鼠血清中TNF-α含量的影响结果见表3。表3  各组大鼠血清中TNF-α含量的变化（与模型组比较，△P<0.05, △△P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01
        3.4  各组大鼠血浆中内毒素含量的影响   见表4。表4  各组大鼠血浆中内毒素含量的变化 与正常对照组比较，**P<0.01； 与模型组比较， △△P<0.01
       4  讨论
        内毒素存在于革兰氏阴性细菌细胞壁外膜中,以脂多糖(LPS)为其主要成分。正常情况下肠道中的ET少量被肠道吸收，经门静脉进入肝脏后迅速被枯否细胞清除。肝病时，由于肝功能障碍，胆汁分泌减少可引起肠道菌群失调，革兰氏阴性菌细胞代谢增快，肠道内革兰氏阴性菌细胞壁LPS成分增多，也即ET增多，由于此时肝脏功能受损，不能完全清除过量的ET而使其在循环系统含量升高，同时肠道屏障结构破坏，ET过量易位，最终导致肠源性内毒素血症(IETM)［2］。
        对IETM的治疗，目前仍然是改善肠道环境，减少内毒素的产生和吸收，促进排泄，适当应用抗生素，调节肠道菌群等，疗效并不满意。在目前西医对内毒素血症无特效药的情况下，以清热解毒方剂为代表的中药无疑有举足轻重的作用［3］。实验证明大承气汤对急性肝损伤IETM生物学效应具有明显阻断作用，对IETM具有干预作用，对急性肝损伤大鼠具有防治作用［4］。
        清毒汤是由《伤寒论》中的小承气汤化裁而来。该方具有清热燥湿解毒、活血凉血育阴的功效，临床验证取得了较好的疗效；本实验研究也证实清毒汤具有清除ET、降低TNF-α含量、保护肝细胞的作用，光镜下观察到清毒汤组病理所见与模型组相似，但点灶状坏死、中央带状坏死及桥连状坏死均较模型组为轻，进一步的图像分析结果显示清毒汤组的肝脏损伤面积明显低于模型组。这一结果提示清毒汤能使ET含量降低是其对TAA所致的肝损伤具有防护作用的机制之一。
       【参考文献】
         ［1］ 王融冰　刘军民　吴云忠，等.清毒汤治疗肝病肠源性内毒素症临床观察［J］ .中西医结合肝病杂志，2004,14(3):135.
       
       ［2］ 朱宁川,陈 宁.肠道菌群失调与肠源性内毒素血症［J］.中国微生态学杂志, 2006, 16 (1): 61.
       
       ［3］ 余林中,江爱达,陈育尧,等.凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响［J］.中国中药杂志,2006,31 (3): 220.
       
       ［4］ 王春妍，杨世忠，迟宝荣.大承气汤对急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症生物学效应的阻断作用 ［J］.中西医结合肝病杂志 ，2006,16(6):356.