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       【关键词】  盐酸小檗碱；,,复方小檗片；,,含量测定；,,反相高效液相色谱法
       摘要：目的采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。方法用Kromasil色谱柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流动相∶乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500 ml∶500 ml∶3.0 g∶1.5 g），流速：1 ml・min-1，柱温：40℃，检测波长为345 nm。结果在0.021 2～0.233 2 μg之间，峰面积与进样量的线性关系为Y=3 513 092.99 X-15 938.76（r=0.999 9），平均回收率为97.22％。测得3批片剂中盐酸小檗碱的含量分别为0.772，0.748，0.749 mg/片。结论 所建方法简便、准确、重复性好，可用于复方小檗片中盐酸小檗碱的含量测定。
       关键词：盐酸小檗碱；  复方小檗片；  含量测定；  反相高效液相色谱法
       Determination of Berberine Contained in Prescription of Berberine Pill by RPHPLC
       DENG Fang， LIU Yuan*，LIU Chao，MENG Qingyan，GAO Zewen
       （Pharmaceutical College of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075,China ; Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041,China）
       Abstract：ObjectiveTo establish an RPHPLC method to determine berberine from prescription of berberine.MethodsThe column were Kromasil (5μm，250 mm×4.6 mm),the mobile phase consisted of methyl cyanide:water∶KDP∶SDS(500 ml∶500 ml∶3.0 mg∶1.5 mg),the flow rate was 1 ml/min and the UV detector was set at 345 nm.ResultsThe method displayed good linearity within the concentration ranges of 0.021 2～0.233 2μg(r=0.999 9). The average recovery was 97.22%. The contents of three lots of prescription of berberine were  0.772, 0.748，0.749 mg/ pill.ConclusionThis method is simple,accurate,replicate and suitable for the determination of berberine in prescription of berberine.
       Key words：Berberine;  Prescription of  berberine pill；  Determination;  RPHPLC
   
　　复方小檗片，由龙胆花、小檗皮、甘草等多味药材组成,含有龙胆碱、龙胆苦苷、三萜皂苷类成分、生物碱及莨菪类成分等［1］。具清热化痰，止咳平喘的功效，小檗碱是主要成分之一［2~4］。本实验利用HPLC法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。
       　　1  仪器与试药
       仪器：Waters2695Waters2996与SPD6AV紫外检测仪；试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。对照品：盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（07139906含量测定用）。
       　　2  方法与结果
       2.1  对照品及供试品溶液制备
       2.1.1  对照品溶液 精密称取盐酸小檗碱对照品2.12 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,即得（每毫升含盐酸小檗碱0.021 2 mg）。
       2.1.2  供试品溶液 ［5］取复方小檗片10片，除去薄膜衣，研细，取0.72 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置30 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
       2.2  色谱条件色谱柱：C18  250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500 ml∶500 ml∶3.0 g∶1.5 g）；流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；检测波长：345 nm。
       2.3  线性范围的考察精密量取上述盐酸小檗碱对照品溶液1，3，5，7，9，11 μl注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)，测定其峰面积，结果见表1，并以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，进行回归，得回归方程。
       表1  盐酸小檗碱线性关系考察结果（略）
       在所拟定的色谱条件下，盐酸小檗碱在0.021 2～0.233 2μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。
       2.4  空白实验取不含小檗皮的阴性片粉适量，按供试品溶液制备方法制备空白对照溶液，进样10 μl，记录色谱图(见图1)，可见其它成分对盐酸小檗碱的测定无干扰。
       图1  盐酸小檗碱对照品（a）、样品（b）和空白溶液（c）的HPLC图谱（略）
       2.5  精密度实验精密吸取盐酸小檗碱(0.021 2 mg/ml)对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积值结果见表2。
       表2  精密度实验结果（略）
       盐酸小檗碱的RSD为0.202％，以上结果表明，精密度良好。
       2.6  稳定性实验取样品供试液于0，2，4，6 h及8 h，进样10 μl，峰面积结果见表3。
       表3  稳定性实验结果（略）
       实验结果表明，样品供试液在8 h内稳定性良好。
       2.7  重复性实验取同一批样品，按上述色谱条件测定，记录色谱图(见图1)，并计算含量。结果见表4。
       表4  样品重复性实验测定（略）
       RSD为0.482％，上述实验表明，该方法重现性较好。
       2.8  加样回收率实验取已知含量的样品约0.36 g，精密称定，分别加入对照品溶液（0.021 2 mg/ml）24，30，36 ml，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并按下列公式计算回收率。结果见表5。回收率= 测得量（mg）-样品中盐酸小檗碱量（mg）     加入对照品量（mg）×100%
       表5  盐酸小檗碱加样回收收率实验结果（略）
       以上实验结果表明，该方法加样回收良好。
       2.9  供试品测定 3批供试品的测定结果见表6。
       表6  样品中盐酸小檗碱的含量测定（略）
       　　3  讨论
       由测定结果，结合《中华人民共和国卫生部药品标准・藏药》第1册，附一中对藏药材小檗皮的规定：“为甘肃小檗皮Berberis Kansuensis Schncid.及同属多种植物的干燥皮。”考虑到药材因种间、产地以及收购时间等各方面的因素对其主要有效成分小檗碱的影响，暂定本品每片含盐酸小檗碱的量不得少于0.6 mg。该法灵敏度高，结果准确，可用于复方小檗片中盐酸小檗碱的含量测定。
       　参考文献：
       ［1］  国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1986：496，521，454，594.
       ［2］  洛和生，王建华.中药、方剂的药理与临床研究进展［M］.广州：华南理工大学出版社，1991：95，138，347.
       ［3］  中国科学院西北高原研究所.藏药志［M］.西宁：青海人民出版社，1991：456，19，140.
       ［4］  江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1986：4148.
       ［5］  杨春生，杨风梅，欧阳彪.双波长薄层扫描法测定小檗皮中盐酸小檗碱的合量［J］.青海医药杂志 ，2001，31（8）：58.
       基金项目：四川省科技攻关资助项目（No.2005）
       
　　　　　　　国家民委项目（No.2004）；
       西南民族大学教学改革项目（No.2005）
       （成都中医药大学药学院，四川 成都  610075 ；西南民族大学少数民族药物研究所，四川 成都  610041）