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       【关键词】  西洋参；,,西洋红参；,,人参皂苷；,,拟人参皂苷；,,反相高效液相色谱；,,蒸发光检测器
       摘要：目的建立一种同时测定西洋参和西洋红参中拟人参皂苷和人参皂苷含量的方法。方法采用反相高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定。色谱条件：迪马公司 DiamonsilTM C18色谱柱(5μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-水 (71∶29) ；流速为0.95 ml/min。ELSD参数：漂移管温度40℃；氮气压力：2.8 Bar。结果在选定的色谱条件下，反相高效液相色谱－蒸发光检测法符合精密度、准确度、线性（r ＞ 0.999）的基本要求。3个浓度水平的回收率测定值在97.0%~104.9％之间，RSD 在1.47%~2.89％之间。结论该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好，可用于西洋参和西洋红参单体皂苷的含量测定。
       关键词：西洋参；  西洋红参；  人参皂苷；  拟人参皂苷；  反相高效液相色谱；  蒸发光检测器
       Determination of Ginsenosides in Panax quinquefolium L. and Red Panax quinquefolium L. by RP-HPLC-ELSD
       ZHAO Yan, LIU Jin-ping, LU Dan, LI Ping-ya*, MA Xing-long
       (Institute of Frontier Medical Science of Jilin University, Jilin, Changchun 130021, China; Jilin Provincial Tongbao Chinese Medicinal Materia Scientific & Technological Development Co. Ltd, Jilin, Jingyu 135206, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a simple method for determination of pseudoginsenosides and ginsenosides in Panax quinquefolium L. and Red Panax quinquefolium L. at the same time. MethodsReverse phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method with an evaporative light-scattering detector (ELSD) was performed on a 5μm DiamonsilTM C18  column (4.6 mm×250 mm）at ambient temperature. The mobile phase composition was methanol-water (71∶29). The flow rate was at 0.950ml・min-1. ELSD parameters were set as follows: nitrogen carrier gas pressure 2.8 Bar, drift tube temperature 40℃. ResultsThe method fulfills all the standard requirements of precision, accuracy and linearity. The recoveries of components at three concentration levels were: P-F11 98.9％,  P-RT5 101.4％, Re 100.5％, Rg2 100.4％, Rh1 99.8％, Rg3 100.0％, Rh2 100.2％ and Rd 103.8％. ConclusionRP-HPLC- ELSD method can give more accurate and sensitive results for the analyses of ginsenosides and pseudoginsenosides, especially for P-F11 and P-RT5 without chromophore, in Panax quinquefolium L. and Red Panax quinquefolium L.
       Key words：Panax quinquefolium L.;   Red Panax quinquefolium L.  ;   Ginsenosides;   Pseudoginsenosides;   RP-HPLC;   ELSD
   
　　西洋参 Panax quinquefolium L.又名花旗参，系五加科人参属植物，原产于加拿大和美国，具有补肺阴、清火、养胃生津之功效，用于肺虚咳血，潮热及肺胃津亏，气虚等。王筠默［1］综述了西洋参的药理作用，其具有中枢神经系统作用、心血管系统作用、消化系统作用、血液和造血系统作用、肝损伤保护作用、抗癌作用、免疫系统作用、抗衰老作用等。 迄今为止，中外学者已从西洋参中分离鉴定出的单体人参皂苷达60余种［2,3］。西洋参中淀粉含量较高，经蒸透、烘干可加工成西洋红参。对于西洋参加工新品种－西洋红参的研究，沈应凤等［4］报道了西洋红参中人参皂苷Rg1，Re, Rb1的含量；刘相武等［5］报道了西洋红参中的人参皂苷 Rg1，Re, Rb2, Rc, Rb3, Rd的含量。本文采用反相高效液相色谱-蒸发光法测定了西洋参和西洋红参中单体人参皂苷和拟人参皂苷的含量。
       　　1  仪器与试药
       1.1  仪器SHIMADZU LC-10AT 高效液相色谱仪（日本）； SEDEX 75 型蒸发光散射检测器(法国)； N2000色谱工作站数据处理系统(浙江大学智能信息工程研究所)。
       1.2  试药甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为纯净水；人参皂苷对照品由本实验室自制，纯度均大于99.0％；西洋参、西洋红参由吉林省通宝中药材技术开发有限责任公司提供。
       　　2  方法与结果
       2.1   色谱条件 色谱柱：Dikma DiamonsilTM C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）；柱温：室温；流动相：甲醇-水(71∶29), 流速：0.950 ml・min-1；ELSD参数：漂移管温度为40℃，氮气压力2.8 Bar。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取对照品拟人参皂苷 P-F11，P-RT5，人参皂苷Re，Rg2，Rh1，Rg3，Rh2和 Rd适量，加甲醇制成 Re，P-F11，P-RT5，Rg2，Rh1，Rg3，Rh2和 Rd分别为1.10，1.08，0.60，0.53，0.60，0.36，0.86和1.00 mg/ml的对照品混合溶液。
       2.3   供试品溶液的制备取样品适量，粉碎，取0.5 g，精密称定，置100 ml烧瓶中，加甲醇50 ml，加热回流，提取3次，3 h/次。合并提取液，回收甲醇并浓缩至干，残渣加水50 ml，加热使溶解，放冷，用水饱和正丁醇振摇提取6次，50 ml/次。合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为供试品溶液。
       2.4   线性关系的考察 精密量取对照品溶液2，4，8，10，12，16 μl分别依次注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积的自然对数为纵坐标，皂苷量的自然对数为横坐标作标准曲线，线性回归方程、相关系数 r值和线性范围见表1。
       表1  8种皂苷的线性关系（略）
       y：峰面积的自然对数；X：皂苷量的自然对数
       2.5  精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，连续重复进样5次，RSD在0.63%~1.91％之间，说明精密度良好。
       2.6  稳定性实验  取对照品溶液，分别在0，2，4，6，8 h精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，给出峰面积，RSD在0.98%~1.79%之间，说明对照品溶液在8 h内稳定。
       2.7  重现性实验 按“供试品溶液的制备”项下处理，平行制备5份样品，按“样品的测定”方法进行测定，结果Re，P-F11，P-RT5，Rg2，Rh1，Rg3，Rh2和 Rd的平均含量分别为：4.333，2.012，1.324，1.918，2.887，2.089，4.119和3.458 mg/g，RSD在1.10%~2.75％之间。
       2.8  加样回收率实验 取已知含量的西洋红参样品适量，分别准确加入已知量的各组分对照品，按“供试品溶液的制备”项下处理，配制成浓度为高、中、低3个水平的溶液，按“样品的测定”方法进行测定，计算加样回收率。结果见表2。
       表2  西洋红参加样回收率（略）
       2.9  样品的测定按供试品溶液制备方法制备西洋参和西洋红参供试品溶液，分别吸取对照品溶液10 μl和供试品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，采用外标法计算含量。色谱图见图1，结果见表3~4。
       a-对照品  b-西洋参样品  c-西洋红参样品
       图1  RP-HPLC-ELSD色谱图（略）
       表3  样品中人参皂苷的含量（略）
       表4  样品中人参皂苷的平均含量（略）
       　　3  讨论
       在加工红参全过程中,人参二醇型 (panaxadiol-type) 丙二酸单酰基人参皂苷Rb1 (简称 M-Rb1) 主要被水解转化为人参皂苷 Rg3 和 Rb1,其次为人参皂苷 Rd和 Rh2。人参三醇型  (panaxatriol-type) 中的人参皂苷 Re水解生成人参皂苷 Rg2， Rh1和 Rg1，人参皂苷Rg1，Rg2又可以水解生成人参皂苷 Rh1，而人参皂苷 Rg1，Rg2，Rg3，Rh1，Rh2是主要的抗肿瘤成分［6］，西洋参加工制成西洋红参后，这些成分的含量增加，其抗肿瘤活性进一步得到了加强。该方法用于测定西洋参和西洋红参中人参皂苷及拟人参皂苷单体皂苷的含量，简便、准确、灵敏度高、重现性好，尤其测定紫外无吸收的拟人参皂苷 P-F11和 P-RT5更为适用。该方法可用于西洋参和西洋红参的含量测定。
       　　参考文献：
       ［1］  王筠默.西洋参药理作用研究的最新进展［J］.人参研究, 2001，13（4）：2.
       ［2］  鲍建材,刘刚,郑友兰,等.西洋参中皂苷类成分的研究［J］.人参研究，2004, 16(1)：39.
       ［3］  孟祥颖,任跃英,李向高,等.西洋参中皂苷类成分的研究综述［J］.特产研究，2001,3：43.
       ［4］  沈应凤，王淑荣，杜东娜，等.西洋参加工新品种－ 西洋红参［J］.人参研究，2000,12(4)：39.
       ［5］  刘相武，刘中华，白淑芝，等.西洋红参单体皂苷类成分研究［J］.人参研究，2001,13(1)：21
       ［6］  李  杰，宋淑霞，吕占军.人参皂苷抗肿瘤作用的研究进展［J］.中国肿瘤生物治疗杂志，2004，11（1）：61.
       (吉林大学再生医学科学研究所，吉林 长春  130021；吉林省通宝中药材科技发展有限责任公司，吉林 靖宇  135206)