文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法；比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇∶0.1%磷酸=49∶51为流动相；流速为1ml/min；检测波长为280nm。结果肉桂酸在0.2～1 μg范围内线性关系良好，r=0.999 5，平均回收率为99.58%，RSD为0.95%。结论不同产地独角莲肉桂酸的含量范围为5.247 0～43.677 6 μg/g，差异较大。该方法测定准确，重复性好，可作为独角莲药材的质量控制方法。
       【关键词】  独角莲 肉桂酸 高效液相色谱法
       独角莲为天南星科梨头尖属植物独角莲Typhonium giganteum Engl.的块茎，具有祛风痰、定惊搐、解毒散结止痛的功能。临床应用于治疗脑血管病、面神经麻木、颈淋巴结核、慢性支气管炎等［1］，此外还用于美容祛斑方面。近年来有报道独角莲对瘤细胞具有细胞毒作用。本文以肉桂酸为考察指标，采用高效液相色谱法测定独角莲中肉桂酸含量，可有效控制独角莲药材质量。
       1    仪器和试药
       1.1  仪器岛津LC-10AS泵，岛津SPD-10A检测器，岛津UV-160A紫外分光光度仪，昆山KQ-250B型超声仪，Sartorius BP211D型电子天平。
       1.2   药品肉桂酸对照品，购于中国药品生物制品检定所；独角莲药材（均为鲜品，切片后自然干燥至水分符合规定），购于各产区，经黑龙江省药品检验所初东君主任药师鉴定符合《中国药典》2005版规定标准［2］。
       1.3  试剂甲醇为色谱纯（迪马公司）；磷酸为色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
       2    方法与结果
       2.1  色谱条件［3］色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇∶0.1%磷酸=49∶51；流速1 ml/min；检测波长280 nm；柱温为室温。按上述色谱条件，理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于2 500。
       2.2  对照品溶液的配制  精密称取肉桂酸对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成浓度为0.03 mg/ml的肉桂酸对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的配制与测定  取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，精密称定，加5%盐酸溶液1 ml搅拌均匀，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶液20 ml，室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，即得供试品溶液。
       2.4   检测波长的测定取肉桂酸对照品溶液，在200～400 nm波长进行光谱扫描，结果表明，肉桂酸在280 nm处有最大吸收。确立肉桂酸检测波长为280 nm。
       2.5   供试品提取条件的确定
       2.5.1   溶剂的选择根据肉桂酸溶解度拟选择甲醇、50%甲醇、三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚以及三氯甲烷-甲醇不同比例混合溶剂为提取溶剂。实验方法：取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，9份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀。分别加入不同溶剂20 ml，于室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表1）。结果显示，以三氯甲烷-甲醇（2∶1）为提取溶剂时，提取率最高，且无杂质干扰，故选择氯仿-甲醇（2∶1）作为提取溶剂。
       图1  肉桂酸对照品HPLC图（略）
       图2  独角莲药材HPLC图（略）
       2.5.2   提取方法筛选取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，3份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀，加入氯仿-甲醇（2∶1）20 ml。分别采取超声处理30 min、室温浸泡30 min和加热回流30 min 3种方法，滤过，精密吸取续滤液10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积（见表2）。结果显示，室温浸泡30 min，得肉桂酸含量最高，重复性较好，且方法简单易操作。
       表1  溶剂的选择结果（略）
       表2  提取方法筛选结果（略）
       2.5.3   提取时间的考察取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，5份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀，精密加入三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶剂20 ml，室温下分别浸泡10，20，30，45，60 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表3）。结果显示，提取时间为30，45，60 min时，肉桂酸含量最高，且无明显差异，故选择提取时间为30 min最佳。
       表3  提取时间的考察结果（略）
       2.6   线性关系考察精密量取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成浓度为1 mg/ml的对照品溶液，摇匀，再精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀释至10 ml，再分别注入高效液相色谱仪各10 μl，按上述色谱条件测定其峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=4 860.9X + 31 936，r=0.999 5，线性范围0.2～1μg，峰面积RSD=1.20％。
       2.7   精密度实验精密吸取同一份供试品溶液10 μl，重复进样6次，测定供试品中肉桂酸峰面积积分值。结果见表4。
       表4  精密度实验结果（略）
       2.8   重复性实验精密称取同一批独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，6份,分别制备供试品溶液。测定肉桂酸含量，结果见表5。
       表5  重复性实验结果（略）
       2.9   回收率实验取已知肉桂酸含量的独角莲药材粉末（过3号筛）1 g，6份，精密称定，分别加入6 μg/ml肉桂酸对照品1 ml，按照“2.3”项供试品溶液的制备方法操作。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl注入色谱仪。测得其峰面积，并计算回收率（见表6）。结果表明，平均回收率为99.58%，RSD为0.95%。
       表6  回收率实验结果（略）
       2.10   样品的含量测定（7个不同产地）取各产地独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，精密称定，置于具塞瓶中，加5%盐酸溶液1 ml搅拌均匀，加三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶剂20 ml，室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。测定，计算肉桂酸含量。结果见表7。
       表7  样品含量测定结果（略）
       “-”：未检出
       3    讨论
          
       在选用三氯甲烷-甲醇（2∶1）为提取溶剂时，未经过酸化处理时，峰面积较小。经过酸化处理后，提取液直接进样，虽然峰面积增大，但峰形呈“馒头峰”，保留时间提前，且有杂质峰。而以甲醇为提取溶剂时，虽然峰面积相对较小，但峰形较好，分离度高，且杂质峰少。所以在选择方法时，考虑应先酸化处理药粉，用三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶剂提取，将提取液挥干，用甲醇溶解后进行测定。根据肉桂酸受热时脱羧分解的性质，研究中考察了浸泡、超声、加热回流3种处理方法。结果显示，浸泡处理得到的供试品溶液中肉桂酸含量较高，经过如此处理发现，不仅提取率提高，而且分离度很好，杂质峰较少。
       
       实验中选择全国具有地域代表性的7个产地独角莲药材，测得肉桂酸的含量范围在5.247 0～43.677 6 μg/g之间。由此可知，肉桂酸在不同产地独角莲中含量差异极大，甚至个别产地药材中未检出，可能由于地域、采收季节、种植、加工过程等原因，导致了肉桂酸含量差异。本实验通过对独角莲中肉桂酸含量测定方法的研究，建立了测定准确、重复性好的方法。本法可作为独角莲及其制剂质量评价和质量控制方法。
       【参考文献】
         　　［1］ 孙淑芬,曾 艳,赵维诚. 独角莲抑制恶性肿瘤的实验研究［J］. 中医研究,1998,11(6):8.
       
       ［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：70.
       
       ［3］ 陈雪松，陈迪华，斯建勇.中药白附子的化学成分研究［J］.中草药，2000,31(7):495.