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       【摘要】 
       目的研究不同产地卷柏中总黄酮的含量测定方法。方法以阿曼托双黄酮为对照品，绘制标准曲线，将卷柏95％乙醇回流提取液，在337 nm波长下测定吸收度。结果总黄酮含量为1.52%，平均回收率为99.90 %，RSD=1.35%(n=6)，线性范围1.92～11.52 μg·ml-1，r=0.999 8。结论该法测定卷柏总黄酮含量，简单、迅速、准确，可用于卷柏的质量控制。
       【关键词】  卷柏 阿曼托双黄酮 总黄酮
       卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping.或垫状卷柏Selaginella pulvinata(Hook. et Grev.) Maxim.的干燥全草，具有活血通经功效。主要用于经闭痛经、跌打损伤等［1］病症。现代药理学研究证实，卷柏所含的阿曼托双黄酮、新柳杉双黄酮［2～4］等黄酮类化合物，具有抗脂质过氧化和清除自由基的作用，对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用［5］。本研究采用紫外分光光度法测定了全国10批不同产地卷柏中总黄酮的含量。
       1    仪器与试药
       1.1    仪器岛津UV-2201紫外分光光度计；AB204-N万分之一电子天平；AE240十万分之一电子天平；DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司），旋转蒸发器SB-1000(上海爱朗仪器有限公司)。
       1.2    试药卷柏药材产地分别为安徽、北京、河南、新疆、山东、云南、湖北、河北、江西、甘肃，共收集10批样品，经过河南中医院药学院生药学科陈随清教授鉴定为卷柏科卷柏属卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping.的全草。阿曼托双黄酮为本实验室自制，纯度达到99%以上，水为超纯水，乙醇等试剂均为分析纯。
       2    方法与结果
       2.1    供试品溶液及对照品溶液的制备
       2.1.1  供试品溶液精密称取卷柏药材（过3号筛）粉末约4.00 g，置100 ml圆底烧瓶中，加95％乙醇40 ml，85 ℃回流2 次，2 h/次，提取液浓缩，真空干燥。精密称取干燥恒重的提取物约3.00 mg，置100 ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
       2.1.2  对照品溶液精密称取干燥恒重的阿曼托双黄酮2.00 mg，置25 ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
       2.2    测定波长的选择取对照品溶液及供试品溶液，在190～800 nm波长范围内测定吸收光谱。结果见图1～2。
       图1  对照品阿曼托双黄酮溶液吸收光谱图（略）
       图2  供试品溶液吸收光谱图（略）
       
       对照品阿曼托双黄酮溶液和供试品溶液在270 nm和337 nm处均有较大吸收。由于270 nm靠近溶剂末端吸收，容易对样品测定造成干扰，故选337 nm为测定波长。
       2.3  线性关系的考察精密取配置好的对照品溶液0，1，2，3，4，5，6 ml置25 ml容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，摇匀，在337 nm处测定其吸收度(Y)值，并以吸收度(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程Y = 52.147 X + 0.028，r=0.999 9 (n=7)。结果表明，对照品在1.92～11.52 μg·ml-1范围内线性关系良好。
       2.4    精密度实验精密吸取对照品溶液6份，每份0.5 ml，分别置25 ml容量瓶中，95%乙醇定容至刻度，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算供试品溶液中总黄酮含量，求得RSD为0.88％，显示精密度良好。
       2.5    重复性实验精密称取同一样品（产地：河南）适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液6份，于337 nm处测定吸收度。由标准曲线按外标法计算供试品溶液中总黄酮含量，求得RSD为0.70％，表明本测定方法的重复性良好。
       2.6    稳定性实验取同一样品(产地：河南) 适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24，48 h测定吸收度，计算总黄酮含量，结果RSD为0.21％，说明供试品溶液在48 h内稳定。
       2.7    回收率实验 照“2.1”方法制备供试品(产地：河南)乙醇提取物，精密称取已知含量的卷柏乙醇提取物6份,每份约100.00 mg，分别精密加入对照品溶液适量，按“2.1”项下供试品溶液的制备方法配制回收率供试品溶液，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算总黄酮含量，计算回收率。结果见表1。
       表1  回收率考察（略）
       2.8    样品测定分别精密称取10批不同产地卷柏药材粉末各4.0 g，按“2.1”方法制备供试品溶液，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算总黄酮平均含量达1.52%。结果见表2。
       表2  不同产地样品中总黄酮含量测定结果（略）
       3  讨论
          
       在制备样品溶液时，比较水煮、超声、回流等不同提取方法，发现回流提取得到的阿曼托双黄酮的含量较高，故采用回流提取的方法对样品进行处理。
       
       在实验过程中参照满山红中总黄酮含量测定方法［1］，以AlCl3为显色剂，利用可见分光光度法测定卷柏总黄酮的含量，结果表明所选波长及其显色方法很不稳定，误差较大；进而参照半枝莲和淫羊藿总黄酮含量测定的紫外比色法［1］，以阿曼托双黄酮为对照品，根据黄酮类成分在337 nm下具有紫外吸收的特点，采用紫外分光光度法在337 nm下测定卷柏总黄酮的含量。本研究方法操作简便，稳定性好，可用于卷柏总黄酮的含量测定。
       
       测定了10批不同产地卷柏药材中总黄酮的含量，结果平均含量为1.52%，最低为云南产含量只有0.87%，最高为山东产含量为2.21%，不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮的含量有差异，说明卷柏中总黄酮的含量受地质、环境、气候的影响，这为环境因子与药材含量之间的相关性研究提供了良好的基础。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2005：77，157，229，396．
       
       ［2］ 毕跃峰，郑晓珂，冯卫生，等．卷柏属植物化学成分与药理活性［J］．国外医药·植物药分册，2002，17（3）：97．
       
       ［3］ 毕跃峰，郑晓珂，冯卫生．卷柏中化学成分的分离与结构鉴定［J］．药学学报，2004，39（1）：41．
       
       ［4］ 郑晓珂，毕跃峰，冯卫生，等．卷柏中化学成分［J］．药学学报，2004，39（14）：228．
       
       ［5］ 徐 智，贾素洁，谭桂山，等．垫状卷柏中双黄酮药理活性的研究［J］．中国现代医学杂志，2004，14(14)：88．