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       【摘要】 
       目的为较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术在现代中药制剂中的推广应用提供实验依据。方法以血清雌激素（SE2）、黄体生成激素（LH）为指标采用摘除大鼠两侧卵巢建立更年期综合征动物模型，采用乙烯雌酚片、更年康片为对照药，研究两种不同工艺制备的更年颗粒对血清雌激素（SE2）、黄体生成激素（LH）水平的影响。结果更年颗粒能增加更年期综合征模型大鼠的子宫重量，能提高雌激素SE2水平；降低促黄体生成激素LH水平；大部分指标中，采用较先进SFE-CO2技术、生物包合技术制备的更年颗粒均优于采用一般水蒸气蒸馏技术制备的更年颗粒样品。结论采用较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术能够提高更年颗粒的疗效，为较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术推广应用提供了试验依据。
       【关键词】  更年颗粒 更年期 激素水平
       更年期综合征为妇科常见病、多发病。乃因妇女绝经前后，卵巢功能低下，雌激素分泌减少，所引起的植物神经功能紊乱而出现的一系列症候群，该病具有内分泌功能障碍与植物神经功能失调的特征，一般多发生于50岁左右。女性更年期综合征主要表现均有不同程度的月经紊乱、潮热汗出、烦躁易怒、心悸失眠、胸闷头痛、情志异常、记忆力减退、腰腿酸痛软，食少便溏和萎靡倦怠等阳虚症状以及免疫功能下降等。
       
       进入更年期后，随着卵巢功能衰退，雌激素水平下降，诱导下丘脑弓状核和室旁核脉冲式分泌促性腺激素释放激素至门脉循环，进而刺激垂体释放FSH 和LH 增加。经全身检查排除心脑血管、精神神经、肝、肾、造血系统等方面疾病及双侧卵巢切除、卵巢肿瘤和卵巢功能早衰、甲状腺功能亢进者，血清雌激素（SE2）水平均有不同程度的下降，卵泡刺激素（FSH）及黄体生成激素（LH）水平升高。中医认为，更年期肾气渐衰，天癸将绝，冲任胞宫功能减退，月经渐趋失调而致断绝。
       
       更年颗粒剂由白芍、当归等组成，功能滋阴养肝、补中益气、镇静安神。用于更年期综合征，症见潮热汗出，眩晕，耳鸣，失眠，烦躁不安等，亦适用于体虚无力，神经衰弱，精神抑郁者。本实验以血清雌激素（SE2）、黄体生成激素（LH）为指标，研究两种不同工艺制备的更年颗粒对血清雌激素（SE2）、黄体生成激素（LH）水平的影响。
       1    试药与材料
       1.1   药物与试剂更年颗粒样品1（传统工艺制备更年颗粒）： 人参叶醇提，经浓缩干燥得醇提浸膏粉备用；白术、香附、当归、砂仁等4味药材加5倍量水蒸馏提取5 h，收集挥发油备用，药渣与余药加水煎煮，经浓缩干燥得水提浸膏粉，与醇提浸膏粉合并，加糊精、β-CD适量，混匀，制粒，喷入挥发油，即得。
       
       更年颗粒样品2（采用SFE-CO2技术、生物包合技术制备更年颗粒）：人参叶醇提，经浓缩干燥得醇提浸膏粉备用；白术、香附、当归、砂仁等4味药材在加50 ml乙醇为夹带剂，萃取温度40～45℃，萃取压力25～30 MPa，解析压力8～10 MPa，CO2流量10～12 L/h的条件下进行SFE-CO2提取，收集提取物，提取物采用饱和水溶液法进行β-CD包合，制得β-CD包合物，备用，药渣与余药加水煎煮，经浓缩干燥得水提浸膏粉，与醇提浸膏粉合并，加糊精适量，混匀，制粒，加入β-CD包合物，混匀，即得。
       
       药材购自南方医院。更年康片，0.3 g/片，广州白云山中药厂生产，批号04033203；乙烯雌酚片，0.1 g/片，广州侨光制药厂生产，批号050203。
       
       雌激素放射免疫分析药盒、促黄体生成激素放射免疫分析药盒均购自天津市协和医药科技有限公司。戊巴比妥钠及其它试剂均为分析纯。
       1.2   动物SD大鼠，雌性，由第一军医大学实验动物中心提供，动物饲养合格证：粤医动字2002009号。
       1.3   仪器DL-45RC-L冷冻离心机（上海申科）；SN-682放射免疫γ计数器（上海核福光电仪器有限公司）。
       2    方法与结果
       2.1   更年期综合征动物模型建立大鼠用3％的戊巴比妥钠以40 mg/kg腹腔注射［1］，于左右最末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2 cm交叉处，切开皮肤和背肌，摘除两侧卵巢，缝合切口。术后3 d开始阴道涂片，连续5 d，以证明去势彻底。
       2.2   分组与给药随机取8只大鼠，作为空白对照组，不予任何处理，其他大鼠造模成功后，随机分为模型组，乙烯雌酚组，更年康组，更年颗粒样品1中、低剂量组，更年颗粒样品2中、低剂量组，每组8只，大鼠按体重比与人用剂量比较计算出大鼠剂量［2］。
       2.2.1  空白对照不给予任何处理。
       2.2.2  模型对照组给予生理盐水1 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.3  乙烯雌酚组以乙烯雌酚片剂溶于水，制成2.3 μg/ml（1片→216ml），给予 1 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.4  更年康组以更年康片溶于水，制成3%（1片→18 ml）浓度，给予1 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.5  更年颗粒样品1中剂量组以更年颗粒样品1溶于水，制成10%浓度，以 1.0 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.6  更年颗粒样品1低剂量组以更年颗粒样品1溶于水，制成10%浓度，以0.5 ml/100g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.7  更年颗粒样品2中剂量组以更年颗粒样品2溶于水，制成10%浓度，以 1.0 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.2.8  更年颗粒样品2低剂量组以更年颗粒样品2溶于水，制成10%浓度，以 0.5 ml/100 g体重灌胃，1次/d，连续30 d。
       2.3  处理方法与结果末次给药后1h，分别称取体重，处死动物，取血测定雌激素SE2、促黄体生成激素，分取子宫称取重量。结果见表1。
       
       雌激素测定法：从冰箱中取出雌激素放射免疫分析药盒，按其提供的说明书依次操作，经放射免疫γ计数器依次测出每个样本含量。    促黄体生成激素测定法：从冰箱中取出促黄体生成激素放射免疫分析药盒，按其提供的说明书操作方法依次操作，经放射免疫γ计数器依次测出每个样本含量。
       表1  更年颗粒对激素水平的影响（略）
       *P<0.05，模型对照组与各组比较；# P<0.05，同剂量的更年颗粒样品1与更年颗粒样品；n=8
       3  讨论
          
       结果表明，子宫重量、雌激素SE2、促黄体生成激素LH等三项指标，模型对照组与空白对照组均有显著性差异，说明模型已形成。
       
       体重指标中，乙烯雌酚组、更年康组、更年颗粒样品1中剂量组、更年颗粒样品1低剂量组、更年颗粒样品2中剂量组、更年颗粒样品2低剂量组等与模型对照组无显著性差异，但从数值上看，各组还是优于模型对照组，更年颗粒各组也优于更年康组及乙烯雌酚组。
       
       子宫重量、雌激素SE2、促黄体生成激素LH等三项指标中，乙烯雌酚组、更年康组、更年颗粒样品1中剂量组、更年颗粒样品1低剂量组、更年颗粒样品2中剂量组、更年颗粒样品2低剂量组等与模型对照组均有显著性差异，说明乙烯雌酚片、更年康片、更年颗粒能增加更年期综合征模型大鼠的子宫重量，能提高雌激素水平，降低促黄体生成激素水平，从而有利于更年期综合征的治疗。另外从数值上看，更年颗粒各组也优于更年康组。
       
       更年颗粒组之间，SE2水平同剂量的更年颗粒样品1与更年颗粒样品2之间有显著性差异，其它指标无显著性差异，但从各指标数值上看，更年颗粒样品2均优于更年颗粒样品1。
       
       通过对更年大鼠激素水平影响实验表明更年颗粒能增加更年期综合征模型大鼠的子宫重量，能提高雌激素SE2水平：降低促黄体生成激素LH水平，从而将有利于更年期综合征的治疗，改善更年期综合征的症状。
       
       通过比较采用一般水蒸气蒸馏技术制备的更年颗粒样品与采用较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术制备的更年颗粒，实验表明大部分指标后者均优于前者，从而说明了采用较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术能够提高更年颗粒的疗效，也为较先进的SFE-CO2技术、生物包合技术推广应用提供了实验依据。
       【参考文献】
         　　［1］ 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1994：1496.
       
       ［2］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2006：1169.