高效液相色谱法测定藿香正气水中橙皮苷等4种成分的含量
作者：刘永刚，卢建秋，刘珍清，韩静，张欣，张伟
《时珍国医国药》 2006年 第10期
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【关键词】 藿香正气水；,,橙皮苷；,,甘草苷；,,厚朴酚；,,和厚朴酚；,,高效液相色谱法,
摘要：目的建立以高效液相色谱法测定藿香正气水中橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚含量的方法。方法色谱柱为 C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），梯度洗脱；检测波长 285 nm；流速0.8 ml/min。结果橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和厚朴酚进样量0.091 1~2.277 5，1.44~36，0.594 6~14.865 ，1.086~27.15 μg之间呈良好的线性关系；它们的平均回收率为99.48%（RSD=0.979 7%），99.505%（RSD=1.22%），98.89%（RSD=1.201 1%）和98.89%（RSD=1.07%）。结论该方法稳定可靠，重现性好，提供了藿香正气水的质量控制方法。
关键词：藿香正气水； 橙皮苷； 甘草苷； 厚朴酚； 和厚朴酚； 高效液相色谱法
Determination of Liquiritin, Hesperidin， Honokiol and Magnolo in Huoxiangzhengqi Water by HPLC
LIU Yong gang,LU Jian qiu,LIU Zhen qing,HAN Jing, ZHANG Xin,ZHANG Wei
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029，China；harmacy College of Jilin University, Changchun 130021,China)
Abstract：ObjectiveTo establish the quantitative method to determine the content of liquiritin，hesperidin，honokiol and magnolo in Huoxiangzhengqi water by HPLC.MethodsUsing C18 reverse phase，eluted in gradient mode. The detection wavelength was at 285nm and the flow rate was at 0.8 ml・min-1. ResultsA good linearity of four components were found over the concentration range of 0.091 1~2.277 5，1.44~36，0.594 6~14.86， 1.086~27.15 μg respectively，the average recoveries of them were 99.51%，99.49 %，99.89% ，99.89% respectively. ConclusionThe method was accurate and reliable with good reproducibility，can be used for the determination of liquiritin, hesperidin, honokiol and Magnolo in Huoxiangzhengqi water.
Key words：Huoxiangzhengqi water； Iquiritin； Hesperidin ； Honokiol； Magnolo; HPLC
藿香正气水是根据传统经典名方生产的中药制剂，临床应用广泛。藿香正气水是由甘草、陈皮、厚朴等多味中药制成的中成药。具有解表祛暑、化湿和中［1］等功效。藿香正气水标准收载2005版《中国药典》，标准中只有厚朴的含量测定。标准中橙皮苷的含量也有相关文献报道［2］，而没有发现藿香正气水多成分含量的报道，故本实验采用高效液相色谱法，对藿香正气水中多成分橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚进行了含量测定。本法操作简便，测定准确，重现性好，可作为控制该制剂内在质量的依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪，包括四元泵，DAD二极管阵列检测器，Chemstations化学工作站。对照品橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，水为二蒸水。其他试剂均为分析纯。D101大孔树脂由天津市大钧科技开发有限公司生产。藿香正气水购自北京同仁堂科技股份有限公司（批号：4142480）
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：Agilent C18（5 μm×2.1 mm×25 cm）色谱柱；检测波长：285 nm；流动相为0.1%甲酸水溶液（A） 乙腈（B）；梯度洗脱，10％B 35 min 25 ％B 40 min50％B60 min60％B70 min70％B, 流速0.8 ml/min；检测波长285nm；自动进样10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚对照品各适量，用甲醇（色谱纯）制成含0.72 mg/ml甘草苷溶液、0.045 55 mg/ml橙皮苷溶液，0.297 3 mg/ml厚朴酚和0.543 0 mg/ml 和厚朴酚溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备精密量取藿香正气水10 ml,过大孔树脂柱（径高比1∶8），然后用4倍量水（树脂体积）冲洗，弃掉，然后用4倍量（树脂体积）95%的乙醇冲洗，蒸干，用乙醇定容在10 ml的容量瓶中，经0.45 μm滤膜过滤后进样。
样品色谱图
对照品色谱图
图1 液相色谱图（略）
2.3 标准曲线的绘制精密吸收对照品溶液各2，4，8，10，50 μl分别注入液相色谱，以进样体积为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，得4条直线，橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚回归方程和相关系数分别为 Y=984.417 4X-2.848 19, r=0.999 90；Y=505 4.937 X+0.612 037， r=0.999 9； Y=489 7.158 X-3.597 58，r=0.999 2； Y=490 7.677 X+1.809 657 ，R=0.999 2,结果表明在进样量 0.091 1~2.277 5 μg，1.44~36 μg，0.594 6~14.865 μg，1.086~27.15 μg之 间，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液，注入液相色谱仪，重复进样6次，结果橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚的峰面积的 。RSD分别为0.910 3％，0.795 2%，1.102 3%和1.253 4％。
2.5 重现性实验按样品测定方法对5份样品进行测定，结果发现橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚的平均含量的 RSD分别为1.455 2%，2.305 6%，2.401 8%和1.865 4%。
2.6 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，依正文色谱条件，分别在0，4，8，12，24 h注入液相色谱测定，结果橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚的 RSD分别为0.861 6％，1.785 3%，1.523 1% 和1.576 4%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。
表1 甘草苷回收率实验结果（略）
2.7 回收率实验 取已知含量的供试品（橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚含量为0.072 53，0.155 70，0.416 35，0.191 49 mg/ml）5份，分别精密加入橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚对照品适量，依法测定，计算回收率，结果它们平均回收率分别为99.51%，99.49 %，99.89% ， 99.89 %。
表2 橙皮苷回收率实验结果（略）
表3 厚朴酚回收率实验结果（略）
表4 和厚朴酚回收率实验结果（略）
2.8 空白试验按处方制备3种空白样品，按样品测定项下处理成空白供试品进行测定。结果无干扰。
2.9 样品测定按上述方法测定3批样品含量。结果见表5。
表5 藿香正气水中橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和厚朴酚的测定结果（略）
3 讨论
3.1 本文建立了高效液相测定藿香正气水中橙皮苷、甘草苷、厚朴酚和和厚朴酚含量的方法，为进一步完善藿香正气水的质量控制标准提供了准确、简便、可行的测定方法［3］。
3.2 在流动相的选择上。我们考虑了乙腈与水和甲酸与甲醇 0.1%的甲酸溶液的系统，发现乙腈与水的系统更好一些。
3.3 研究建立的藿香正气水4种成分含量测定方法，是对2005年版《中国药典》的一个有效补充和提高，并且本次样品的处理用了大孔树脂的方法，减少了极性大的成分对色谱条件的干扰。
参考文献：
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：6.
［2］ 熊胜元，李洪刚.高效液相色谱法测定藿香正气口服液中橙皮苷含量［J］.中国药业，2004，13（3）：45.
［3］ 沙东旭，张满来.HPLC ELSD测定三七药材及其制剂中三七皂苷 R、人参皂苷 Rg1及 Rb1的含量［J］.中国中药杂志，2005，30（2）：112.
(北京中医药大学，北京 100029； 吉林大学药学院，吉林 长春 130021)