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       【摘要】 
       目的考察丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液在0.9％氯化钠注射液中配伍的稳定性。方法采用反相高效液相色谱法梯度洗脱测定配伍液中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B在6 h内含量，并测定其24 h在25℃ pH值。结果主要成分丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量均无显著变化；丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液配伍后24 h内pH基本稳定。结论丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液配伍后pH值和丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B的质量在6 h内基本稳定。
       【关键词】  反相高效液相色谱法 丹红注射液 丹参素 原儿茶醛 丹酚酸B 胞磷胆碱钠注射液 配伍 稳定性
       由丹参、红花水溶液提取精制而成的丹红注射液，其有效成分主要为水溶性酚酸类成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B等，具有抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化及保护心脏微血管内皮细胞［1］等作用，临床主要用于治疗心脑血管疾病。丹红注射液能否与其它药物配伍应用尚未见相关文献报道。本实验模拟临床用药浓度，考察丹红注射液在25℃时与胞磷胆碱钠注射液在0.9％氯化钠注射液中配伍后pH及外观和丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B的含量的变化，为临床用药提供参考［2，3］。
       1  仪器与试剂
          
       美国Agilent1200型高效液相色谱仪，包括G1311A四元梯度泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1316A二极管阵列检测器、G1322A在线脱气机;TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析）。pHS-25数显pH计（上海精密科学仪器有限公司)；DK-98-1电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。
       
       丹红注射液（济南步长制药有限公司，规格：10 ml/支，批号：070139）；丹参素钠对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110855-200405）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110810-200506）；丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200504）；胞磷胆碱钠注射液（齐鲁制药有限公司，规格：2 ml: 0.25 g，批号：6100051FB）； 0.9％氯化钠注射液（石家庄四药有限公司，规格：500 ml: 4.5 g，批号：070101113）；甲醇(色谱纯,美国TEDIA公司），磷酸为分析纯，水为超纯水（Milli-Q）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相采用二元体系，A为甲醇，B为0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱程序为：0 min（10%A，90%B），15 min（25%A，75%B），30 min（50%A，50%B），40 min（10%A，90%B）；柱温为 30℃；体积流量为1 ml·min-1，进样量为20 μl；检测波长为281 nm。色谱图见图1～4。
       2.2  标准曲线的制备精密称取对照品丹参素钠10.4 mg、原儿茶醛11.0 mg、丹酚酸B 10.3 mg分别置10 ml容量瓶中，加50%甲醇水溶液溶解，并稀释至刻度，混匀，作为对照品储备溶液。精密吸取3种对照品贮备液适量，加50％甲醇水溶液稀释准确配制含丹参素0.8 mg·ml-1、原儿茶醛0.18 mg·ml-1、丹酚酸B 0.3 mg·ml-1的混合对照品溶液，在上述色谱条件下，分别自动进样5，10，20，40，60 μl。分别以丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B峰面积积分值（Y）为纵坐标，以质量浓度 (X，μg· ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线回归方程及相关系数:丹参素为Y=9.864 5X-7.551 9,r=0.999 9, 线性范围为17.64～211.68 μg·ml-1；原儿茶醛为Y=77.35X+6.187 7,r=1, 线性范围为4.95～59.4 μg·ml-1；丹酚酸B为Y=16.852X+6.187 7,r=0.999 8,线性范围为7.73～92.7 μg·ml-1。3种定量成分在其线性范围内，线性关系良好。
       图1  混合对照品溶液色谱图（略）
       图2  丹红注射液色谱图（略）
       2.3  精密度实验取标准曲线的中间浓度点，配制丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B的对照品混合溶液，连续进样测定7次，以峰面积计算3种有效成分的平均相对标准偏差RSD分别为0.64％，1.57％和0.51％。
       2.4  重复性实验取同一批次丹红注射液（批号070139）6份，按供试品溶液的制备方法平行配制6份供试液，按“2.1” 项下色谱条件，分别进样20 μl，连续测定6次，记录色谱图和峰面积，结果表明本方法重复性良好，以峰面积计算丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的RSD分别为0.60%,0.14%和0.57%。
       图3  胞磷胆碱钠注射液色谱图（略）
       图4  丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液的配伍液色谱图（略）
       2.5  加样回收率实验精密吸取已知含量的丹红注射液0.4 ml，置10 ml容量瓶中，分别加入一定量丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B对照品贮备液，加超纯水稀释定容，混匀，平行配制6份，即为加样回收实验供试液。进样量20 μl,连续测定6次，以峰面积计算丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的平均回收率分别为100.8％，99.5％和100.5％。
       2.6  配伍稳定性的考察
       2.6.1  配伍液的制备模拟临床用药浓度，精密吸取丹红注射液4 ml于50 ml量瓶中，精密加入胞磷胆碱钠注射液1.6 ml，加0.9％氯化钠注射液至刻度，混匀。
       2.6.2  pH值的测定取“2.6.1”项下配伍溶液，在恒温25℃条件下，分别于0，0.5，1，2，3，4，6，8，12，24 h测定配伍液的pH值，并观察其外观变化情况。配伍液在24 h内均为浅黄棕色澄明液体，颜色无变化，无浑浊、沉淀及气泡产生。配伍液在24 h内的pH值无显著变化。结果见表1。
       表1  丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液在0.9％氯化钠注射液中配伍〔（25±1）℃〕的pH值变化（略）
       2.6.3  含量测定取“2.6.1”项下配伍溶液，经0.45 μm滤膜滤过后，按“2.1”项下色谱条件，分别在0，1，2，3，4，5，6 h自动进样20 μl，测定其峰面积。所得峰面积数据代入回归方程，以0h的含量为100％，计算配伍溶液各时间点的相对百分含量，结果：在6 h内配伍液中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量、峰形、峰位和保留时间均无明显变化。结果见表2。
       表2  丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液在0.9％氯化钠注射液中配伍3种成分的含量变化（略）
       3  讨论
          
       本实验通过反复试验选定的色谱条件，吸收峰数目多，峰形对称，定量成分的色谱峰均能有效的分离，保留时间适宜，丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B对照品的保留时间tR(min)分别为8.69，12.97，32.76。对照品丹参素钠是钠盐形式，但在流动相为酸性的条件下，高效液相色谱法所测得的实际是丹参素的色谱峰和数据。
       
       丹红注射液与胞磷胆碱钠注射液在0.9％氯化钠注射液中配伍24 h内，外观及pH值均无显著变化，6 h内丹红注射液中3种酚酸类成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B的含量、峰形、保留时间均无明显变化，丹红注射液中3种酚酸类有效成分的质量稳定。
       【参考文献】
         　　［1］ 韦英杰，李 萍，李松林.高效液相二极管列检法同时测定复方丹参制剂中7个成分的含量［J］.分析化学，2006，34（12）：1702.
       
       ［2］ 潘英妮，袁 丹，付文卫，等. HPLC法测定丹参类注射液中4种水溶性成分含量［J］.沈阳药科大学学报，2004，21（3）：196.
       
       ［3］ 李国正，赵淑杰，王宝琹. HPLC法测定丹红注射液中丹参素的含量［J］.中药新药与临床药理，1999，10（2）：110.