独一味中黄酮类成分的含量测定
作者：张凤， 位华， 杨阳， 孙连娜， 陈万生*
作者单位：中国人民解放军第二军医大学药学院，上海 200433；中国人民解放军第二军医大学附属长征医院药学部，上海 200003
《时珍国医国药》 2009年 第5期
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【摘要】
目的考察不同产地独一味药材品质。方法根据2005版《中国药典》，采用分光光度法测定独一味中的总黄酮含量，RP-HPLC法测定黄酮类成分木犀草素的含量。结果测定了西藏江孜等6个不同产地独一味中木犀草素和总黄酮的含量。结论 不同产地、同一产地不同部位独一味中木犀草素和总黄酮含量差异很大，其品质差异因素有待进一步考察。
【关键词】 ：独一味 黄酮类 木犀草素 分光光度法 高效液相色谱
Determination of Flavonoids in Lamiophlomis rotata(Benth.) Kudo
ZHANG Feng, WEI Hua, YANG Yang, SUN Lianna, CHEN Wansheng*
(School of Pharmacology, Second Military Medical University, Shanghai 200433,China；Department of Pharmacology, the Affiliated Changzheng Hospital of Second Military Medical University, Shanghai 200003,China)
Abstract：ObjectiveTo investigate the quality of Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo. MethodsAccording to Pharmacopoeia of the People"s Republic of China, ultraviolet-visible spectrophotometry and HPLC were used for the determination of the total flavonoids and luteolin, respectively. ResultsThe contents of the total flavonoids and luteolin were measured in Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo from six different areas. ConclusionThe contents of the total flavonoids and luteolin are different from different areas, and vary in different parts in the herb, and the influence factors of the quality should be investigated.
Key words：Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo; Flavonoids; Luteolin; Ultraviolet-visible spectrophotometry; HPLC
独一味Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo为唇形科独一味属植物，主要分布于西藏、青海等省，为藏族和蒙古族等民间传统常用草药［1］。独一味主要含有黄酮类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类等成分［2］，具有消炎止痛，活血化淤等功效，用于治疗跌打损伤，外伤出血，筋骨疼痛，骨质增生等症［3］。独一味胶囊系独一味加工制成的制剂，具有活血止血、化淤止血的功效，用于多种外科手术后的刀口疼痛、出血，外伤骨伤，筋骨扭伤，风湿痹痛等症［4］。独一味生长于海拔3 000 m以上的高原或高山上强风化的碎石滩中或生长在盘山冰峰脚下的石质高山草甸、河滩草地等，分布于我国西藏、青海、云南、四川、甘肃等省区［5］。药材来源较为广泛，其品质优良有待考察。本实验参考《中国药典》（2005年版Ⅰ部）独一味及独一味胶囊项下含量测定法，考察不同产地独一味、同一产地不同部位的品质差异，为该药材及其制剂的质量控制提供一定的参考。
1 仪器与试药
UV2501-P型紫外可见分光光度计（日本岛津）。高效液相色谱仪（Waters515泵,Waters2487 Dual λ Absorbance Detector）；SR2000色谱工作站（上海三锐科技有限公司）；木犀草素对照品（Sigma公司）；甲醇（HPLC级）、盐酸，磷酸（分析纯）、双蒸水。芦丁（中国药品生物制品检定所），亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇等均为分析纯。
独一味药材采自西藏江孜等6个不同产地，经中国人民解放军第二军医大学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定为唇形科植物独一味Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo。
2 方法
2.1 总黄酮含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备取在120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇70 ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为0.2 mg·ml-1的储备液。
2.1.2 标准曲线的制备精密量取对照品储备液1，2，3，4，5，6 ml，分别置25 ml量瓶中，加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的溶液为空白，在500 nm处测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标、浓度（C）为横坐标，得标准曲线：A = 0.011 9C－0.005 1，r=0.999 8，结果显示，在8.0～48.0 μg·ml-1浓度范围线性关系良好。
2.1.3 样品溶液的制备及测定法独一味根及地上部分，于60℃烘干48 h，研细，过60目筛，备用。取粉末约1.0 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇70 ml，置水浴上微热并时时振摇30 min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，放置4 h，精密量取上清液1 ml，置25 ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6 ml”起，依法测定吸光度，代入标准曲线，计算样品溶液中无水芦丁的量。
2.2 木犀草素含量测定
2.2.1 HPLC条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（5 μm，200 mm×4.5 mm，美国迪马公司），柱温：室温；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（55∶45），检测波长：350 nm，流速1 ml·min-1；进样量20 μl；灵敏度：AUFS = 1.0。理论塔板数按木犀草素峰计算不低于1 500。
2.2.2 对照品溶液的制备精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每毫升含30 μg的溶液，即得对照品溶液。
2.2.3 样品的制备独一味根及地上部分，于60℃烘干48 h，研细，过60目筛，备用。取粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5 mol·L-1盐酸甲醇溶液25 ml，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再精密称定，用2.5 mol·L-1盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得样品溶液。
2.2.4 样品测定方法分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，按色谱条件测定。对照品及样品HPLC色谱图见图1。
图1 木犀草素对照品及样品HPLC图谱（略）
3 结果
3.1 总黄酮含量测定结果同一产地的药材分为地上（简称地上）和地下（简称根）两部分，测定结果显示，不同产地独一味的总黄酮含量有一定差异，其中德钦含量最高，可达3.93%，石渠含量最低为2.18%，相差近一倍，而同一产地不同部位的含量相近。见表1。
3.2 木犀草素含量测定结果见表1。 木犀草素含量测定结果显示：同一产地独一味地上部分和根中木犀草素含量差异很大，地上部分除石渠外都达到药典规定的“每克药材按干燥品计，含木犀草素不低于0.15%”的标准，根的含量则都远低于此标准；不同产地独一味地上部分中木犀草素含量波动较大，其中江孜含量最高，达0.455%，而石渠含量仅0.082%，相差近4倍。
表1 独一味中总黄酮和木犀草素含量（略）
4 讨论
实验参考药典进行，方法简单易行，准确方便。结果显示，同一产地独一味根和地上部分总黄酮含量相近，而木犀草素含量测定结果表明根和地上部分相差甚远，这提示独一味根和地上部分的黄酮类成分的种类不同，进一步提示不同部位所含有效成分不同。不同产地独一味中木犀草素和总黄酮的含量都有差异，进一步证实独一味化学成分的含量与生长环境因素有着重要关系。按照《中国药典》（2005年版Ⅰ部）的要求，不同产地的独一味品质差异较大，直接影响药材及其制剂使用的有效性。独一味药材的品质有待规范，产地、采收时间等因素对黄酮类成分含量的影响有待进一步考察。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版杜，2005：122.
［2］ 王 煜，张智艳，程明和．独一味化学成分研究进展与临床应用［J］.药学实践杂志，2006，24(2)：73.
［3］ 马维宁．藏药独一味及制剂的药理及临床研究概述［J］.中国民族医药杂志，2005，2 (1)：39.
［4］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版杜，2005：541．