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       【摘要】 
       目的提取峨眉山粗老茶中茶多糖并测定其含量。方法采用水提醇析法提取茶多糖；蒽酮-硫酸分光光度法测定茶多糖含量；Sevage法除蛋白；由换算因子计算茶多糖含量。结果峨眉山粗老茶中茶多糖平均含量为4.23%，RSD=2.12%，加样回收率 99.2%，RSD为1.82%。结论不同品种中，峨眉山粗老茶中茶多糖含量较高。
       【关键词】  峨眉山粗老茶 茶多糖 提取
       茶多糖(Tea po1ysaccharides，简称TPS)是茶叶中一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或酸性糖蛋白。近年来文献报道，茶多糖具有降血糖、降血压、耐缺氧及增加冠状动脉血流量、增强机体免疫功能、抗癌、抗氧化等多方面的生物学功能。峨眉山以其独特的自然资源优势，丰富的茶叶资源著称。据报道［1］,茶叶越粗老,多糖含量越高。目前市场上粗老茶（茶树修剪下的枝叶，茶叶加工过程中的枝叶和灰末等副产品，品质较劣的茶叶）利用率较低,若从其中提取茶多糖则可变废为宝,能为中低档茶叶的综合利用开辟一条新途径。
       1  材料与仪器
       1.1  材料粗老茶（购自峨眉山市售散装等外茶叶或采于峨眉山报国寺周边的茶树老叶）。
       1.2  试剂实验中所用化学试剂均为分析纯。
       1.3  蒽酮-硫酸试液配制方法将0.667 1 g蒽酮溶于200 ml浓硫酸，置于棕色瓶中冷藏备用。
       1.4  仪器TU1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；KQ2200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  含量测定
       2.1.1  茶叶多糖的提取与精制称取40目干燥茶叶粉末20 g，置索氏提取器中，100 ml石油醚（沸程60～90℃）90℃水浴回流脱脂1 h，过滤，挥干溶剂，200 ml 80%乙醇90℃水浴回流1 h，重复2次。双层滤布过滤，滤渣加400 ml蒸馏水，沸水浴回流提取1 h，间歇搅拌，重复1次，合并两次滤液，离心分离(4 000 r·min-1，10 min)，真空浓缩(50℃，0.09 MPa)至20 ml。Sevage法除蛋白。加入4倍量无水乙醇，4℃过夜醇沉，离心分离，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗两次，红外干燥（60℃），即得精制茶多糖。称重得精制茶多糖0.944 7 g，得率为4.72%。
       2.1.2  标准曲线的绘制称取无水葡萄糖对照品适量，加蒸馏水配成1.000 8 mg·ml-1的标准溶液。精密移取对照品溶液1，2，4，6，8，10 ml，分别置100 ml容量瓶，各加水至刻度，摇匀。分别精密移取上述标准溶液各2.0 ml，置具塞试管中，以2 ml蒸馏水作空白，每管再加8 ml蒽酮-硫酸试液，立即摇匀，冰水浴冷却。沸水浴中加热7 min，流动水冷却至室温，10 min后在575 nm处测定吸光度，以吸光度（A）对葡萄糖浓度（C）作回归处理，得回归方程：C=105.038 33 A－7.249 89，r=0.999 5，线性范围：10.008～100.08 μg·ml-1。
       2.1.3  换算因子的测定精确称取干燥至恒重的精制茶多糖0.010 5 g，蒸馏水溶解，定容于25 ml容量瓶，90℃水浴加热，超声1 min增溶，摇匀，制得茶多糖贮备液。蒽酮-硫酸法测定其吸光度（A），由回归方程求出贮备液中葡萄糖浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后溶解性降低，故按“2.1”中的方法制得多糖提取液后取等量两份，经醇沉洗涤后，一份直接加蒸馏水溶解（复水性好），定容，测定吸光度和茶多糖含量；另一份干燥至恒重，称得精制茶多糖的干重，由二者计算平均换算因子f。
       
       f=W/(C×D)（1）
       
       式中：W为称取多糖的重量(mg)，C为精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度(mg·ml-1)，D为多糖的稀释因素。测出换算因子f=12.1。
       2.1.4  样品含量测定样品溶液的制备:精确称取40目茶粉1 g，加80%乙醇40 ml，95℃水浴回流1 h，趁热抽滤，滤渣用80%热乙醇洗涤(10 ml×2)。挥干溶剂后，滤渣连同滤纸置于烧瓶中，加100 ml蒸馏水，100℃水浴浸提1 h，趁热抽滤，滤渣用热蒸馏水洗涤(10 ml×2)，合并滤液，离心分离(4 000 r·min-1，10 min)，上清液置于100 ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确称取上述样品溶液1 ml，置于100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，90℃水浴加热，超声1 min增溶，摇匀，制得茶多糖样品液，蒽酮-硫酸分光光度法法测定其吸光度（A），由回归方程计算试液中葡萄糖浓度（C），按下式计算样品中茶多糖平均含量为4.23%，RSD=2.12%（n=5）。
       
       多糖含量(%)=C×D×f/W×100%（2）
       
       式中：C为供试液中葡萄糖浓度（mg·ml-1），D为多糖的稀释因素，f为换算因子，W为供试茶样的重量(g) 。
       
       重复性:精确称取40目峨眉山茶树老叶粉各1 g，由式（2）计算茶叶多糖含量，RSD=2.12%（n=5）。
       
       稳定性:精确吸取按“样品溶液的制备”项下方法制取的粗老茶提取液1 ml 于具塞试管中，按照“2.1.2“项下方法处理，每间隔1 h测定吸光度，RSD=0.23%（n=5），显色在5 h内稳定。
       
       加样回收率:精确称取3份40目茶树老叶粉各1 g，加入精制茶叶多糖约20 mg，按“重复性”项下方法测定茶叶多糖含量，计算回收率。结果见表1 。
       表1  加样回收率测定结果（略）
       3  讨论
          
       文献报道，采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸分光光度法测定多糖的含量均能得到理想的结果［2］，但在实验中发现，苯酚-硫酸分光光度法不稳定，容易造成测定误差，故用蒽酮-硫酸分光光度法。蒽酮-硫酸分光光度法测定茶多糖时，用0.05%的蒽酮-硫酸，蒽酮-硫酸与茶多糖体积比4∶1，100℃反应5 min，575 nm 测定吸光值，用葡萄糖作标准，可提高茶多糖测定的准确度。
       
       陈建国等［3］报道不同茶叶样品中，茶多糖含量有很大的差异，其含量在1.29%～4.53%之间。峨眉山粗老茶中茶多糖平均含量为4.23%，含量较高，具有进一步的研究开发价值。
       【参考文献】
         　　［1］ 谢明勇,聂少平.茶叶多糖的研究进展［J］.食品与生物技术学报，2006,25(2):107.
       
       ［2］ 杨 辉.蒽酮-硫酸比色法测定玉竹多糖含量的研究［J］.安徽医药，2006,10(8):587.
       
       ［3］ 陈建国,胡 欣,梅 松.茶叶中茶多搪的提取和测定方法［J］.中国卫生检验杂志，2004,14（4）:432.