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       【摘要】 
       目的建立苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：迪马C18色谱柱，甲醇－水（30∶70）为流动相，检测波长270 nm 。结果龙胆苦苷在0.049 72～1.491 6μg之间线性关系良好，r=0.999 98，回收率为97. 7％，RSD 为 1.3％。结论该方法操作简单，分离效果好，灵敏度高，可作为苦胆草胶囊的质量控制标准。
       【关键词】  高效液相色谱 苦胆草胶囊 龙胆苦苷
       苦胆草胶囊由苦胆草片［1，2］经剂型改变的品种，由龙胆组成，具有清热燥湿、泻肝胆火等功效［3］，用于湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、强中、湿疹瘙痒、目赤、耳聋、胁痛、口苦、惊风抽搐。龙胆中主要有效成分为龙胆苦苷 ［2］。为控制产品质量，保证疗效，本文采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷的含量，以期为该制剂的质量控制提供参考。
       1   仪器与试药
          
       LC-2010C 高效液相色谱仪, LC-2010C紫外检测器，龙胆苦苷（中国药品生物制品检定所 110770-200409含量测定用），甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司），重蒸水，其它试剂为分析纯，苦胆草胶囊（沈阳康晨药业有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  溶液的制备
       2.1.1   对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品12.43 mg，置50    ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
       2.1.2  供试品溶液的制备取重量差异项下的内容物适量，研细，混匀，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超声处理40 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液3 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
       2.1.3   阴性对照液的制备照处方比例制备缺龙胆的苦胆草胶囊，照“2.1.2”项下操作，制备阴性对照液。
       2.2   色谱条件色谱柱：迪马 C18 (4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水（30∶70），检测波长：270 nm ，流速：1 ml·min-1，柱温：30℃，进样量：供试品溶液、对照品溶液、阴性液各5 μl，在此色谱条件下，龙胆苦苷可与其它成分基线分离，阴性组分无干扰。结果见图1。
       2.3   线性范围的考察分别精密吸取龙胆苦苷对照品（浓度为0.049 72 mg·ml-1）1，2 μl和龙胆苦苷对照品（浓度为0.099 44 mg·ml-1）2，5，10，15 μl对照品溶液注入液相色谱仪中，按前述色谱条件在270 nm波长处测定，以进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，方程为：Y=1 937 112X-3 060（r=0.999 98）, 可见，龙胆苦苷进样量在0.049 72～1.491 6 μg范围内，线性关系良好。
       2.4  精密度实验照样品项下实验方法进行提取，精密吸取同一供试品溶液（批号050601），连续进样6次，测定色谱峰面积，RSD为0.7％，表明精密度良好。
       2.5   稳定性实验考察照样品项下实验方法进行提取，精密吸取同一供试品溶液（批号050601）5 μl ，分别于配制后0，4，6，8，12 h测定峰面积，RSD为0.8%，结果显示，供试品溶液制备后12 h内基本稳定。
       a-样品色谱图  b- 阴性样品色谱图  c-龙胆苦苷对照品色谱图  1.龙胆苦苷
       图1  苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定色谱图（略）
       2.6   重复性实验照样品项下实验方法进行提取，精密称取供试品（批号050601）6份样品，各0.5 g，分别按样品测定项下方法操作，结果RSD为1.1％。表明本品测定方法重复性良好。
       2.7   加样回收率实验采用加样回收实验方法，取供试品（批号050601）含龙胆苦苷为22.541 6 mg·g-1的样品约0.12 g，置25 ml容量瓶中，分别精密加入龙胆苦苷对照品溶液（C=0.636 6 mg·ml-1）5 ml，加入甲醇15 ml，按样品含量测定方法操作。测定结果见表1。
       表1  龙胆苦苷含量测定回收率实验（略）
       2.8   样品含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表2 。
       表2  不同批号中龙胆苦苷含量测定结果（略）
       3  讨论
          
       本实验比较了超声20，30，40 min不同时间龙胆苦苷的提取率，结果40 min提取的得率与50 min的相同，因此确定提取时间为40 min。
       
       将对照品龙胆苦苷适量溶于甲醇中，进行光谱扫描，在波长270 nm处有最大吸收，故选定270 nm为龙胆苦苷的检测波长。
       
       龙胆苦苷的含量测定方法已有文献报道［4～6］。本文建立的方法具有样品处理简单的特点，本品含量测定理论板数按龙胆苦苷苷峰计算应不低于3 000时，样品分离良好。
       
       采用本方法测定龙胆中龙胆苦苷的含量，样品分离良好且准确、简便、迅速。
       【参考文献】
         　　［1］ 江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1977：627.
       
       ［2］ 中华人民共和国卫生部药政局.卫生部药药品标准·中药成方制剂，第8册［S］ .WS3－B－2163－96.
       
       ［3］ 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分分析［M］.北京：人民卫生出版社，1986：497.
       
       ［4］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：64.
       
       ［5］ 王 臣，邢秀芳，马力祥，等.栽培条叶龙胆各形态类型龙胆苦苷含量的测定［J］.中国中药杂志，2004，29（9）：841.
       
       ［6］ 黄铭涛，许 波，田颂九.HPLC法测定肝胃气痛胶囊中龙胆苦苷的含量［J］.中国药事，2007，21（9）：731.