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       【摘要】 
       目的探讨迷迭香提取物对小鼠的抗缺氧作用。方法健康小鼠随机分为4组：正常对照组，迷迭香低、中、高剂量(1，2，4 g/kg)组。除正常对照组外，其余3组每天ig迷迭香提取物1次，正常对照组ig同等容量的生理盐水，连续30 d。通过小鼠常压耐缺氧实验，亚硝酸钠中毒小鼠存活时间实验，小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间实验以及游泳后血乳酸测定实验研究迷迭香提取物的耐缺氧功能。结果与正常对照组相比，迷迭香提取物能明显延长亚硝酸钠中毒后的小鼠存活时间, 急性脑缺血性缺氧状态下小鼠存活时间和小鼠常压耐缺氧时间，并且能够明显降低游泳后小鼠血清乳酸含量。结论迷迭香提取物能提高小鼠的耐缺氧能力。
       【关键词】  迷迭香提取物 缺氧耐受力 小鼠
       迷迭香Rosmarinus officinalis L.系唇形科(Labiatae)迷迭香属植物，是目前公认的具有较高抗氧化作用的一种植物［1］。迷迭香提取物是一种高效天然抗氧化剂，有抗炎、免疫抑制、抗癌等多种活性，并且广泛应用于食品工业中［2］。目前,对迷迭香提取物的研究主要集中在分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性等方面,而对其耐缺氧作用的研究却不多见。本实验通过研究迷迭香提取物对小鼠耐缺氧能力的影响，对迷迭香提取物的耐缺氧作用及其机理进行初步探讨。
       1  材料
       1.1  药品迷迭香提取物粉剂(迷迭香酸：10.6%)：上海康九化工有限公司生产，批号：SP060703-1。山东农业大学国家作物生物学实验室对其主要成分进行了HPLC分析鉴定。亚硝酸钠分析纯：安徽省肖县化学试剂厂产品, 批号：20050812。                               
       1.2   动物健康KM小鼠，体重(20±2)g，雄性。由中澳合资米歇尔生物制品有限公司动物中心提供，生产许可证：SCXK（鲁）20030011。在温度为(22±2 )℃，湿度40%～60 %，12 h光照交替的环境中饲养。自由进食标准饲料、摄水。
       2  方法
       2.1   分组与给药小鼠适应性喂养1周后随机分为4组：正常对照组、迷迭香低剂量组(1 g/kg)、迷迭香中剂量组(2 g/kg)，迷迭香高剂量组(4 g/kg)。除正常对照组外，其余3组每天ig迷迭香提取物1次，正常对照组ig同等容量的生理盐水，连续30 d。每6天称体重一次，根据体重调整用药量。
       2.2  常压耐缺氧实验末次给药1 h后，将各组小鼠逐只放入盛有15 g 钠石灰的250 ml密闭的广口瓶内，每瓶1只，加盖以凡士林密封瓶口，观察并记录每只小鼠呼吸停止作为缺氧死亡时间。
       2.3  亚硝酸钠中毒存活实验末次给药1 h后，各组小鼠ip 220 mg/kg亚硝酸钠，注射完毕立即计时,记录小鼠中毒后存活的时间。
       2.4  急性脑缺血性缺氧实验末次给药1 h后，各组动物自颈部逐只断头,立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间(以小鼠张口呼吸停止且舌头外露为标志停止计时)。
       2.5  血乳酸测定实验末次给药24 h后，各组小鼠分别在温度37℃，深40 cm游泳池中游泳, 45 min后，取出小鼠，摘眼球取血，通过比色分析法测定血清乳酸含量。
       2.6  统计学处理  采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行单因素方差分析，各项数据均以±s表示。
       3  结果
       3.1  迷迭香提取物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响由表1可见，与正常对照组相比，迷迭香各剂量组都能提高小鼠常压耐缺氧时间，尤以中、高剂量效果最为显著(P＜0.05)，但低剂量组无统计学意义(P＞0.05)。
       表1  迷迭香提取物对衰老小鼠常压耐缺氧时间的影响（略）
       与正常对照组比较，﹡P＜0.05；n =10
       3.2  迷迭香提取物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响由表2可见，与正常对照组相比，迷迭香低、中剂量组能明显提高小鼠亚硝酸钠中毒存活时间(P ＜0.05)，高剂量组能显著提高存活时间(P ＜0.01)。
       表2  迷迭香提取物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响（略）
       与正常对照组比较，﹡P ＜0.05, ﹡﹡P ＜0.01；n =10
       3.3  迷迭香提取物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响由表3可见，与正常对照组相比，迷迭香高剂量组能明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间(P ＜0.05)，低、中剂量组无统计学意义(P ＞0.05)。
       表3  迷迭香提取物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响（略）
       与正常对照组比较，﹡P ＜0.05；n =10
       3.4  迷迭香提取物对小鼠运动后血乳酸含量的影响由表4可见，与正常对照组相比，迷迭香提取物各剂量组都能明显降低游泳后小鼠血清乳酸含量，尤以中、高剂量效果最为显著(P＜0.01)。
       表4  迷迭香提取物对小鼠运动后血乳酸含量的影响（略）
       与正常对照组比较，﹡P ＜0.05,﹡﹡P ＜0.01；n =10　
       3.5  迷迭香提取物对小鼠体重的影响给药迷迭香提取物后，各组动物的饮食和活动正常。由图１可见，迷迭香各剂量组小鼠在实验结束后体重与正常对照组相比，均无明显差异，无统计学意义(P ＞0.05)。表明迷迭香提取物对小鼠体重增长无影响作用。
       图1  迷迭香提取物对小鼠体重的影响（略）
       4  讨论
          
       缺氧是一种紧张性刺激, 缺氧可使机体自由基系统紊乱，导致自由基大量堆积，抗氧化酶活性降低，脂质过氧化反应增强。正常情况下，人体内的自由基的产生与清除是处于一种动态平衡中的。低氧条件下，自由基不能及时清除，造成机体组织内氧自由基的堆积，进而发生强烈的脂质过氧化反应［3］。
       
       常压耐缺氧实验是小鼠全身性缺氧实验，相比之下,心脏和脑缺氧是导致小鼠死亡的主要原因。实验结果显示：迷迭香提取物中、高剂量能显著提高小鼠的常压耐缺氧时间。在实验室研究中,常用大剂量NaNO2和断头作为常见的模型去模拟临床脑缺氧/缺血所产生的神经减退性疾病［4］。NaNO2进入机体后，使血红蛋白变成高铁血红蛋白，与羟基牢固的结合,不能转化成亚铁血红蛋白,从而不能运输氧气，造成脑和机体重要器官、组织供氧不足而死亡［5］。结果显示：迷迭香提取物各剂量组都能明显延长亚硝酸钠中毒存活时间，提示迷迭香提取物能缓解并延长细胞外液缺氧，使细胞利用氧的效率提高，增加红细胞血红蛋白含量，从而延长中毒存活时间。在急性脑缺血性缺氧实验中，高剂量的迷迭香提取物能明显延长小鼠断头后喘气时间，提示迷迭香提取物可能通过提高机体组织氧的利用率，增加有氧氧化酶的活性,提高机体的带氧和供氧能力。
       
       游泳是全身消耗性运动，剧烈的运动消耗大量的能量和氧气，同时产生大量的乳酸。机体在一定负荷量运动后，肌细胞对能量的需求量猛增，而磷酸肌酸系统的快速供能所能维持的时间很短，且机体处在高度缺氧状态，主要依靠无氧糖酵解供给能量，所以血乳酸值显著增加［6］。结果显示,与正常对照组比较，迷迭香提取物能显著减少小鼠游泳结束后血乳酸值。提示迷迭香提取物可能使乳酸氧化供能的速度加快, 使糖无氧、有氧代谢供能系统的中间环节-乳酸的消除趋向优化发展，在两者之间形成良好循环，从而提高机体糖代谢系统的供能水平，减少蛋白质代谢供能的比例，提高抗缺氧能力。
       
       迷迭香提取物是一种高效天然抗氧化剂，目前已分离出的迷迭香抗氧化组分主要有鼠尾草酚(carnosol)，鼠尾草酸(carnosic acid)，迷迭香酚(rosmanol)，迷迭香酸(rosmarinic acid)等。其中鼠尾草酸、迷迭香酸和迷迭香酚是迷迭香提取物中的3种最有效的抗氧化组分［7］。依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的提高缺氧耐受力功能检验方法与结果判定标准，迷迭香提取物具有提高小鼠抗缺氧能力的作用。其机理有可能是由于迷迭香提取物中的抗氧化组分能增强小鼠的抗应激能力，提高对缺氧刺激的适应能力，并通过调节体内各种代谢酶的活性，降低耗氧量，清除自由基，增加抗氧化酶活性，抑制或降低脂质过氧化反应，从而抑制缺氧造成的血液流变学变性改变等来实现其抗缺氧作用，其作用机制仍有待深入研究。
       【参考文献】
         　　［1］ 程伟贤，陈鸿雁，张义平，等．迷迭香化学成分研究［J］.中草药，2005,36(11):1622．
       
       ［2］ 冷桂华，邹佑云．迷迭香在食品工业中的应用［J］.安徽农业科学，2007，35(21):6587．
       
       ［3］ 李国莉，杨建军. 宁夏枸杞对密闭缺氧小鼠自由基防御体系的影响［J］.卫生研究，2002,31（1）:30.
       
       ［4］ 商亚珍,蔡振岭,孟艳彬,等.黄芩茎叶总黄酮对小鼠脑缺氧的保护作用［J］.承德医学院学报,2001,18(1): 5.
       
       ［5］ 姜兆蕊，李 静，韩志峰，等. 灯盏花素抗小鼠脑缺氧作用［J］.时珍国医国药, 2007,18(10): 2372.
       
       ［6］ 龚晨睿，李宇红，马 良，等. 红景天复合制剂对小鼠运动代谢指标的影响［J］.湖北预防医学杂志, 2002, 13(6):5.
       
       ［7］ 曹树稳，余燕影,温辉梁，等. 迷迭香提取物的抗乳腺癌活性研究［J］．营养学报，2001，23(3): 225.